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Vaccimonitor

versión impresa ISSN 1025-028Xversión On-line ISSN 1025-0298

Vaccimonitor v.12 n.4 Ciudad de la Habana oct.-dic. 2003

 

ARTICULOS ORIGINALES

 

Procedimientos para la obtención de reactivos biológicos de los estuches DAVIH Ag P24 y DAVIH Ac P24.

 

Procedures for obtaining the biological reagents for the DAVIH Ag P24 and DAVIH Ac P24 kits.


Nancy M. Ruiz, Giselle Alvarez y Enrique Noa.

Laboratorios DAVIH. Carretera de Jamaica y Autopista Nacional. San José de las Lajas. La Habana, Cuba. E-mail: cicdc@infomed.sld.cu


RESUMEN

La pandemia de SIDA es uno de los problemas actuales más graves que afectan a la humanidad. Como todavía no se cuenta con una vacuna efectiva a pesar de los esfuerzos realizados por científicos en todo el mundo, la utilización de drogas antirretrovirales para mejorar la calidad de vida de los pacientes es lo que ha resultado más exitoso, de ahí la importancia de poseer medios para realizar un diagnóstico temprano de la infección y para monitorear su progresión con el objetivo de poder actuar sobre ella. El presente trabajo describe la obtención de los componentes biológicos que se requieren para la producción de dos estuches que se utilizan en nuestro país en todos los estudios que tienen relación con la infección VIH-SIDA. Para ello se realizó un protocolo que incluyó varias etapas de purificación e inmovilización de diferentes moléculas. Como resultado se obtuvieron la proteína de 24 Kd del VIH-1 y anticuerpos monoclonales y policlonales humanos contra esta proteína, con adecuados grados de pureza y actividad biológica. La combinación de etapas en este protocolo, permitió ir obteniendo productos que además de utilizarse en la etapa siguiente también por sí mismos, algunos de ellos, constituyeron reactivos de los estuches.

Palabras claves: purificación, anticuerpos monoclonales, inmovilización, p24, VIH-1, anticuerpos policlonales humanos.


ABSTRACT

AIDS epidemic is one of the most serious problems affecting humanity today. Since science, despite all the great efforts made by scientists throughout the world, has not been able to find an effective vaccine to cure this disease, the use of anti-retroviral drugs has given the most successful results in improving life quality of AIDS patients. Hence, the importance of having the means to carry out an early diagnosis of the infection, as well as monitoring its progression with the purpose of having an influence on it. The present research work describes the obtaining of biological components required for the production of two kits used in Cuba for all HIV-AIDS related studies. To achieve this, a protocol was made that included different stages in the purification and immobilization of several molecules. Monoclonal antibody anti p24, HIV-1 p24, and polyclonal human antibodies anti p24 were obtained, with an adequate level of purity and biological activity allowing its use as intermediate products in the above mentioned stages and as reagents comprised in the kits.

Keywords: purification, monoclonal antibodies, immobilization, p24, HIV-1, polyclonal human antibodies.


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REFERENCIAS

1. Rubio M, Nogues A, Falguera M y Puig T. The prognostic markers of HIV infection progression. A study of the p24 in a cohort of 251 patients. An. Med. Interna. 1999; 16:447-50.

2. Pascale JM, Isaacs MD, Contreras P, Gómez B, Lozano L, Austin E, De Martin MC et al. Immunological markers of disease progresión in patients infected with the human immunodeficiency virus. Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1997; 4:1-9.

3. Díaz HM, Ribas MA, Lubián AL, Pérez L, Izquierdo M y Silva E. Marcadores de progresión sexológicos y celulares en pacientes cubanos infectados por VIH-1. Rev. Cubana Med. 2001; 40:10-6.

4. Díaz HM, Silva E, Rodríguez O, Bárcena J, Lubián AL y Joanes J. Uso del ELISA DAVIH Ac P24 en el seguimiento clínico de personas infectadas por el VIH-1. LAB-acta; 1995; 8:15-8.

5. Beirnaert E, Willems B and Peeters M. Design and evaluation of an in-house HIV-1 (group M and O), SIV and SIVcpz antigen capture assay. J. Virol. Methods; 1998; 73:65-70.

