INSTITUTO SUPERIOR DE MEDICINA MILITAR. "DR. LUIS DÍAZ SOTO" LABORATORIO DE MEDICINA HERBARIA

Tamizaje, tecnología, control de calidad y farmacología del extracto fluido de Bouganvillea spectabilis Willd

Lic. Aida Corral Salvado,¹ Lic. José De la Paz Naranjo,² Lic. Evelyn Concepción Evseeva,³ My. (SM) Ricardo Hernández Royero⁴ y Téc. Doralbis Lorelay López Rodríguez⁵

RESUMEN

Se trabajó en la estandarización de droga cruda, elaboración y control de calidad del extracto fluido de las hojas de Bouganvillea spectabilis Willd, cultivar brácteas rosadas, para lo cual se utilizó un menstruo hidroalcohólico al 50 % ; además se realizó el tamizaje fitoquímico a la especie vegetal, fresca y seca. Paralelamente se evaluó su efecto farmacológico en ratas normoglicémicas en las dosis de 50, 150, 250, 500, 750 y 1 000 mg/kg y en ratas insulino-resistentes en la dosis de 500 mg/kg; no se encontró en ninguno de los ensayos actividad hipoglicemiante con un nivel de significación estadística a < 0,05.

Descriptores DeCS: EXTRACTOS VEGETALES/farmacología; CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; COMPOSICION DE MEDICAMENTOS; PLANTAS MEDICINALES; EVALUACION DE MEDICAMENTOS/métodos; GLUCOSA DE LA SANGRE/efectos de drogas; RATAS WISTAR

En los últimos años las plantas medicinales han tomado un notable auge, lo que ha representado un resurgimiento de la medicina tradicional; esto se debe en gran parte a la necesidad de buscar nuevos medicamentos que posean el efecto terapéutico deseado, fundamentalmente para dar soluciones a problemas de salud como la diabetes mellitus, de gran incidencia en nuestro país. Uno de los objetivos que se debe cumplir es la búsqueda de plantas que contribuyan al tratamiento de esta enfermedad; por lo cual nos dimos a la tarea de probar el posible efecto hipoglicemiante de la Bouganvillea spectabilis Willd, cultivar brácteas rosadas de la familia de las Nictaginaceas, conocida popularmente como flor de papel, buganvilea y zarza americana, en modelo animal de ratas insulino-resistentes inducido por dexametasona y en ratas normoglicémicas.

MÉTODOS

MATERIAL VEGETAL

La planta analizada Bouganvillea spectabilis, cultivar brácteas rosadas, se colectó en los alrededores del Instituto Superior de Medicina Militar (ISMM) "Dr. Luis Díaz Soto" de La Habana del Este en Ciudad de La Habana, en los meses transcurridos desde noviembre de 1995 hasta marzo de 1996. Dicha especie pertenece a la familia de las Nictaginacea. Entre los nombres vernáculos más utilizados se encuentran: flor de papel, buganvilea y zarza americana. En la medicina tradicional ha sido utilizada como diurético, antifúngico y antidiabético.

La parte de la planta utilizada fueron las hojas; éstas se colectaron de forma manual, posteriormente requirieron ser beneficiadas mediante un lavado y luego sometidas a secado en estufa con recirculación de aire a temperatura entre 37 y 40 ^oC durante 24 h.

El material secado fue molinado de forma mecánica del cual se obtuvo un producto de partículas gruesas. En la etapa de recolección de las hojas, la planta se encontraba en estadio de floración, ésta fue previamente clasificada como la variedad ya mencionada con la identificación botánica del herbario del Jardín Botánico Nacional, con el número HAJB 72069.

ESTUDIO FITOQUÍMICO

Tamizaje fitoquímico

Se realizó el tamizaje fitoquímico a las hojas de la planta fresca y seca, según el principio de extracción de los metabolitos secundarios más importantes con solventes de polaridad creciente (éter, etanol y agua).

El método que se utilizó fue el descrito por el Departamento de Farmacognosia de la Universidad Médica de Budapest, en Hungría, introducido en nuestro país por el Departamento de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Alimentos de la Universidad de La Habana.

