ARTICULOS ORIGINALES

 

 

Validación de un ELISA para la cuantificación de antitoxina tetánica en suero humano.

 

Validation of an ELISA for the quantitative determination of tetanus antitoxin in human serum.

 

 

Rolando Ochoa, Juan Carlos Martínez, Esther M. Fajardo, Eduardo Alvarez, Eric Estrada, Ana Margarita García, Xenia Ferriol, Rosa Blanco, Franklin Sotolongo.

Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.
E-mail:[e-mail]

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RESUMEN

Se desarrolló un ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA) de tipo indirecto para la cuantificación de
antitoxina tetánica en suero humano, con el empleo de un estándar previamente calibrado. Las imprecisiones
intra e interensayo fueron de alrededor del 10%. Este ensayo mostró una excelente exactitud, con valores de
recuperación entre 90% y 110%. Las desviaciones del paralelismo estuvieron por debajo del 10%; éstas se
evaluaron mediante diluciones que involucraban el rango de trabajo de la curva estándar. El límite de detección
fue 0,0016 Unidades Internacionales por mL (UI/mL). El ensayo mostró una buena correlación con la prueba de
neutralización (R2=0,9862). La ecuación de ajuste lineal fue: ELISA = 0,993 ensayo de neutralización – 0,2143.
Se cuantificó la antitoxina tetánica en muestras de suero de 408 niños entre 1 a 5 años de edad,aleatoriamente seleccionados en Ciudad de La Habana y cada edad se analizó por separado. La mayor respuesta se alcanzó a los 2 años de edad, al completarse el esquema básico de inmunización. Todos los niños presentaron valores superiores al nivel mínimo protector (0,01 UI/mL).

Palabras claves: Antitoxina tetánica, ensayo inmunoenzimático, ELISA, validación.

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ABSTRACT

An indirect solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for the quantitation of tetanus antitoxin in human serum on the basis of a previously calibrated standard. Intra and inter-assay imprecision ranged around 10%. This assay showed an excellent accuracy with recovery values between 90% and 110%. Parallelism deviations were below 10%. They were evaluated by dilutions that covered the working range of the standard curve. The detection limit was 0.0016 International Units per mL (IU/mL). A good correlation was found between the ELISA and the neutralization test (R2= 0,9862). The fitting linear equation was: ELISA = 0,993; neutralization test – 0,2143. Tetanus antitoxin was quantified in serum samples from 408 children, 1-5 year-olds, randomly selected in Havana City. Each age was separately analyzed. The maximum response was reached at 2 years, after finishing the basic scheme of immunization. All children showed antitoxin values higher than the minimum protective level (0,01 IU/mL).

Key words: tetanus antitoxin, enzyme immunoassay, ELISA, validation.

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