Hospital Militar Central Dr. Luis Díaz Soto"

Efecto antiviral de tinturas de Hypericum spp. cultivadas en Cuba

Dra. Edelis Castellanos Puerto,1 Lic. José Luis Pérez De Alejo2 y Téc. Maribel Machin Lugones.3

Resumen

Se realizó un estudio in vitro para demostrar la actividad antirretroviral de 2 especies de Hypericum obtenidas en Cuba (fasciculatum y styphelioides); se trabajó con el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B, el cual se mezcló con ambas especies a las concentraciones de 1,5,10,20 y 30 mg/mL y se incubó durante 24, 48, 72 h y 7,14, y 21 días, y posteriormente se evaluó la disminución de la antigenicidad in vitro por un ensayo inmunoenzimático tipo sandwich que se utilizó para cuantificar el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B. Se apreció una disminución de la antigenicidad a partir de las 24 h para todas las concentraciones probadas, pero a partir de las 72 h se encontró una significativa disminución de esta antigenicidad. Este estudio representa una posibilidad para utilizar este producto en el tratamiento de enfermedades producidas por retrovirus como el virus de la hepatitis B y el VIH.

DeCS: PLANTAS MEDICINALES/ química; AGENTES ANTIVIRALES; ANTIGENOS DE SUPERFICIE DE LA HEPATITIS B.

Summary

A study in vitro was made to demonstrate the antiretroviral activity of 2 Hypericum species obtained in Cuba (fasciculatum and styphelioids). Hepatitis b virus surface antigen (HbsAg) was used and mixed with both species at concentrations of 1,5,10,20and 30mg/mL and then incubated at 24h, 48h, 72h and 7d, 14d and 21d. Then the reduction of antigenicity in vitro was evaluated by a sandwich-type immunoenzymagtic assay ELISA that quantifies HbsAg. It was observed that antigenicity decreased at 24 h for all the tested concentrations; however, from 72h on, a significant reduction of antigenicity occurred at Ag concentrations below the limit values recorded for ELISA tests performed. This study represents a possibility to be used for HbsAg and in HIV treatment.

Subject headings: PLANTS, MEDICINAL/chemical;ANTIVIRAL AGENTS; HEPATITIS B SURFACE ANTIGENS.

 

La fitoterapia como ciencia novedosa en el estudio de las plantas medicinales ha tenido gran impacto por los resultados obtenidos en los últimos años, especialmente en los países desarrollados se han creado industrias que producen extractos y productos farmacéuticos de las plantas de mayor relevancia mundial, entre las que se encuentra el Hypericum que tiene varios géneros y más de 300 especies; de él se han estudiado sus efectos antidepresivos,1 vasoprotectores y capilarotrópico e hipotensor, antioxidante, antimicrobiano y antiviral entre otros. Precisamente su actividad antiviral ha sido probada contra el citomegalovirus, coronavirus, adenovirus, rabdovirus (A, B, C) y retrovirus como el VIH;2 se plantea que inhibe la replicación viral y que la administración de bajas dosis previene las infecciones por estos. Con estos precedentes se decidió evaluar su efecto antirretroviral contra el virus de la hepatitis B con el objetivo de demostrar que las tinturas de Hypericum disminuyen la antigenicidad del virus de la hepatitis B (HBs Ag) in vitro.

Métodos

Se trabajó con 2 tinturas de Hypericum (fasciculatum y styphelioides) a las concentraciones de 1, 5, 10, 20 y 30 mg/mL que se enfrentaron a un estándar de antígeno que contiene 83,75 mg/mL de virus salvaje de hepatitis B; esta mezcla constituyó la muestra que se incubó por 24, 48 y 72 h; 7, 14 y 21 días para cuantificar la concentración de antígeno después por un ensayo inmunoenzimático (ELISA) tipo sandwich. Además se evaluó el menstruo en que se diluyó el Hypericum. El análsis estadístico de los resultados se realizó por descriptores y tablas. La antigenicidad se definió como las concentraciones de antígenos por debajo de los valores límites de los ensayos inmunoenzimáticos realizados.

Resultados

Todas las concentraciones estudiadas de ambos Hypericum tuvieron actividad antiviral, especialmente a partir de las 72 h, donde las concentraciones de antígeno in vitro fueron de cero o menor que 0,2 mg/mL, concentración mínima que detecta el método empleado (sensibilidad) (tablas 1 y 2). Se probó el menstruo de alcohol utilizado para las diluciones aisladamente y se comparó con el control negativo para asegurar que no interfería en el ELISA y se comportó como un control negativo; además, el cálculo del porcentaje al cual quedó después de preparadas las mezclas fue muy bajo (0,32 y 0,71) para el Hypericum fasciculatum y styphelioides respectivamente, por lo que se dedujo que el alcohol no influyó en la disminución de la antigenicidad obtenida en los ensayos.