Los ensayos realizados se observan a continuación:
 

Ensayos	Metabolitos
Dragendorff	alcaloides
Baljet	lactonas
Borntrager	quinonas
Liebermann Burchard	triterpenos y esteroides
Sudán III	aceites y grasas
Ninhidrina	aminas
Fehling	azúcares reductores
Cloruro	férrico taninos y fenoles
Selivoflo	saponinas
Shinoda	flavonoides
Kedde	glicósidos cardiotónicos

ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO

Análisis de la droga cruda

En el estudio de la droga cruda se realizaron las determinaciones que establece la Norma Ramal de Salud Pública para tales efectos.¹

ESTUDIO DEL EXTRACTO FLUIDO

Tecnología de elaboración

El extracto fluido fue preparado con el material vegetal seco y molinado, mediante el método de percolación en un solo paso, como se describe en la Norma Ramal de Salud Pública.²

El menstruo utilizado fue alcohol etílico al 50 %, según el ensayo anterior de determinación de sustancias extractivas en diferentes menstruos, éste fue el de mejores resultados.

El proceso de elaboración se unificó a 24 h en todos los casos. La concentración de la cola se realizó en un equipo rotoevaporador Heidolph W 2001.

ANÁLISIS DEL EXTRACTO FLUIDO

Para realizar el estudio de esta forma farmacéutica se siguieron las determinaciones descritas en la Norma Ramal de Salud Pública propuestas para estos fines.³

ESTUDIO FARMACOLÓGICO

Para conocer el posible efecto hipoglicemiante del extracto fluido de Bouganvillea spectabilis fueron utilizadas ratas machos de la línea isogénica Wistar con peso corporal de 220 ± 20 g, seleccionadas al azar de las existentes en el vivario del ISMM "Dr. Luis Díaz Soto". Fueron mantenidas en una habitación según las normas establecidas para el cuidado y uso de los animales de experimentación, durante el tiempo del experimento.⁴

EVALUACIÓN DEL EXTRACTO FLUIDO EN RATAS NORMOGLICÉMICAS

En este ensayo las dosis que se evaluaron fueron: 50, 150, 250, 500, 750 y 1 000 mg/kg, para lo cual se formaron 6 grupos de 10 animales cada uno (n=10).

Dos grupos más en igualdad de condiciones fueron formados; el primero de éstos no recibió droga alguna y fue considerado control y el segundo, recibió sólo el menstruo hidroalcohólico al 50 % en un volumen equivalente a la dosis máxima evaluada (1 000 mg/kg), por lo que se consideró grupo menstruo.

Ambos, extracto fluido y menstruo, fueron administrados mediante sonda gástrica tras previo ayuno de 18 h y posterior a una primera extracción de sangre por el plexo orbitario,⁵ para la determinación de glucosa sérica según el método de la glucosa-oxidasa.⁶

Después de un período de 2 h se les practicó a todos los animales una segunda extracción sanguínea por igual vía y se determinó la glicemia por el mismo método, culminando así este ensayo.

EVALUACIÓN DEL EXTRACTO FLUIDO EN RATAS INSULINO-RESISTENTES

En este ensayo fueron empleadas 40 ratas, 30 previamente tratadas con dexametasona en solución de bicarbonato de sodio 0,1 mol/L, a una concentración de 100 m g/mL por vía subcutánea, 2 veces al día en una dosis de 1 mL durante 4 días. Las 10 ratas no tratadas sólo se les administra 1 mL de solución de bicarbonato de sodio con igual frecuencia y vía de administración; de aquí se forman los siguientes grupos experimentales de 10 animales cada uno.^7-10

1. Control.
2. Dexametasona.
3. Dexametasona + extracto fluido (500 mg/kg).
4. Dexametasona + menstruo (en un volumen equivalente a la dosis de 500 mg/kg).

