Artículos Originales

Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig". Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos.

Evaluación y control de calidad de la tintura homeopática de Artemisia absinthium L.

Lic. Madeline Chalala Vázquez,1 MSc. Dinah María García García,2 Téc. Maritza Crespo Valiente,3 Téc. Carlos A. Rodríguez Ferradá4 y Téc. Isabel Hechevarría Sosa4

Resumen

El presente trabajo tiene como objetivo fundamental el estudio de la evaluación y control de calidad de la tintura homeopática de Artemisia absinthium L. cultivada en las condiciones de Cuba, especie de amplio uso y reconocido valor terapéutico. En la investigación se utilizaron las partes aéreas y floridas frescas de dicha planta. Se obtuvieron 13 lotes de tintura según el método de la escuela francesa; a un título de etanol del 65 % v/v y se establecieron los indicadores de calidad tales como: características organolépticas, imagen capilar, índice de refracción, densidad relativa, pH, título de etanol y porcentaje de residuo seco. Se realizaron pruebas de identificación para determinar la presencia de cetonas bicíclicas, fenoles y turbidez y fue estandarizado además por cromatografía en capa delgada un perfil de la tintura. En todos los lotes obtenidos, sus indicadores de calidad se encontraron dentro de los límites establecidos por las farmacopeas tomadas como referencias. Se realizó un estudio para determinar el tiempo de vida útil de la tintura por un año a temperatura ambiente en frascos de vidrio de color ámbar de 30 mL y se pudo comprobar que en estas condiciones conservó sus características de forma óptima y que el conteo microbiano se mantuvo por debajo de los niveles permisibles durante todo el experimento. Estos resultados demostraron que es realmente posible obtener esta tintura en Cuba con una calidad similar a la exigida por farmacopeas homeopáticas oficiales.

Palabras clave: Artemisia; tintura madre; farmacotecnica homeopatica; control de calidad.

En la actualidad la terapéutica homeopática está muy extendida en Cuba y es aceptada no sólo por los profesionales sino también por gran parte de la población, por ello en la Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr. Juan Tomás Roig" perteneciente al Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) se realizan investigaciones que posibilitan la obtención de tinturas homeopáticas de origen vegetal. El propósito de este trabajo, fue obtener tintura madre de Artemisia absinthium L. (incienso) que pertenece a las Compositae1 especie de reconocido valor terapéutico pues forma parte de un proyecto de plantas antimicrobianas y antiparasitarias.

En homeopatía, A. absinthium es utilizada para prevenir las crisis de epilepsia, sonambulismo, hemorragias uterinas, convulsiones,2,3 además de ser antiinflamatoria y antipirética.4

Por la importancia que tiene este medicamento fue de interés obtener la tintura madre a partir de material proveniente de plantas cultivadas en la citada Estación Experimental y comparar sus indicadores de calidad con los establecidos por farmacopeas homeopáticas reconocidas mundialmente.

Métodos

Para la estandarización y control de la tintura madre de A. absinthium se utilizaron las partes aéreas y floridas frescas de dicha planta. Las cosechas se realizaron entre los meses de junio a diciembre del 2000, un ejemplar de la especie se depositó en el herbario de la Estación con el número 4646.

Se obtuvieron 13 lotes de tintura por el método de la escuela francesa con un título de etanol del 65 % v/v en una proporción de 1/10 según lo establecido en la monografía de A. absinthium que aparece en la farmacopea Homeopathic-Pharmacotechnie et monographies des medicaments courants publicada en Lyon en 1981.

A cada uno de los lotes se les realizaron pruebas de identificación para determinar la presencia de cetonas bicíclicas (compuestos a y b-tujona), fenoles, presencia de turbidez y la reacción con H2SO4 descritas en la farmacopea citada arriba y en la 10ma. edición de la Farmacopea Francesa, suplemento 6 del 1989. También fueron determinados otros indicadores como índice de refracción, densidad relativa, pH, título de etanol y residuo seco.

Mediante cromatografía en capa delgada se estandarizó un perfil de la tintura. Se utilizaron placas precubiertas con gel de sílice G-60 de 0,25 mm de espesor; una mezcla de tolueno, acetato de etilo y ácido fórmico anhidro (20:20:10), como sistema de solvente y luz UV, tricloruro de antimonio al 10 % en cloroformo y el reactivo de anisaldehído, como reveladores. Se aplicaron 20 mL de la tintura madre en una banda de 10 mm de espesor.

Se realizó el estudio del tiempo de vida útil durante 1 año de 3 lotes de tintura, envasados en frascos de vidrio de color ámbar de 30 mL, con tapas de baquelita y retapas de polipropileno, almacenados a temperatura ambiente. Se evaluaron los mismos indicadores de calidad al inicio y después cada 3 meses, con un total de 5 evaluaciones en el año de estudio.

