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Revista Cubana de Plantas Medicinales

versión On-line ISSN 1028-4796

Rev Cubana Plant Med v.2002 n.2 Ciudad de la Habana Mayo-ago. 2002

 

Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig".

Lavado y desinfectación de Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium. I

Lic. Madeline Chalala,1 Lic. Teresa Alfaro,2 Lic. Laritza Rodríguez,3 Téc. Caridad Carballo,4 Téc. Carlos A. Rodríguez Ferradá,5 Téc. Raúl Ramos,5 Téc. Cristina Cabezas6 y Miralys Reyes Arias7

Resumen

Las plantas medicinales en forma de droga seca deben presentar un conjunto de especificaciones que aseguren su calidad, entre las que se encuentran las microbiológicas. Con el fin de disminuir la contaminación microbiana en esta especie Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium, comúnmente conocida como albahaca blanca, se desarrolló el método de lavado y desinfección químico, con una solución de hipoclorito de sodio, para que en forma de droga seca cumpla con los requisitos físico-químico y microbiológicos necesarios para ser consumida por la población y utilizada como materia prima para la elaboración de fitofármacos.

DeCS: PLANTAS MEDICINALES/microbiología; SEMILLAS/microbiología; CULTIVOS AGRICOLAS/microbiología; DESINFECTANTES; HIPOCLORITO DE SODIO.

La especie medicinal Ocimum basilicum L, var. lactucaefolium, pertenece a la familia de las Labiadas. Es uno de los representantes del género que se obtiene de cultivos para la comercialización en diferentes partes del mundo.1
Es una hierba originaria del Asia Tropical y cultivada en Cuba como hierba aromática. Cosechada anualmente, erecta, ramificada de 3 a 6 dm de alto, lampiña abajo, pubicente con cortos pelos. Hojas elípticas de 2 a 4 cm de largo con peciolo delgado, esparcidamente dentadas o enteras, lampiñas, el ápice agudo y la base estrecha.1
Su acción farmacológica la define como antiinflamatoria, antiséptica, antiespasmódica y analgésica.2 Es utilizada en medicina tradicional para la cura de afecciones respiratorias, gastrointestinales y reumatismo. Tópicamente usada en baños y cataplasma para tratar afecciones de la piel y se ha comprobado in vitro su actividad antimicótica.3,4
Este material puede contener una concentración de microorganismos donde no deben estar presentes gérmenes patógenos para el hombre, que pueden ser arrastrados durante todo el proceso hasta el producto terminado, predominando las bacterias esporuladas. Un incremento de la contaminación ocurre por manipulaciones indebidas, durante la cosecha, procesamiento y envase.5
Estudios preliminares realizados con material vegetal contaminado en este laboratorio,6 sometido a diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio y tiempos de inmersión para determinar la mínima concentración del desinfectante capaz de disminuir la carga microbiana, comenzada a disminuir a partir de una concentración de 0,5 % en un tiempo de exposición de 5 min.
Las sales de hipoclorito de sodio y calcio resultan un buen desinfectante químico, su acción es determinada por el cloro libre que actúa cuando se encuentra en dilucion.7-9 Se prefiere usar la sal de sodio ya que es más soluble que la de calcio. Debido a esta característica las drogas secas tratadas con la sal de calcio aparecen con una capa blanca no resultando adecuado su aspecto.
En este trabajo se plantea establecer el proceso de lavado y desinfección de la planta medicinal Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium, así como los límites físicos, químicos y microbiológicos a fin de asegurar la calidad requerida según la norma establecida para esta planta.

Métodos

El material vegetal utilizado se cosechó en la Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig" de San Antonio de los Baños.
El cultivo sin fertilizar se recolectó el mismo día que se realizó la desinfección; para el lavado se utilizó agua potable que debe reunir las condiciones químicas y microbiológicas establecidas, pues esta es una vía de contaminación para el producto10 y como desinfectante una solución de hipoclorito de sodio a diferentes concentraciones y tiempo de inmersión.
El proceso se realizó primero a nivel de laboratorio donde las muestras utilizadas fueron de 0,250 kg cada uno y se les realizaron los tratamientos siguientes:
Tratamiento I: concentración 0,5 % y 5 min de inmersión.
Tratamiento II: concentración 0,5 % y 5 min de inmersión.
Tratamiento III: concentración 1 % y 5 min de inmersión.
Tratamiento IV: concentración 1 % y 10 min de inmersión.
Tratamiento V: concentración 2 % y 5 min de inmersión.
Tratamiento VI: concentración 2 % y 10 min de inmersión.
Cada uno de estos tratamientos por triplicado.
Para realizar el escalado se empleó el tratamiento que resultó ser el más efectivo a nivel de laboratorio. Se utilizaron tanques de 100 L de acero inoxidable y 3 réplicas del cultivo de Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium, además un testigo sin tratar y un testigo lavado con agua al igual que para el laboratorio. El testigo sin tratar se toma una muestra antes de comenzar el lavado y se envasa en sobres de papel kraft poniéndose a secar.