El día del experimento, previo ayuno de 18 h, les fue practicado a todos los animales una extracción inicial de sangre y seguidamente se administró el extracto o el menstruo según el grupo. Una hora después se comenzó la prueba de tolerancia a la glucosa (PTG) intraperitoneal (3 g/kg de peso) y se realizó una segunda extracción sanguínea a las 2 h de la sobrecarga. La sangre se extrajo del plexo orbitario y la glucosa fue medida por el método de la glucosa-oxidasa.^5,6

ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Los resultados fueron almacenados en una base de datos y procesados mediante el paquete estadístico computadorizado Microstat. Después de comprobada la normalidad de los datos, se realizó un ANOVA de una sola vía y un test de Duncan "a posteriori" en ambos ensayos. Se utilizó como criterio de significación p < 0,05. En todos los grupos experimentales la muestra fue igual a 10 (n=10).

RESULTADOS

TAMIZAJE FITOQUÍMICO

Se determinaron los principales metabolitos secundarios que presentó la especie estudiada: triterpenos y esteroides, aminas y azúcares reductores (tabla 1). TABLA 1. Resultados del tamizaje fitoquímico  

Extractos	Ensayos	Metabolitos	Planta fresca	Planta seca
	Dragendorff	Alcaloides	-	-
	Baljet	Lactonas	-	-
Éter	Borntrager	Quinonas	-	-
	Liebermann-Burchard	Triterpenos y esteroides	++	++
	Sudán III	Aceites y grasas	-	-
	Baljet	Lactonas	-	-
	Rosenheim	Leucoantocianidinas	-	-
	FeCl3/salina	Fenoles y taninos	-	-
	Ninhidrina	Aminas	+++	+++
	Selivoflo	Saponinas	-	-
	Fehling	Azúcares reductores	++	++
Etanol	Shinoda	Flavonoides	-	-
	Dragendorff	Alcaloides	-	-
	Borntrager	Quinonas	-	-
	Liebermann-Buechard	Triterpenos y esteroides	+++	+++
	Shinoda	Flavonoides	-	-
	Kedde	Glicósidos cardiotónicos	-	-
	Dragendorff	Alcaloides	-	-
	FeCl3/salina	Taninos	-	-
	Fehling	Azúcares reductores	+++	+++
	Prueba del frío	Mucílagos	-	-
	Selivoflo	Saponinas	-	-

ESTUDIO FARMACOGNÓSTICO

El estudio farmacognóstico con la droga cruda no mostró variaciones cualitativas de los parámetros estudiados entre las diferentes colectas.

En los requisitos macromorfológicos se mostró como hojas alternas, limbo anchamente aovado a suborbicular a redondo-oval, de 5 a 10 cm de largo y de 2,5 a 6,5 cm de ancho, abruptamente agudo o acuminado en el ápice y densamente velloso en el envés, por lo regular.

En los requisitos micromorfológicos, se observaron en el corte transversal de la hoja, cutícula fina con una capa de células de epidermis en la haz, una capa de parénquima en empalizada de células alargadas que abarcan las 2/3 partes del mesófilo, abundantes paquetes de rafidios, aspecto significativo en esta planta; además, parénquima esponjoso compacto, estomas proyectados en el envés, escasos pelos pluricelulares en la haz, nervio medio hundido en la haz y prominente en el envés. Estos resultados se observan en la tabla 2.

Tabla 2. Resultados de los análisis de la droga cruda  

Cosechas	Requisitos macromorfol.	Requisitos micromorfol.	Cenizas totales (%)	Cenizas sol. Agua (%)	Cenizas sol. Ácido (%)	Contenido de humedad (%)	Determinación sust. Solubles (%)
Noviembre	Responde	Responde	19,40	7,08	2,55	17,00	39,90
Diciembre	Responde	Responde	12,15	5,62	2,24	10,00	31,72
Enero I	Responde	Responde	13,46	7,34	1,41	6,07	29,91
Enero II	Responde	Responde	12,68	5,50	1,94	6,13	25,08
Febrero I	Responde	Responde	13,51	5,56	1,83	6,68	24,44
Febrero II	Responde	Responde	11,71	5,50	1,50	7,51	15,95
Marzo	Responde	Responde	12,48	6,46	1,82	13,29	28,60

ESTUDIO DEL EXTRACTO FLUIDO

El extracto fluido de Bouganvillea spectabilis presentó un color ámbar oscuro, ligeramente verdoso, transparente en capa fina y olor característico, mantuvo sus características con el tiempo, conservó su transparencia y no presentó sedimentación.

