INSTITUTO DE NEUROLOGÍA Y NEUROCIRUGÍA

Perfil neurofarmacológico del Cestrum nocturnum L. (galán de noche)

Lic. María Teresa Buznego Rodríguez,¹ Lic. Niurka León Alonso,² Lic. Marta Elena Acevedo González,¹ Lic. Mirta Llanio Villate,¹ Lic. Miguel David Fernández Pérez³ y Dr. Héctor Pérez-Saad⁴

RESUMEN

Se analiza el perfil neurofarmacológico de la decocción de hojas secas de Cestrum nocturnum mediante su administración aguda. Para ello se utilizaron la prueba de Irwin, la conducta exploratoria, las pruebas de analgesia, el modelo de estereotipias inducidas por anfetamina y en el íleon aislado de curiel con estimulación transmural. La decocción D30 afectó el perfil neurológico, manifestado por una relajación muscular y disminución de los reflejos, así como el prefil conductual, por una disminución de los reflejos, así como el perfil conductual, por una disminución de la respuesta al dolor y con un aumento de la pasividad. Esta decocción también produjo una hipoactividad en la conducta exploratoria de los animales. Las decocciones de la planta redujeron la respuesta al dolor, tanto en el método del plato caliente (D30) como en la prueba del ácido acético (D1, D5 y D30). A su vez D10 redujo las contracciones del íleon aislado estimulado eléctricamente a baja frecuencia. Estos resultados tomados en conjunto definen un perfil hipnoanalgésico de la planta.

Descriptores DeCS: EXTRACTOS VEGETALES; PLANTAS MEDICINALES; NEUROFARMACOLOGIA

Cestrum nocturnum es un arbusto cultivado en jardines por sus flores aromáticas, pertenece a la familia Solanáceas. El extracto de la planta se ha utilizado por la población como antiespasmódico, contra erupciones cutáneas y especialmente, en la epilepsia.¹

Reportes de la literatura médica refieren que la decocción de hojas secas de la planta presenta acción antiepiléptica, lo que resulta de interés evaluar los efectos neurofarmacológicos generales de ésta (Buznego MT, De La Guardia C, Pérez-Saad H. Effecto del Cestrum nocturnum L. [galán de noche] sobre el foco penicilínico fuerte. II Congreso Internacional de Neurología y Neurocirugía, Ciudad de La Habana, diciembre, 1992) (Buznego MT, Fernández MD, Pérez-Saad H. Efecto anticonvulsivante de Cestrum nocturnum L. [galán de noche]. VII Congreso Panamericano de epilepsia. Ciudad de La Habana, enero, 1995).

Es nuestro objetivo analizar el perfil neurofarmacológico de la decocción de hojas secas de la planta, mediante su administración aguda en la prueba de Irwin, la conducta exploratoria, las pruebas de analgesia, el modelo de estereotipias inducidas por anfetamina y en el íleon aislado de curiel con estimulación transmural.

MÉTODOS

La especie C. nocturnum fue identificada por el doctor Víctor Fuentes y registrada con el número de herbario Roig 4633, en la Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig" de la Industria Farmacéutica. Fue recolectada en los meses de abril y mayo de 1996.

Los experimentos se realizaron en ratones de la línea OF1 y ratas Wistar, machos, de 18 a 22 g y de 150 a 200 g de peso corporal respectivamente. Se prepararon decocciones de 1; 5; 10 y 30 g en 100 mL de agua destilada (D1, D5, D10 y D30, respectivamente) con un tiempo de decocción de 10 min; luego se completó el volumen inicial.

Los extractos y la solución salina fueron administrados por vía intraperitoneal en volúmenes de 0,01 mL/g de peso corporal, 20 min antes de comenzar la observación.

En general, se utilizaron 4 grupos de animales, a los cuales se les administraron D1, D5, D30 y solución salina (NaCl, 0,9 %), correspondientemente.