Procedimiento y técnica de desinfección

  1. Previamente se limpia y desinfecta el área de trabajo, mesetas y otros con alcohol al 70 %. La estufa de secado se trata con formol al 1 %, se preparan los recipientes en el laboratorio 3 cubos esmaltados de 8 L, 2 para el lavado por inmersión y 1 con la solución desinfectante. Se limpian los bastidores con igual solución de formol donde se escurre el material vegetal antes de llevarlo a la estufa a secar envasados en sobres de papel kraft.
  2. Se colecta para cada tratamiento 3 muestras del material vegetal fresco en el laboratorio de 0,250 kg y escalados 8 kg.
  3. El material se pica con cuchilla o cuchillo en pedazos con un diámetro de 10 a 15 cm y se dispersa de forma tal que se pueda someter al proceso, identificándose cada uno.
  4. Se lava la muestra directamente en agua corriente.
  5. Posteriormente se sumergen en el primer recipiente con agua potable durante 5 min varias veces.
  6. Se pasa al segundo recipiente con agua potable procediendo igual que en el punto anterior.
  7. Luego se sumerge varias veces en la solución desinfectante de hipoclorito de sodio, la cual debe estar a la concentración deseada y aplicarse el tiempo de inmersión según el tratamiento. La solución desinfectante, al igual que el agua de lavado, se cambian cada 3 muestras.
  8. Secado en la estufa con aire recirculado a 30 °C por 4 d después de haber sido escurridos en bastidores y envasados en sobres de papel kraft.
  9. Envase en pomos de cristal estéril. Frascos V/A 240 mL B/58 mm.
  10. Eviar muestras a control microbiológico.

Los métodos de ensayo se realizan según la norma NRSP 309.11 Drogas crudas. Métodos de ensayo.
Los requisitos físico-químicos se realizaron según especificaciones de calidad para la especie Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium.12 Tomándose como parámetro para el control físico-químico las planteadas en esta como son: humedad, cenizas totales, sustancias solubles en agua, sustancias solubles en etanol al 70 % y contenido de aceite esencial. Los requisitos físicos son hojas ennegrecidas, materia orgánica extraña, materia inorgánica extraña.
La identificación de los componentes del aceite esencial se realiza mediante cromatografía en capa delgada y la de flavonoides mediante la reacción de Shinoda.13 Los análisis microbiológicos según Técnica # 2. Control Microbiológico de drogas secas 1992.14
Las determinaciones propuestas para el análisis microbiológicos son: conteo total de microorganismos, determinación de E. coli, determinación de otras enterobacterias, Salmonella spp., Pseudomonas aeruginosa y Staphiloccocus aureus.15

Resultados

En la tabla 1 aparecen los resultados del control microbiológico de las réplicas analizadas para cada lote del material vegetal sometido al proceso de lavado y desinfección realizado a nivel de laboratorio, donde en el testigo sin tratar y el testigo lavado con agua hay presencia de E. coli y son elevados los niveles de conteo de bacterias y hongos.
En todas las muestras desinfectadas los valores son menores de 107 y 103 ufc/g para el conteo de bacterias y el conteo de hongos respectivamente y de la 1 a la 4 los valores del conteo microbiológico están por encima.

Tabla 1. Resultados del conteo microbiológico de lavado y desinfección de la planta medicinal Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium. a nivel de laboratorio

Muestra
C. B (ufc/g)
C. H (ufc/g)
E.coli (ufc/g)
O. E (ufc/g)
m. o aislados
Desición
Testigo sin tratar
2,0.107
<103
>102
>104
E. aerogenes
E. coli.
NC
Testigo lavado con agua
1,8.107
<103
>102
>104
E. aerogenes
E. coli
NC
Muestra desinfección I
3,0.106
<103
>102
>104
E. coli
NC
 
2,5.106
<103
>102
>104
Citrobacter
-
 
3,4.106
< 103
>102
> 104
-
-
Muestra desinfección II
6,8.106
<103
>102
>104
E. coli
NC
 