Tabla 1. Concentración de antígeno. Hypericum fasciculatum

Mg/mL	Horas			Días
	24	48	72	7	14	21
1	10,19	1,46	0	0	0	0
5	7,33	1,49	0	0	0	0
10	7,89	5,36	0	0	0	0
20	0,85	1,97	0	0	0	0
30	0,75	1,76	0	0	0,46	0

uds=µg/ml

Tabla 2. Concentración de antígeno. Hypericum styphelioides

Mg/mL	Horas			Días
	24	48	72	7	14	21
1	6,91	5,39	0	0	0	0
5	3,87	4,33	0	0	0	0
10	4,31	2,43	0	0	0	0
20	1,96	0,79	0	0	0,41	0
30	1,13	2,02	0	0	0	0

uds=µg/ml

Discusión

Se han estudiado algunas propiedades inmunotrópicas que quizás estén relacionadas con sus efectos antivirales; se sabe que todas las sustancias activas de la planta se agrupan en 2 fracciones, la polyfenol y la lipofílica que antagoniza con la anterior aumentando la respuesta inmune celular y humoral por estimulación del sistema fagocítico mononuclear.3 También se ha estudiado in vitro la modulación de citoquinas que produce, específicamente mantiene los niveles de IL-6 estables en comparación con los de IL-1 e IFN gamma.4 Algunos autores han estudiado la potente actividad antirretroviral de la hypericina y de la pseudohypericina in vitro y se sabe que inactiva directamente el virus inhibiendo su replicación viral y evita el ensamblaje del mismo en la membrana celular;2 también puede inhibir la fosforilación que involucra la proteina kinasa C durante la infección viral de las células,5 puede que algunos de estos mecanismos justifique los resultados obtenidos en este trabajo ya que el virus de la hepatitis B es un retrovirus, aunque se debe aclarar que hasta el momento la hypericina y la pseudohypericina no tienen actividad directa aparente en los mecanismos que involucran la transcripción y la traducción de las proteínas virales y tampoco sobre la polimerasa.

Los autores de este trabajo coinciden con Mattmas Lorenz y Fernando Rodríguez que plantean que por el alto valor terapéutico y que por sus escasos efectos secundarios, el Hypericum está llamado a ocupar un elevado lugar en el futuro como materia prima en la elaboración de fármacos (Santiago, SepT 4/98. Notimex) y quizás su estudio permitirá la utilización de esta planta como herramienta terapéutica contra enfermedades producidas por retrovirus como el VlH. Por todo ello se puede plantear que este estudio in vitro demostró la potente actividad antiviral de estas especies de Hypericum.

Referencias bibliográficas

1. Orturk Y. Testing antidepressant effects of Hypericum species on animal models. Pharmapsychiatry 1997;30:125-8.
2. Meruelo D, Javie G, Javie D. Therapeutic agents with dramatic antiretroviral activity and litte toxicity at effective dose 4 aromatic polyciclic diones hypericin and pseudohypericin. Proc Nat 1998;85 (14):5230-4.
   
3. Evstifeeva AT, Sibiriak SV. The immunotropic properties of biologically active product obtained from Klamath weed (Hypericum perforatum L). KKSP-Klin-Farmakol 1996;59(11):51-4.
   
4. Thielle B, Brink I, Plovch M. Modulation of cytokine expression by Hypericum extract. J Geriatr Psychiatry Neumol 1994;(1):360-2.
   
5. Takahashi L, Nakanishi SK, Obajoshi E, Nakano H, Suzuki K, Tamaoki T. Hypericin and pseudohypericin specifically inhibit protein Kinase C, possible relation to their antiretroviral activity. Biochem Biophys Res Commun 1989;165 (3):1207-12.
   

Recibido: 19 de marzo de 2002. Aprobado: 7 de junio de 2002.
Dra. Edelis Castellanos Puerto. Hospital Militar "Dr. Luis Diaz Soto". Ave. Monumental y Carretera del Asilo. Ciudad de La Habana, CP 11700, Cuba. E-mail:[e-mail]

1 Especialista de II Grado en Inmunología. Investigadora Agregada.
2 Doctor en Ciencias de la Salud. Investigador Titular.
3 Técnico Medio en Química.