PRUEBA DE IRWIN

Esta prueba se realizó por un observador entrenado. Se emplearon 5 animales por cada decocción. La conducta se observó mediante el empleo de un recipiente circular de 30 cm de diámetro y 25 cm de altura, con piso desmontable.² Ninguna de las dosis empleadas provocó la muerte y no se observaron signos autonómicos severos. Todos los ensayos se realizaron en horas de la mañana (8:00 a.m. a 12:00 m.).

CONDUCTA EXPLORATORIA

La conducta exploratoria fue observada en ratones mediante un recipiente de campo abierto con una pared de 15 cm de alto y un diámetro de 30 cm. (Palmer R. Universidad de McGill, Montreal, Canadá, 1985. Comunicación personal). En el piso se dibujó un círculo concéntrico de 10 cm de diámetro. La observación comenzó con la colocación del animal en el círculo central y a partir de ese momento se midieron los parámetros siguientes: 1. latencia (tiempo inicial transcurrido en el círculo central); 2. número de empanamientos; 3. número de veces que el animal atraviesa el círculo central-conducta diagonal y 4. tiempo total transcurrido en el círculo durante el tiempo de observación. Se emplea un cronómetro manual-mecánico y el tiempo total de observación fue de 6 min.

ESTEREOTIPIAS INDUCIDAS POR ANFETAMINA

Se utilizaron 3 grupos de ratas, se les administraron D5, D30 y solución salina (NaCl 0,9 %), correspondientemente. Luego, recibieron anfetamina (1,5 mg/kg sc) 5 min antes de comenzar la observación.³ Los animales fueron colocados en cajas de 25 x 25 x 25 cm, con pared frontal de plexiglass transparente. En esta pared se dibujaron 2 rayas horizontales a la altura de 8 y 12 cm en relación con el piso de la caja, lo cual definió 3 zonas, de abajo hacia arriba: a, b y c. En dependencia de la posición de la cabeza y/o las patas delanteras, con la altura de las rayas, se le asignó un valor a cada estereotipia: 0 (zona a), 1 (zona b) y 2 (zona c). Las demás conductas como olfateo, mordisqueo, lengüeteo, etcétera recibieron el valor de 1. El tipo y presencia de las estereotipias fueron recogidos por un observador según un método de muestreo de tiempo, en el cual se realizó una observación a cada animal, cada 5 min., durante 3 horas.

PRUEBAS DE ANALGESIA

Prueba del ácido acético. Se inyectó por vía intraperitoneal ácido acético al 0,8 % y se observaron inmediatamente las contorsiones y estiramientos producidos durante 20 min.

Plato caliente. Los ratones se colocaron sobre un plato metálico, éste en contacto directo !mediante unas paletas soldadas en su superficie inferior! con el agua de un ultratermostato.⁴ Los desplazamientos de los animales sobre el plato se registraron mediante un cilindro de vidrio de 10 cm de diámetro y 15 cm de altura. La temperatura empleada fue de 54 ± 1 ^oC durante 2 min. El tiempo de reacción se tomó como el tiempo de demora de lamido de una de las patas traseras o salto.

ÍLEON AISLADO DE CURIEL

Se empleó íleon aislado de curiel estimulado eléctricamente según Paton.^5,6 Se tomaron fragmentos de 2 cm a partir de 20 cm de la unión íleocecal y se colocaron en un baño de órgano de 20 mL de capacidad. Para la estimulación se emplearon 2 electrodos de platino, uno de los cuales atravesó la luz del íleon y el otro se colocó a lo largo de la pared interna del baño. Se utilizó solución de Krebs a temperatura de 37 ^oC. Los parámetros de estimulación fueron: frecuencia (0,1 Hz), duración (0,5 ms) y 20 V. Después de un período de estabilización de 1 h, el íleon se estimuló eléctricamente hasta lograr regularidad en la amplitud de las contracciones. Para la diferenciación de los efectos neurales y musculares se empleó acetilcolina (2 m g/mL) y estimulación tetánica (50 Hz durante 5 s). Luego se añadió al baño 200 mL de D10.