6,0.106
<103
>102
>104
Citrobacter
-
Muestra desinfección III
2,2.106
<103
>102
>104
E. coli
NC
 
4,4.106
<103
>102
>104
Citrobacter
-
 
5,0.106
<103
>102
>104
-
-
Muestra desinfección IV
1,3.106
<103
>102
>104
E. coli
NC
 
2,4 .106
<103
>102
>104
E. aerogenes
-
 
3,6.106
<103
> 102
>104
-
-
Muestra desinfección V
4,5.106
<103
<102
<104
-
C
 
4,0.106
<103
<102
<104
-
-
 
5,0.106
<103
<102
<104
-
-
Muestra desinfección VI
4,5.106
<103
<102
<104
-
C
 
4,0.106
<103
<102
<104
-
-
 
5,0.106
<103
<102
<104
-
-

 

Límites:

 
CB: conteo total de bacterias Límites permisible
CH: conteo total de hongos CB: máximo 107 ufc/g
OE: otras enterobacterias CH: máximo 103 ufc/g
mo: microorganismos E. coli: máximo 102 ufc/g
NC: no cumple OE: máximo 104 ufc/g
C:cumple No Salmonella spp.
  No P. aeruginosa
 

No S. aureus

En las tablas 2 y 3 se muestran los resultados de los parámetros físico-químico de la muestra sin tratar y la muestra tratada con el desinfectante y su réplica, a nivel de laboratorio y escalado, donde las cenizas en la muestra sin tratar, en ambos experimentos fue de 10,8 % y en las muestras tratadas tienen un valor de 32,2 y 33,4 %.

Tabla 2. Parámetros físico-químicos de lavado y desinfección de las muestras de Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium a nivel de laboratorio

Parámetros
Norma (%)
Muestra sin tratar
Muestra tratada
Humedad
Máx.13
10,0
10,0
10,0
4,0
4,0
4,0
Cenizas
Máx.14
10,8
10,4
11,3
32,8
32,07
31,96
Sustancias solubles en agua
Mín.15
20,0
20,1
20,2
30,6
30,6
30,6
Sustancias solubles en etanol al 70 %
Mín.15
17,4
17,5
17,8
30,6
30,6
30,6
Aceite esencial
Mín.0,5
0,8
0,8
0,8
0,6
0,6
0,6

Identificación de mirceno, eugenol y flavonoides

Presencia
Presencia
Presencia

 

Tabla 3. Parámetros físico-químicos de lavado y desinfección de las muestras de Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium a nivel de escalado

Parámetros
Norma (%)
Muestra sin tratar
Muestra tratada
Humedad
Máx.13
10,0
10,0
10,0
8,0
8,0
8,0
Cenizas
Máx.14
10,8
10,4
11,3
33,4
32,7
34,1
Sustancias solubles en agua
Mín.15
20,0
20,1
20,2
34,8
34,6
35,0
Sustancias solubles en etanol al 70 %
Mín.15
17,4
17,5
17,8
34,3
33,7
34,5
Aceite esencial
Mín.0,5
0,8
0,8
0,8
0,6
0,6
0,6

Identificación de mirceno, eugenol y flavonoides

Presencia
Presencia
Presencia

Los requisitos físicos en la muestra sin tratar y la muestra tratada tienen un valor de 0 % para todos los parámetros.12
En la tabla 4 se reflejan los resultados del conteo microbiológico de las réplicas analizadas para cada lote de material vegetal sometido al proceso de lavado y desinfección realizado a nivel de escalado, donde el testigo sin tratar y el testigo tratado con agua es similar a los resultados obtenidos a nivel de laboratorio.

Tabla 4. Resultados del conteo microbiológico de lavado y desinfección de la planta medicinal Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium a nivel de escalado

Muestra
C. B (ufc/g)
C. H (ufc/g)
E. coli (ufc/g)
O. E (ufc/g)
m. o aislados
Desición
Testigo sin tratar
3,0.107
<103
>102
>104
Citrobacter
E. coli
NC
Testigo lavado con agua
5,0.107
<103
>102
>104
Citrobacter
E. coli
NC
Muestra desinfección I
2,0.106
<103
<102
<104
E. coli
NC
 
2,5.106
<103
<102
<104
Citrobacter
-
 
3,0.106
< 103
<102
<104
-
-
Muestra desinfección II
2,5.106
<103
<102
<104
E. coli
C
 
3,0.106
<103
<102
<104
Citrobacter
-
 
3,5.106
<103
<102
<104
-
-
Muestra desinfección III
3,0.106
<103
<102
<104
E. coli
C
 
