Centro de Investigaciones y Desarrollo de Medicamentos

Potencial fototóxico de una preparación obtenida del mangle rojo

Lic. Raiza Vega Montalvo,1 Lic. Gleybi Melchor,2 Dra. Viviana Bueno Pavón,3 Téc. Isbel Guerra Sardiñas4 y Téc. Yamilet Vega Hurtado4

RESUMEN

Se evaluó el efecto fototóxico de una preparación para uso veterinario denominada Cikron-H obtenida a partir del extracto de la corteza del mangle rojo, en un modelo in vivo. Se utilizaron curieles albinos Hartley con peso corporal entre 300-500g. Todos los animales fueron previamente depilados y rasurados en la región escapular y sometidos a una dosis de 50,4 J/cm2 de luz UVA durante un período de 2 horas. Estos fueron observados inmediatamente después de la irradiación, a las 24, 48 y 72 h. Se aplicó la escala de Draize para evaluar lesiones sobre la piel. En la observación realizada a las 24 h se encontró eritema de grado 3 en la piel de todos los animales, hembras y machos, el que permaneció constante hasta las 72 h. Desde el punto de vista histológico estas alteraciones no fueron lo suficientemente severas para caracterizar una respuesta fototóxica. En la observación realizada a las 24 h en el placebo, se encontró la presencia de eritema de grado 1 en la piel de todos los animales. En la observación microscópica, en el caso de las hembras, se encontró la presencia de edema muy leve y en los machos la piel estaba prácticamente normal. Finalmente se concluyó que las observaciones microscópicas encontradas no confirmaron la aparición de una respuesta fototóxica del Cikron-H.

DeCS: PLANTAS MEDICINALES; DERMATITIS FOTOTÓXICA; ANIMALES DE LABORATORIO.

Summary

The phototoxic effect of a preparation for veterinary use denominated Cikron-H obtained from the extract of the cortex of mangrove tree was evaluated in an in vivo model. Hartley albinic guinea pigs with body weight between 300 and 500 g were used. All the animals were previously depilated and shaved in the scapular region and they were administered a dose of 50.4 J/cm2 of UVA light during a period of 2 hours. These effects were observed immediately after the irradiation at 24, 48 and 72 hours. Draize's scale was applied to evaluate skin lesions. In the observation carried out at 24 hours it was found a degree III erythema in the skin of all male and female animals that was constant for 72 hours. From the histological point of view, these alterations were not severe enough to characterize a phototoxic response. In the observation made at 24 hours in the placebo, it was observed a degree I erythema in the skin of all animals. On the microscope, in the case of females, it was observed a very mild edema, whereas among males the skin was practically normal. Finally, it should be stressed that the microscopic observations found did not confirm the appearance of a phototoxic response of Cikron-H.

Subject headings: PLANTS, MEDICINAL; DERMATITIS PHOTOTOXIC; ANIMALS, LABORATORY.

Rhizophora mangle L. comúnmente conocido como mangle rojo es un árbol de corteza astringente, que alcanza una altura de hasta 10 m o más, en forma de matorrales densos casi impenetrables.1 Se desarrolla en zonas costeras, donde existen deltas o ríos que desembocan al mar que producen acumulaciones de sustrato aluviales y presentan variaciones de salinidad, que determina la composición de las comunidades vegetales de la zona costera.2

Posee, tradicionalmente, propiedad astringente, febrífuga, antiséptica, hemostática, balsámica y vulneraria. Su corteza, hojas y raíces se han usado en el tratamiento de enfermedades de la garganta, tuberculosis, disentería, hemoptisis, hemorragia intestinal, úlcera sifilítica y leprosa así como en la cicatrización de heridas. En México, la decocción de la corteza (5-6g en 150 mL de agua) tomada varios días, en ayunas es empleado con éxito en las enfermedades de las vías biliares, tales como angiocolitis y colecistitis dado que al parecer, disminuye la ictericia, el estreñimiento y la anorexia muy común en esas infecciones.3

Con esta planta se prepara un jarabe contra el asma, también se utiliza para combatir el cáncer, enfermedades venéreas, intoxicaciones, hipotensión, neuralgia, ojos de pescado, parásitos, sarna y tiña.1,4

En el Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA) de Cuba, se desarrolló recientemente una preparación para uso veterinario del extracto de la corteza del mangle rojo con propiedades antisépticas, antiinflamatorias, analgésicas, antimicrobianas y estimulantes de la cicatrización de las heridas con una elevada eficacia en la prevención de las infecciones en los animales. Por las razones apuntadas, resultó de interés evaluar el posible efecto del Cikron-H tras su aplicación sobre la piel y la exposición a una cantidad de energía radiante de longitud de onda apropiada, lo que podría desencadenar una respuesta fototóxica que transcurrida las 24 h se caracterizaría por la aparición de eritema, edemas, hiperpigmentación y descamación en el sitio de exposición.5

Métodos

El Cikron-H se obtiene a partir de la corteza de R. mangle L. previamente triturada y sometida a un proceso de decocción.