RESULTADOS

PRUEBA DE IRWIN

El perfil de la conducta se encontró afectado por D30, lo que provocó un aumento de la pasividad y una disminución de la respuesta al dolor.

El perfil neurológico se encontró afectado por el empleo de D30 que en general produjo relajación muscular y disminución de los reflejos (tabla 1).

TABLA 1. Efectos de diferentes concentraciones de extracto acuoso de C. nocturnum sobre los perfiles conductual y neurológico
 

Perfil	Síntomas	Concentraciones
		D1	D5	D30
Conductual
	Desplazamiento visual			-
	pasividad			+++
	intranquilidad	+	+
	respuesta al dolor			---
Neurológico
	tono extremidades			+
	fuerza agarre		-	--
	tono muscular abdominal		-
	auricular			---

Cada signo (+) ó (-) es expresión de aumento o disminución de síntoma a partir de su nivel normal.

CONDUCTA EXPLORATORIA

Los números de cruces más empinamientos disminuyeron significativamente con la administración de D5 y D30, como se puede observar en la tabla 2.

El tiempo de permanencia en el cículo central aumentó significativamente (latencia) durante el tratamiento con D30.

TABLA 2. Efectos de diferentes concentraciones de extracto acuoso de C. nocturnum sobre la conducta exploratoria
 

	Solución salina	D1	Solución salina	D5	Solución salina	D30
Latencia (s)	8,5 (1,3)	6,5 (1,3)	5,2 (1,7)	6,2 (3,7)	15,9 (5,3)	122,0 (5,2)^*
T-circ. (s)	345,4 (2,7)	342,6 (1,9)	3,53,8 (1,7)	350,5 (7,4)	355,8 (1,9)	360,0 (0)
No. de cruces más empinamientos	20,6 (2,7)	27,1 (4,3)	18,0 (3,6)	0,6 (0,4)^*	19,8 (1,7)	0,9 (0,9)^*

(N= 10).
Los datos representan las medias y entre paréntesis el error estándar.
T-circ.: tiempo total transcurrido en el círculo.

^* p < 0,05 respeto a la solución salina (ANOVA y Duncan).

ESTEREOTIPIAS

Como se puede apreciar en la tabla 3, el extracto de la planta no tiene efecto sobre las estereotipias.

TABLA 3. Estereotipias en diferentes momentos después de la inyección de anfetamina en animales tratados previamente con el extracto acuoso de C. nocturnum
 

Tiempo (min)	Solución salina	D5	D30
30	18,6	14,7	21,2
60	40,0	38,8	42,2
90	59,6	60,7	55,8
120	80,2	74,6	67,3
150	97,2	88,0	75,7
180	110,6	93,1	81,2

(n = 8).

PRUEBAS DE ANALGESIA

Las decocciones D1, D5 y D30 disminuyeron significativamente los números de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético en forma dependiente de la dosis, y la decocción D30 prolongó el tiempo de reacción en el plato caliente (tabla 4).

TABLA 4. Efecto de diferentes concentraciones del extracto acuoso de C. nocturnum con el método de plato caliente y la prueba de ácido acético.
 

	Lamidos de patas o saltos (s)	Números de estiramientos y contorsiones
Solución salina	14,11	51,50
D1	12,10	15,80^**
D5	16,40	10,90^**
D30	17,77^*	4,40^**

(n = 12). ^* p < 0,01 diferencias significativas en relación con la solución salina (Kruskal-Wallis y la U de Mann-Whitney).

ÍLEON AISLADO DE CURIEL

La aplicación de 200 mL de D10 en el baño de órgano redujo 80 % la contracción del íleon inducida por la estimulación a baja frecuencia, sin afectar de forma ostensible la contracción inducida por acetilcolina (2 m g/mL), ni la estimulación tetánica (50 Hz) (estimulación directa del músculo), por lo que el efecto observado no puede atribuirse a un bloqueo de los receptores muscarínicos ni a una acción relajante inespecífica de las fibras musculares, sino a una disminución en la liberación de acetilcolina.