3,5.106
<103
<102
<104
Citrobacter
-
 
3,8.106
<103
<102
<104
-
-

 

Límites:

 
CB: conteo total de bacterias Límites permisible
CH: conteo total de hongos CB: máximo 107 ufc/g
OE: otras enterobacterias CH: máximo 103 ufc/g
mo: microorganismos E. coli:máximo 102 ufc/g
NC: no cumple OE:máximo 104 ufc/g
C: cumple No Salmonella spp.
  No P. aeruginosa
 

No S. aureus

 

Discusión

En los resultados del conteo microbiológico a nivel de laboratorio, tanto en el testigo sin tratar como en el tratado con agua, la concentración similar de bacterias y conteo de E. coli y de otras enterobacterias se encuentran fuera de límite, por ello se ve la necesidad de aplicar este tipo de desinfectante químico, el hipoclorito de sodio.
Las concentraciones probadas al 0,5 y 1 % con 5 y 10 min de inmersión, resultaron efectivas para el conteo de bacterias y conteo de hongos, no siendo favorable para los microorganismos como el E. coli, por lo que se probó la concentración más elevada, 2 % con un tiempo de inmersión de 5 y 10 min, donde con solo 5 min se eliminó la carga microbiana cumpliendo así con los límites permisibles.
Los resultados microbiológicos de lavado y desinfección a nivel de escalado son semejantes a nivel de laboratorio en la muestra testigo y muestra sin tratar, encontrándose fuera de los límites permisibles debido a que no se aplica el desinfectante, ya en las muestras desinfectadas el conteo de bacterias, el conteo de hongos, E.coli y otras enterobacterias cumplen con los límites permisibles, pues se aplicó el desinfectante con la concentración de 2 % y tiempo de inmersión 5 min, que resultó favorable en el experimento a nivel de laboratorio.
Teniendo en cuenta que las muestras se pasaron por la misma solución de hipoclorito, esto indica que el desinfectante se puede utilizar 3 veces sin cambiarlo.
En los parámetros físico-químicos de lavado y desinfección a nivel de laboratorio y a nivel de escalado se puede observar que la determinación de cenizas totales (compuestos inorgánicos), está por encima de los límites permisibles (máx. 14 %; Norma de Empresa. Medicamento de origen vegetal. Hierba de albahaca blanca. Especificaciones), por lo que se propone hacer un estudio complementario para determinar el porcentaje de sodio presente en las cenizas con el objetivo de comprobar si el de este cateón se encuentra dentro de los niveles que generalmente se aceptan para el consumo humano. Los restantes parámetros se encuentran dentro de los límites permisibles. Se identificó en las muestras de aceite esencial la presencia de eugenol, mirceno y flavonoides, tanto en el testigo sin tratar como en la muestra desinfectada.

Conclusiones

  1. Se obtuvo un tratamiento adecuado de lavado y desinfección para el cultivo de Ocimum basilicum L. var. lactucaefolium.
  2. El conteo microbiológico realizado se encuentra dentro de los límites permisibles.
  3. En el análisis físico-químico, los valores de cenizas totales sobrepasaron los límites según especificaciones de calidad, por lo que deben hacerse estudios complementarios.

Abstract

Medicinal plants in the form of dry drug should present a series of specifications, among which we found the microbiological ones, to guarantee their quality. In order to reduce the microbial contamination in this species Ocimum basilicum L var. lactucaefolium, commonly known as white basil, the lavage and disinfection chemical method was developed with a sodium hypochlorite solution so that it may meet the necessary physical and chemical requisites to be consumed by the population and to be used as a raw material in the production of phytodrugs.

Subject headings: PLANTS MEDICINAL/microbiology; SEEDS/microbiology; CROPS,
AGRICULTURAL/microbiology; DISINFECTANTS; SODIUM HYPOCHLORITE.

Referencias bibliográficas

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  15. Cuba. Medicamentos no estériles. Determinaciones microbiológicas NC 26-121:92:1992.

Recibido: 15 de marzo de 2002. Aprobado: 8 de agosto de 2002.
Lic. Madelín Chalala. Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig". San Antonio de los Baños, La Habana, Cuba.

1 Licenciada en Química.
2 Licenciada en Microbiología. Especialista.
3 Licenciada en Bioquímica. Especialista
4 Técnico Medio en Tecnología Farmacéutica.
5 Técnico Medio en Agronomía.
6 Técnico Medio en Farmacia.
7 Operadora de Microcomputadora.

 

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