ARTICULOS ORIGINALES

 

Evaluación de dos métodos biológicos (Subcutáneo e Intradérmico) para detectar Toxina Diftérica.

 

Evaluation of two different Biological Methods (Subcutaneous and Intradermal) for detecting Diphtheria Toxin

 

Esther María Fajardo, Eduardo Álvarez, Boris Ruiz, Pedro Muñoz.

Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana. Cuba. E-mail: [e-mail]

 

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RESUMEN

Los Requisitos de la Organización Mundial de la Salud establecen los ensayos de toxicidad específica y reversión a la toxicidad de la anatoxina diftérica purificada como controles obligatorios del proceso productivo. El método propuesto para evaluar la toxicidad específica consiste en inocular curieles por vía subcutánea (método subcutáneo) con 1 mL del producto conteniendo 500 Lf/mL; señalan como posibles el ensayo en cultivos celulares y la inoculación intradérmica (método intradérmico) de 20 Lf en curieles o conejos. Para la reversión a la toxicidad no se propone un método determinado, sólo que debe aprobarlo la Autoridad Reguladora Nacional y ser suficientemente sensible para detectar pequeñas cantidades de toxina.
Por la importancia de estos ensayos que garantizan la seguridad del producto, se evaluaron ambos métodos, fundamentalmente sobre la base de su límite de detección (empleando concentraciones conocidas de una toxina diftérica de referencia), pero también con relación al cumplimiento del principio ético de las “tres Erres” (Reemplazo, Reducción, Refinamiento) y el tiempo requerido para obtener resultados. El método intradérmico resultó más sensible que el subcutáneo (límite de detección de 0,0067 x 10-4 Lf/mL vs 4,17 x 10-4 Lf/mL), requiere menos animales (2 vs 5 por muestra), su punto final es una reacción local (eritema), sin muerte (cumple con 2 “Erres”), es más corto (48 h vs 6 semanas) y por tanto, más económico. Se recomienda realizar los estudios correspondientes para introducirlo en los ensayos rutinarios de toxicidad específica y reversión a la toxicidad de la anatoxina diftérica purificada obtenida en el Instituto Finlay.

Palabras claves: Difteria, Anatoxina, Toxicidad Específica, Reversión.

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ABSTRACT

The World Health Organization Requirements establish tests to determine both specific toxicity and reversion to toxicity of the purified diphtheria anatoxin as mandatory controls for the production process. The proposed method to evaluate the specific toxicity consists in the subcutaneous inoculation (subcutaneous method) of Guinea pigs with 1 mL of the product containing 500 Lf/mL; other suggested possible methods are those using cell-cultures and the intradermal inoculation (intradermal method) of 20 Lf in Guinea pigs or rabbits. No specific method is proposed for the reversion to toxicity test; it only should be approved by the National Regulatory Authority and be sufficiently sensitive to detect small amounts of toxin. Due to the importance of those tests for supporting the safety of the product, both methods were evaluated, mainly in terms of their detection limits (by using known concentrations of a reference diphtheria toxin), but also related to the fulfilment of the ethical “3 Rs” principle (Replace, Reduction, Refinement) and the overall time required for the results. The intradermal method resulted more sensitive than the subcutaneous one (detection limit 0.0067 x 10-4 Lf/mL vs 4.17 x 10-4 Lf/mL), requires less animals (2 vs 5 per sample), its end-point is a local reaction (erythema) instead of death (meets 2 “Rs”) and it is shorter in time (48 h vs 6) weeks and therefore more economic. It is recommended to carry out the corresponding studies for its introduction in the routine specific toxicity and reversion to toxicity tests performed on the purified diphtheria anatoxin produced at Finlay Institute.

Keywords: Diphtheria, Anatoxin, Specific Toxicity, Reversion.

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REFERENCIAS

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