DISCUSIÓN

El efecto depresor de C. nocturnum sobre la conducta exploratoria y su efecto analgésico, mostrado en el plato caliente y en el modelo del ácido acético, junto con los datos de la prueba de Irwin, le definen a la planta un perfil hipnoanalgésico.

El efecto inhibidor de C. nocturnum sobre las concentraciones del íleon inducidas por la estimulación transmural a baja frecuencia, sin afectar la acción de la acetilcolina exógena ni la contracción del íleon inducida por la estimulación tetánica, se corresponde con la acción inhibidora de la liberación de acetilcolina de sustancias analgésicas, tanto de acción central como periférica.^6,7 En el primer caso se encuentran las drogas opiáceas, que actúan sobre los receptores "m", presentes en los axones colinérgicos de la unión neurofectora y reducen la liberación de acetilcolina durante la estimulación a baja frecuencia.⁶

En relación con esto, se ha demostrado que el orden de potencia de las drogas opiáceas en la producción de este efecto se corresponde con su orden de potencia analgésica.⁷ En el segundo caso, se encuentran medicamentos como la indometacina y la aspirina, que reducen la liberación de acetilcolina mediante el bloqueo de la síntesis de prostaglandinas, especialmente de las series E.⁸

No obstante, salvo el efecto depresor de C. nocturnum sobre la conducta, que surgiere una acción de carácter psicofarmacológico, a partir de estos resultados no se puede establecer con claridad el carácter periférico o central de la acción analgésica de la planta, para lo cual se requerirá de diseños más específicos y detallados.

En general, los resultados indican que C. nocturnum presenta efectos farmacológicos compatibles con el lugar asignado a esta planta, dentro de la clasificación que a manera de índice aparece en el libro de Roig, quien la incluye en el grupo de plantas medicinales narcóticas.¹

AGRADECIMIENTO

Muchas gracias a las técnicas Nancy Meléndez, Betty Cabreras y Edita Mustelier por la asistencia técnica brindada.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Roig JT. Galán de noche. En: Plantas medicinales, aromáticas y venenosas de Cuba. La Habana: Editorial Científico-Técnica, 1988:443-444.
2. Irwin S. Comphensive observational assessment; Ia. A systematic, quantitative procedure for assessing the behavioral and physiologic state of the mouse. Psichopharmacology 1968;13:222-57.
3. Lyon M; Robbins T. The actions of stimulant drugs: a general theory concernin amphetamine effects. En: Essmann W, Valselli L, eds. Current development in psychopharmacology. New York: Spectrum, 1975:81-163.
4. Turner RA. Analgesic. En: Turner A, ed. Screening methods in pharmacology. New York: Academic, 1965:100-17.
5. Paton WDM. The response of the guinea-pig ileum to electrical stimulation by coaxial electrodes. J Physiol 1955;127:40-54.
6. . The action of morphine and related substances on acetylcholine output from coaxially stimulated guinea-pig ileum. Br J Pharmacol Chemoter 1957;12:112-27.
7. Florez J; Reig E. Analgésicos opiáceos: Características y propiedades. En: Terapéutica farmacológica del dolor. Pamplona: Ediciones Universidad de Navarra, 1994:41-78.
8. Ehrenpries S. Prostaglandines reverse inhibition of electrically induced contractions of guines-pig ileum by morphine, indomethacin and acetylsalicylic acid. Nature 1973;245:280-3.

Recibido: 29 de julio de 1997. Aprobado: 30 de julio de 1997.

Lic. María Teresa Buznego Rodríguez. Instituto de Neurología y Neurocirugía. Avenida 29 y calle D, Plaza de la Revolución, Ciudad de La Habana, Cuba.

¹ Licenciada en Ciencias Biológicas. Investigadora Auxiliar.
² Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
³ Licenciado en Bioquímica. Investigador Agregado.
⁴ Doctor en Ciencias Médicas. Investigador Titular.