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Vaccimonitor

versión impresa ISSN 1025-028Xversión On-line ISSN 1025-0298

Vaccimonitor v.11 n.3 Ciudad de la Habana sep.-dic. 2002

 

ARTICULOS ORIGINALES

 

Validación de una técnica colorimétrica para la determinación de carbohidratos.

 

Validation of a colorimetric technique for carbohydrate determination.


Carmen Soto, Maribel Cuello, Yusimí Alfonso, Osmir Cabrera y Gustavo Sierra.

Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.
E-mail: csoto@finlay.edu.cu


RESUMEN

La adecuada estandarización de un ensayo analítico, seguido de la validación del método y la homogeneidad de los reactivos químicos y biológicos a lo largo de los diferentes estudios, son elementos imprescindibles para alcanzar óptimos resultados. En este trabajo se seleccionó una metodología para la validación del método analítico empleado en la determinación de ribosa por el método del orcinol y se utilizó una solución estándar de ribosa (0,025 mg/mL). Se realizó un análisis de los criterios fundamentales de validación: linealidad, precisión, exactitud, sensibilidad, especificidad, límites de detección y robustez. Se comprobó la utilidad de dicho procedimiento y se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que dicho método es lineal (r2>0,98), exacto (Fexp.< Ftab. y texp. < ttab.), preciso (CV<3 %), sensible (LD = 1 ug/mL y LC = 3.3 ug/mL) y específico (respuesta no significativa), por lo cual es confiable. La determinación de ribosa es una técnica colorimétrica que cuantifica pentosas y se emplea con el objetivo de conocer el contenido exacto de la misma en una muestra de producto purificado. Además es empleada como control final según la OMS en las vacunas conjugadas de Haemophilus influenzae.

Palabras claves: Orcinol, ribosa, validación, Haemophilus influenzae.


Abstract


The appropriate standardization of an analytical assay, followed by the validation of the method and the
homogeneity of the chemical and biological reagents used during the different studies are indispensable elements for obtaining optimal results. In this work a methodology was selected for the validation of the analytical method used to determine ribose by the orcinol method using a standard ribose solution (0,025 mg/mL). An analysis of the main validation criteria: linearity, precision, accuracy, sensitivity, specificity, detection limits and robustness were carried out. The usefulness of this procedure was demonstrated and by means of the experimental design and the statistical procedures used, the linearity (r2>0,98), exactness (Fexp. <Ftab. and texp. <ttab.), preciseness (CV<3%), sensitivity (LD = 1 ug/mL and LC = 3.3 ug/mL) and specificity (non significant answer) of the method were verified, for which reasons it is considered reliable. The determination of ribose is a colorimetric assay that quantifies pentoses and is used with the objective of knowing the exact pentose contents in a sample of purified product. It is also used as a final control for Haemophilus influenzae conjugated vaccines according to WHO.

Keywords: Orcinol, ribose, validation, Haemophilus influenzae


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