En el análisis capilar se obtuvo una imagen de color pardo-verdoso, de altura normal, presentando una franja profundamente dentada y una subfranja con mayor intensidad de color, no se observaron banda ni subbanda.

Al exponer la imagen a los vapores de amoníaco no se distinguen cambios de coloración, al igual que al ser expuesta bajo luz ultravioleta. Se observan los resultados en la tabla 3.

TABLA 3. Resultados de los análisis de los extractos fluidos  

Lotes	Requerimientos organolépticos	Ph	Índice de refracción	Densidad relativa	Análisis capilar	Sólidos totales (g/dL)	Contenido alcohólico(%)
Noviembre	Responde	7,0	1,356	0,998	Responde	7,8	18,04
Diciembre	Responde	6,5	1,377	1,023	Responde	16,4	27,07
Enero I	Responde	6,6	1,371	1,005	Responde	11,7	19,50
Enero II	Responde	6,5	1,374	0,995	Responde	11,3	33,37
Febrero I	Responde	6,6	1,376	1,004	Responde	13,6	25,53
Febrero II	Responde	6,6	1,373	1,005	Responde	11,8	27,07
Marzo	Responde	6,5	1,377	1,034	Responde	18,5	27,07

ESTUDIO FARMACOLÓGICO

Efecto hipoglicemiante en ratas normoglicémicas

La administración oral del extracto fluido de Bouganvillea spectabilis, elaborado con un menstruo hidroalcohólico al 50 %, no produjo una reducción significativa de la glicemia en los animales que recibieron la dosis de 50 y 150 mg/kg, pero sí con las restantes dosis evaluadas (250-1 000 mg/kg).

Por otra parte, cuando se comparó el grupo menstruo con el control, esta reducción resultó ser estadísticamente significativa también (tabla 4).

TABLA 4. Efecto del extracto fluido de Bouganvillea spectabilis sobre los niveles de glucosa en ratas normoglicémicas
 

Dosis	Valores de glucosa en sangre (mmol/L)		± DE
(mg/kg)	Inicial	2 h	Diferencias
Control	5,52	5,43	0,15 ± 0,32
50	5,07	4,75	0,32 ± 0,22
150	4,61	4,06	0,55 ± 0,46
250	4,77	4,15	0,72 ± 0,66^*
500	5,21	4,30	0,91 ± 0,36^*
750	5,06	4,22	0,84 ± 0,55^*
1 000	5,40	4,42	0,98 ± 0,65^*
Menstruo	5,14	4,07	1,07 ± 0,57^*

^* p < 0,05. Diferencias significativas contra el control.

Efecto sobre la glicemia en ratas con insulino-resistencia

En esta experiencia se comprobó que el extracto fluido de Bouganvillea spectabilis en la dosis de 500 mg/kg, administrado por vía oral 1 h antes de la sobrecarga intraperitonial de glucosa a ratas insulino-resistentes, no modificó los valores de glucosa a las 2 horas de comenzada la prueba al ser comparados con el grupo control y dexametasona (tabla 5).

Tabla 5. Efecto del extracto fluido de Bouganvillea spectabilis sobre los niveles de glicemia en ratas insulino-resistentes
 

	Valores de glucosa en sangre (mmol/L)		± DE
Grupo	Inicial	2 h	Diferencias
Control	4,12	5,09	0,97 ± 0,27
Dexametasona	4,83	12,05	7,22 ± 0,36^*
Extracto fluido	4,51	11,71	7,20 ± 0,31^* ns
(500 mg/kg)
Menstruo	4,41	11,56	7,15 ± 0,31^* ns

^* P < 0,05 (diferencias significativas contra el control). ns p > 0,05 (diferencias no significativas contra el grupo dexametasona).

