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Vaccimonitor

versión impresa ISSN 1025-028Xversión On-line ISSN 1025-0298

Vaccimonitor v.13 n.3 Ciudad de la Habana sep.-dic. 2004

 

ARTICULOS ORIGINALES

 

Determinación de las condiciones de ensayo óptimas en un ELISA para la detección de anticuerpos séricos IgG anti-LPS de Pseudomonas aeruginosa O11.

 

 

Determination of the optimal assay conditions for an ELISA to detect serum IgG antibodies against Pseudomonas aeruginosa O11 lipopolysaccharide.

 

Tania Valmaseda, Lázaro Alba, Rolando Ochoa, Aniel Moya, Yadira Pino, Sara Catalina Esnard.

Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de la Habana, Cuba. E-mail: tvalmaseda@finlay.edu.cu

 


RESUMEN


La selección de sueros de donantes sanos para la obtención de una gamma hiperinmune contra la infección por Pseudomona aeruginosa, así como la evaluación de la respuesta inmunológica de cualquier candidato vacunal contra este microorganismo necesita contar en el laboratorio con técnicas estandarizadas. En este trabajo se realizaron los ensayos necesarios para el montaje y la optimización de un ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos séricos de clase IgG anti- LPS de P. aeruginosa O11. Se evaluaron la concentración de recubrimiento, condiciones de bloqueo, dilución de trabajo de las muestras a evaluar y del conjugado con el fin de seleccionar en cada caso las mejores respuestas para el control positivo, el control negativo y el blanco del ensayo. Una concentración de 1,5 μg/mL de LPS O11 en PBS toda la noche a 4 °C como recubrimiento, la necesidad de no incluir un paso adicional de bloqueo y el conjugado humano anti IgG-HRP diluido 1:3000, 1 h a 37 °C resultaron las variables óptimas para el ensayo. Por otra parte, se estableció el rango lineal de la curva del control positivo y se seleccionó la dilución de trabajo 1:100 para las muestras de sueros a evaluar.

 

Palabras claves: Pseudomonas aeruginosa, inmunoglobulina, lipopolisacárido, ELISA, estandarización.


ABSTRACT

An indirect quantitative ELISA was developed for the evaluation of the immune response elicited by Pseudomona aeruginosa vaccine candidates, and for obtaining hyperimmune immunoglobulins to be used in the medical treatment. Standard and control sera were made, and the optimal LPS coating dilution of the polystyrene plates, and the sample and conjugate dilutions were established. A 1.5 μg/mL concentration of O11 LPS in PBS, incubated for 16-20 h at 4°C were found to be the best coating conditions.The blocking step was unnecessary. A 1:100 dilution for the serum samples and 1:3000 for the anti-human IgG:HRP conjugate were selected. Accurate quantitative determinations were possible in the lineal range of the standard curve.

Keywords: Pseudomonas aeruginosa, immunoglobulin, lipopolysaccharide, ELISA, standardization.


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