6. Wang H, English NJ and Reid CD. Role of betachemokines in HIV-1 infection of dendritic cells maturing from CD34+ stem cells. J. Acquir. Immun. Defic. Syndr. 1999; 21:179-88.

7. Saiffudin M, Hart ML and Gewurz H. Interaction of mannose-binding lectin with primary isolates of human immunodeficiency virus type 1. J. Gen. Virol. 2000; 4:949-55.

8. Díaz HM, Ribas MA, Lubián AL, Joanes J y Ricardo ME. Antigenemia P24: correlación con algunos aspectos clínicos y epidemiológicos en 100 individuos cubanos infectados por VIH-1. Rev. Cubana Med. Trop. 2001; 53:137-44.

9. Lobaina L, Noa E, Dubed M, Navea L, Vilarrubia OL y Díaz H. Isolation and virological characterization of HIV-1 in Cuba. Relationship with the clinical status of the patients. Biomedicine & Pharmacotherapy; 1996; 50:501-504.

10. Noa E, Lobaina L, Dubed M, Vilarrubia OL, Díaz HM, Rodríguez O, Lubián AL et al. Aislamiento, Caracterización de las Cepas de VIH-1 y Título de Anticuerpos contra la p24 en Seropositivos con Progresión Rápida y Lenta al SIDA; Biotecnología Aplicada; 1997; 14:233-236.

11. Toledo H, Baly A, Castro O, Resik S, Laferté J, Rolo F, Navea L et al. A phase I clinical trial of a multi-epitope polypeptide TAB 9 combined with Montanide ISA 720 adjuvant in non-HIV-1 infected human volunteers. Vaccine; 2001; 19: 4328-4336.

12. Noa E, Menéndez de San Pedro JC, Pérez MT, Cruz O, Rubial I, González N et al. purificación de antígeno HTLV-I para Western blot. Avances en Biotecnología Moderna. Libro de Reportes Cortos. 1994; 2:81.

13. Tsang VCW, Hanclock and Wilson M. Enzymelinked immunoelectrotransfer blot technique (Western blot) for human T-lymphotropic virus type III/lymphadenopathy-associated virus (HTLV/LAV) antibodies. En: U.S. Department of Health and Human Services Immunology Series, publication no. 15. CDC, Atlanta; 1985.

14. Lowry OH, Rosembrough NJ, Farr AL and Randall RJ. Protein measurement with folin phenol reagent. J. Biol. Chem; 1951; 193:265-69.

15. Chávez MA, Díaz J, Pérez U y Delfín J. Temas de Enzimología. Tomo II. Facultad de Biología. Universidad de la Habana; 1990.

16. Cartellieri S, Helmholz H and Niemeyer B. Preparation and Evaluation of Ricinus communis Agglutinin Affinity Adsorbents Using Polymeric Supports. Anal. Biochem. 2001; 295: 66-75.

17. Grana R, Silva E, Ruiz N y Pérez MT. Purificación de la proteína de 24 Kd natural (p24) del virus de inmunodeficiencia humana tipo-1 (VIH-1) utilizando inmunoafinidad. Rev. Cub. Med. Trop. 1996; 48: 98-101.

18. Gavilondo JV. Anticuerpos policlonales y monoclonales. En: Anticuerpos monoclonales. Teoría y Práctica. Elfos Scienteae. La Habana; 1995.

19. Ey PL, Prowse SJ and Jenkin CR. Isolation of pure IgG1, IgG2a and IgG2b immunoglobulins from mouse serum using Protein A Sepharose. Immunochemistry. 1978; 15:429-436.

20. Veronese FM, Copeland TD and Oroszlan S. Biochemical and Immunological analysis of Human Immunodeficiency Virus gag Gene Products p17 and p24. J. Virol. 1988; 62:795-801.

21. Cheynet V, Verrier B and Mallet F. Overexpression of HIV-1 proteins in Escherichia coli by a modified expression vector and their one-step purification. Protein Expr. Purif. 1993; 4:367-72.

22. Kurstak E. Progress in enzyme immunoassays: production of reagents, experimental design, and interpretation. Reviews Analyses. Bulletin of the World Health Organization 1985; 63:793-811.

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