DISCUSIÓN

TAMIZAJE FITOQUÍMICO

Según los resultados obtenidos de este estudio pudimos comprobar que no existen diferencias evidentes entre la presencia de metabolitos en las hojas frescas con respecto a las hojas secas, por lo que pudiera pensarse que los beneficios realizados a la planta no afectaron la composición de metabolitos presentes en la planta.

Se resalta que por este ensayo cualitativo, la especie no presenta ninguno de los metabolitos secundarios que hasta ahora se han reportado con acción hipoglicemiante en otras plantas estudiadas, como: alcaloides, taninos, polisacáridos y flavonoides.^11-14

ESTUDIO DE LA DROGA CRUDA

Los ensayos farmacognósticos con la droga cruda no mostraron diferencias cualitativas entre las variables en las determinaciones realizadas, aunque éstas no se hicieron durante el tiempo requerido para este tipo de trabajo, pues no se continuó probando repetibilidad porque no se demostró el efecto farmacológico.

ESTUDIO DEL EXTRACTO FLUIDO

Desde el punto de vista organoléptico el extracto fluido fue estable en el tiempo estudiado, ya que no existieron variaciones evidentes de color, olor, transparencia, aparición de fases y/o precipitados. De esta parte del trabajo no podemos dar resultados concluyentes, pues al no presentar el efecto farmacológico esperado, no procedía seguir aumentando las muestras para lograr la estandarización del extracto.

ESTUDIO FARMACOLÓGICO

En este estudio se observó que el extracto fluido de Bouganvillea spectabilis no posee efecto hipoglicemiante en ratas normoglicémicas 2 horas después de su administración por vía oral, y que la disminución significativa de los valores de glucosa encontrados en los especímenes que recibieron la dosis de 250-1 000 mg/kg fue causada por el contenido de alcohol presente en el extracto fluido y no por los metabolitos de la planta, ya que se observaron los mismos resultados cuando se administró el menstruo hidroalcohólico. Esto es perfectamente explicable si tenemos en cuenta el efecto hipoglicemiante del alcohol, ampliamente reportado en la literatura médica, donde se explica que es producto de una disminución de la gluconeogénesis por aumento de NADH causado por la oxidación del alcohol.¹⁵

En relación con el ensayo con ratas insulino-resistentes primeramente se demuestra que este estado patológico, inducido por la administración de dexametasona, se produjo en nuestros animales al comparar los niveles de glucosa del grupo que recibió el glucocorticoide con el control a las 2 horas de la sobrecarga intraperitonial de glucosa, donde se evidencia el deterioro de la tolerancia a los carbohidratos de este grupo experimental.

Por otra parte quedó demostrado también que el extracto fluido en la dosis de 500 mg/kg, administrado por vía oral, 1 h antes de la prueba de tolerancia a la glucosa intraperitonial, tampoco tiene efecto hipoglicemiante en ratas insulino-resistentes ya que no favoreció la entrada de glucosa a la célula y por tanto, la glicemia a las 2 horas continuó elevada al igual que en los grupos menstruo y dexametasona.

En resumen se puede plantear que este extracto fluido no posee efecto hipoglicemiante en nuestras condiciones experimentales. Sin embargo, Deshmikh y Banerjee encontraron dicho efecto cuando realizaron sus experiencias con esta especie.^16-18

Por nuestra parte consideramos que estas diferencias pueden ser condicionadas por múltiples aspectos, ya que en estos trabajos es muy importante tener en cuenta las distintas variedades y cultivar de la planta, la edad y el estado vegetativo en que se encuentre la especie al ser colectada, lo que no fue esclarecido en los trabajos consultados, también determina entre otros las condiciones edafoclimáticas.

CONCLUSIONES

1. El extracto fluido de Bouganvillea spectabilis con un menstruo hidroalcohólico al 50 % en dosis de 50, 150, 250, 500, 750 y 1 000 mg/kg de peso no posee efecto hipoglicemiante en ratas normoglicémicas.
2. El extracto fluido de Bouganvillea spectabilis con un menstruo hidroalcohólico al 50 % en la dosis de 500 mg/kg de peso no posee efecto en ratas insulino-resistentes.