Con el extracto acuoso obtenido se prepara una formulación, de acuerdo con las indicaciones del grupo de Melchor Sánchez que aparecen en el PCT A 71K de abril de 1996. Esta formulación debe ser debidamente estabilizada y preservada y contiene 24 mg/mL de materia seca de mangle rojo, 0,20% de preservos, 10% de estabilizante y cantidad suficiente de vehículo acuoso hasta completar 100 mL.

ESPECIFICACIONES DEL PRODUCTO TERMINADO

• Características organolépticas: líquido de color carmelita - rojo oscuro.
• pH 4,0- 6,0
  
• Contenido de taninos totales: > 6 mg/mL
  
• Materia orgánica contaminante: 0,25 %
  
• Contenido de cenizas: 8,75 %
  
• Contenido de humedad: 18 %
  
• Sustancias extraíbles en agua: 20 - 30 %
  

Lote: 041000
Fecha de Fabricación: Octubre del 2000
Fecha de vencimiento: Octubre del 2002
Estabilidad del Cikron-H: 2 años

Animales

Se emplearon curieles albinos Hartley de ambos sexos con peso corporal entre 300-500 g, procedentes del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB). Estos fueron mantenidos durante el ensayo en jaulas individuales y debidamente identificadas en un local con temperatura de 22 ± 2 °C y humedad controlada, ciclo luz-oscuridad 12/12. La alimentación consistió en pienso de curiel y agua a voluntad.

El ensayo fue realizado siguiendo el modelo in vivo descrito por Nilsson y cols.6

Preparación de los animales

El día antes del ensayo se tomaron varios animales al azar. Estos fueron depilados y rasurados en un área de 6x8- cm en la región escapular. Se seleccionaron para el ensayo aquellos que presentaron la piel intacta.

Grupos de ensayo

Para la evaluación se formaron tres grupos de 10 animales cada uno, 5 de cada sexo que se distribuyeron de la siguiente manera.
Grupo I: control positivo + irradiación
(Se utilizó el 8- metoxipsoraleno (8-MOP) 0,29mg/kg disuelto en alcohol al 96 %
Grupo II: control de irradiación
Estos animales fueron irradiados y no se les aplicó la sustancia.
Grupo III: sustancia de ensayo + irradiación
Grupo IV: placebo + irradiación

Administración de la sustancia de ensayo

La sustancia de ensayo se aplicó en volumen de 50 mL sobre la piel de la región escapular de los curieles y posteriormente estos fueron colocados en una caja de retención para evitar el movimiento del animal y garantizar la máxima exposición a la luz.

Irradiación

Se empleó una lámpara con filtro de 2 longitudes de onda de luz ultravioleta (UVA y UVB) con tubos de 15 W cada uno. Para el ensayo se utilizó la irradiación correspondiente a una longitud de onda (l) de 365 nm cuya intensidad es 7 mW/cm2 y una dosis de exposición de 50,4 J/ cm2, debido a que la inmensa mayoría de los compuestos fototóxicos absorben en el rango de l correspondientes a la UVA (320-400 nm).

La irradiación se realizó 30 min después de la aplicación de la sustancia de ensayo, los animales fueron colocados a 10 cm de la lámpara y fueron irradiados por un período de 2 h.

Observaciones realizadas

Las observaciones macroscópicas en la piel se realizaron para valorar la aparición de eritema y edema, inmediatamente después de la irradiación y a las 24, 48 y 72 h. Se tuvo en cuenta la escala de Draize para evaluar lesiones sobre la piel. Se consultó la guía para probar productos químicos en la irritación o corrosión aguda de los ojos, publicada por OECD en 1987.

Al finalizar el ensayo, la piel de los animales que presentaron reacciones fototóxicas se sometió al examen microscópico con el objetivo de confirmar histológicamente el posible efecto fototóxico.

Clasificación

El producto se considera fototóxico, en caso de encontrarse una reacción eritematosa y/o edematosa de grado mayor o igual a 2 al cabo de las 24 h y hallazgos histopatológicos.