RECOMENDACIONES

Estudiar las restantes variedades de la especie de Bouganvillea spectabilis que crece en Cuba con el objetivo de buscar la posible acción hipoglicemiante.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. NRSP-309. Medicamentos de origen vegetal. Droga cruda. Métodos de ensayos. La Habana: Ministerio de Salud Pública, 1992.
2. NRSP-31. Medicamentos de origen vegetal. Extractos y tinturas. Procesos tecnológicos. La Habana: Ministerio de Salud Pública, 1992.
3. NRSP-312. Medicamentos de origen vegetal. Extractos fluidos y tinturas. Métodos de ensayo. La Habana: Ministerio de Salud Pública, 1992.
4. Villar J. Recomendaciones de la declaración de Helsinki sobre investigaciones clínicas y guías principales en el cuidado y uso de laboratorio. Med Clin 1988;91:702-3.
5. Riley V. Adaptation of orbital bleeding technique to rapid serial blood studies. Proc Soc Biol Med 1960;104:751.
6. Werner W, Rey HG, Wielinger H. God- perid method.
7. Analyt Chem 1970;252:224.
8. Deas M, Crespo S, González R. Estudio del mecanismo de acción hipoglicemiante de la albahaca morada (Occinum santum L.) IV. Efecto sobre la resistencia a la insulina inducida por dexametazona en modelos animales. Rev Cubana Farm 1988;22(1): 101-8.
9. Calle C. Interrelación del páncrea endocrino con las glándulas suprarrenales. En: Blázquez E, Tamarit J. Los islotes de Langerhans: un órgano multiendocrino. Editorial Ramón Areces, 1990:409-17.
10. Fernández P. Estudio histofuncional del hígado tras la administración de esteroides. Rev Esp Enf Apar Digest 1988;74 (4-1):305-11.
11. Williams RH. Suprarrenales. Tratado de endocrinología. 5^ta. ed. La Habana: 1987:260-6. (Edición Revolucionaria).
12. Mngola EN. The uses of traditional medicines for diabetes. En: Krall LP. ed. World book of diabetes in practices. England: Elsevier Science, 1988;vol 3:125-30.
13. Khan BA, Leilamn S. Hypoglicemic action of Murraya koenigir (curry leaf) and Brassica juncea (mustard): mechanism of action. Indian J Biochem and Biophys 1995;32:106-8.
14. Vinod K, Augusti KT. Insulin sparing action of a leucocyanidin derivative isolate from Ficus bengalensis L. Indian J Biochem biophys 1994;31:73-6.
15. Gomez A, Verasiromoni JR, Das M. Antihyperglicemic effect of blac tea (Camellia sinensis) in rats. J Ethnopharmacol 1995; 45:223-6.
16. Feling P, Havel RJ, Smith LlH. Efecto del alcohol. En: Smith LlH, Thier SO. Fisiopatología. Buenos Aires: Médica Panamericana,1986;vol 1:474.
17. Deshmikh A. Nature of hipoglicaemic action of leaf juice of Bouganvillea spectabilis. Indian J Indigen Med 1992;8(2): 65-6.
18. . Hypoglicaemic activity of Bouganvillea spectabilis. Probe 1992;31(3):254-6.
19. Barnejee R. Evaluation of hypoglicaemic properties of alcoholic extract of Bouganvillea spectabilis on experimental animal model. Intern Sem Trad Med 1992:137.

Recibido: 7 de julio de 1997. Aprobado: 10 de julio de 1997.

Lic. Aida Corral Salvado. Instituto Superior de Medicina Militar. Dr. "Luis Díaz Soto". Avenida Monumental y Carretera de Asilo. CP 11700. Habana del Este, Ciudad de La Habana, Cuba.

¹ Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
² Licenciado en Bioquímica. Aspirante a Investigador.
³ Licenciada en Ciencias Farmacéuticas.
⁴ Especialista de I Grado en Bioquímica Clínica. Profesor Auxiliar.
⁵ Técnica medio en Química Analítica.