RESULTADOS

En todos los animales administrados con el 8-MOP (control positivo), transcurrido las 24 h después de la irradiación se observó la presencia de eritema de grado 3 y al cabo de las 72 h se encontraron escaras.

La aparición de una respuesta fototóxica en la piel de los curieles por la aplicación del 8-MOP en presencia de la luz ultravioleta, fue confirmada histológicamente. Se detectaron costras, incremento de neutrófilos, acantosis ligera, desorganización de las fibras colágenas, pérdida de la integridad del tejido adiposo del sub-cutis, hiperqueratosis e incremento de vasos sanguíneos.

Los animales expuestos solamente a la irradiación también fueron controlados rigurosamente y al realizar las observaciones en los tiempos indicados no mostraron lesiones sobre la piel.

Los animales administrados con el Cikron-H, mostraron la presencia de eritema de grado 3 en la observación realizada a las 24 h y esta lesión se mantuvo sin variación hasta las 72 h. Los cambios histológicos observados, en el caso de las hembras, incluyeron la aparición de acantosis, edema leve, perdida de la integridad del tejido adiposo y ligero incremento de leucocitos, lo que podría sugerir una posible respuesta fototóxica del Cikron-H, pero estas alteraciones no fueron lo suficientemente severa para caracterizar esta respuesta. Por otra parte en la observación microscópica realizada en la piel de los machos se encontró que estaba prácticamente normal.

Los animales administrados con el placebo mostraron la presencia de eritema de grado 1 en la observación realizada a las 24 h. En el análisis histológico, en las hembras, se encontró la presencia de edema muy leve y en los machos la piel estaba prácticamente normal.

DISCUSIÓN

La aparición de las escaras en la piel de los animales administrados con el control positivo fue el grado máximo de eritema encontrado. El eritema es la reacción fototóxica más común observada en los humanos, según Mutzhas, 1986. Los hallazgos encontrados en la observación microscópica se correspondieron a lo encontrado en la literatura con respecto a los cambios histológicos que aparecen luego de una reacción de quemadura de acuerdo, también con Mutzhas, en el artículo publicado en 1986 sobre los efectos de las radiaciones ultravioleta.

En el estudio se observó una mayor sensibilidad de las hembras con relación a los machos que fueron administrados con el Cikron-H. También las hembras tratadas con el placebo se mostraron más sensibles, lo que permitió plantear un posible efecto sinérgico de los componentes presentes en el placebo que incidieron en la preparación final.

Debe señalarse que aunque las observaciones microscópicas encontradas no confirmaron la aparición de una respuesta fototóxica del Cikron-H en su máxima expresión, se sugiere evitar la exposición a luz mientras se aplique el producto, ya que podría traer consigo la presencia de reacciones adversas indeseables tales como quemadura solar, ampollas, urticaria e hiperpigmentación. Si bien estos resultados en animales no pueden ser extrapolados directamente al hombre, brindan una estimación del potencial fototóxico de la formulación muy útil para su posible uso en humanos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. León H, Alaín H. Flora de Cuba. Contribuciones Ocasionales del Museo de Historia Natural del Colegio de la Salle. Vol.3. La Habana:1953:502.
   
2. Samek V. Elementos de silvicultura de los bosques latifolios. La Habana: Instituto Cubano del Libro. 1974:291.
   
3. Roig JT. Plantas medicinales, aromáticas o venenosas de Cuba. La Habana: Editorial Ciencia y Técnica; 1974:949.
   
4. Fundamentos de agro tecnología de cultivo de plantas medicinales iberoamericanas. Convenio Andrés Bello y el Programa Iberoamericano de ciencia Tecnología para el desarrollo (CYTED), Santafé de Bogotá, D.C., Colombia, 2000:398.
   
5. Fournier Z. The burning questions of photosensivity. How to beat black the challenge of thus UV rays. Drug Merchandising 1983;3:18-23.
   
6. Lambert LA, Wamer WG, Kornhauser A. Animal models for phototoxicity testing. Toxicol Methods 1996;6(2):99-114.

Recibido:26 de marzo del 2003. Aprobado: 31 de marzo del 2003.
Lic. Raiza Vega Montalvo. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Calle 17 No. 6208 entre 62 y 64. Playa. Ciu. La Habana, CP 11400,Cuba. E-mail:[e-mail]

1 Master en Toxicología Experimental. Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
2 Master en Farmacología Experimental. Licenciada en Ciencias Farmacéuticas.
3 Médico veterinario.
4 Técnico Medio en Química.