Al comienzo del experimento y después cada 6 meses se efectuó un control microbiológico que incluyó conteo total de hongos, bacterias y evaluación cuantitativa de enterobacterias para lo cual se utilizaron los medios y métodos descritos en la farmacopea USP XXIII, en las determinaciones de límites microbianos de medicamentos no estériles5 y por la Norma Cubana basada en la citada farmacopea.

Resultados

La tintura de A. absinthium, líquido oscuro de color verde parduzco, con olor característico a la droga (aromático) y sabor amargo.

Presentó una imagen capilar alta de color pardo amarillento, la franja fue de aspecto festonado e intenso color verde. A la luz ultravioleta esta franja tomó color rojo ladrillo y toda la imagen se tornó de color azul claro excepto la parte superior de la subfranja y la banda. Con vapores de amoniaco se intensificó la coloración que se observaba al visible y expuesta a la luz UV, en toda la imagen se apreció una fluorescencia verde amarillenta excepto en las zonas donde no hubo fluorescencia previamente.

Todos los lotes respondieron positivamente a las pruebas de identificación exigidas por las respectivas monografías utilizadas, se observó una coloración rojo-naranja, la cual se convirtió en parda-violácea muy característica de compuestos a y b-tujona, también se apreció una coloración verde oscura que denotaba la presencia de fenoles en la tintura.

En la tabla 1 se muestran los valores de los indicadores evaluados a los diferentes lotes y algunos de estos se compararon con los informados en las monografías utilizadas como referencia y citadas en el texto.

TABLA 1. Indicadores determinados a los diferentes lotes de tintura de Artemisia absinthium L.

Lote	Índice de refracción	Densidad relativa	pH	Residuo seco (%)	Título de etanol (%)
1	1,362	0,8818	5,70	2,23	68,28
2	1,362	0,8824	5,71	2,18	64,55
3	1,363	0,8826	5,58	2,43	65,46
4	1,363	0,8824	5,64	2,48	68,28
5	1,362	0,8850	5,66	2,37	68,28
6	1,362	0,8879	5,65	2,74	67,33
7	1,362	0,8876	5,61	2,77	64,55
8	1,362	0,8852	5,74	2,77	67,33
9	1,367	0,8871	5,69	2,76	68,28
10	1,366	0,8876	5,58	2,77	67,33
11	1,366	0,8860	5,75	1,85	67,33
12	1,365	0,8879	5,76	1,82	66,41
13	1,365	0,8869	5,79	1,84	65,41
Valor informado				³ 1,00	60- 70

En las figuras de la 1 a la 3 se presentan los perfiles cromatográficos obtenidos en las diferentes condiciones y se relacionan los intervalos de valores de Rf y el color para cada una de las bandas detectadas.

Fig. 1. Perfil cromatográfico de la tintura de Artemisia absinthium L. revelado con luz V.

Fig. 2. Perfil cromatográfico de la tintura de Artemisia absinthium L. revelado con tricloruro de antimonio.

Fig. 3. Perfil cromatográfico de la tintura de Artemisia absinthium L. revelado con anisaldehído.

Las características organolépticas y la imagen capilar permanecieron inalterables durante el estudio de estabilidad, así como también se detectó en todas las evaluaciones la presencia de fenoles, compuestos a y b-tujona y presencia de turbidez en los 3 lotes objeto de estudio.

En la tabla 2 aparecen reflejados los indicadores físicos y fisicoquímicos determinados. Los valores de índice de refracción, densidad relativa y pH permanecieron prácticamente invariables, los porcentajes de sólidos totales y título de etanol, se mantuvieron dentro de los límites permisibles5 en el transcurso del año. De igual forma el conteo microbiano estuvo por debajo del límite máximo establecido.

TABLA 2. Indicadores evaluados a Artemisia absinthium L. durante el estudio de estabilidad

Índice de refracción
Lote	Inicio	1ra.	2da.	3ra.	4ta.
1	1,362	1,365	1,365	1,365	1,365
2	1,362	1,365	1,365	1,365	1,365
3	1,362	1,365	1,365	1,365	1,365
Densidad relativa
Lote	Inicio	1ra.	2da.	3ra.	4ta.
1	0,8897	0,8872	0,8876	0,8882	0,8875
2	0,8876	0,8871	0,8876	0,8879	0,8880
3	0,8852	0,8866	0,8868	0,8865	0,8867
pH
Lote	Inicio	1ra.	2da.	3ra.	4ta.
1	5,65	5,66	5,64	5,63	5,62
2	5,65	5,61	5,60	5,61	5,59
3	5,65	5,74	5,76	5,73	5,71
Residuo seco (%)
Lote	Inicio	1ra.	2da.	3ra.	4ta.
1	2,75	2,74	2,47	2,46b	2,33
2	2,77	2,73	2,37	2,30b	2,13
3	2,77	2,74	2,44	2,43b	2,22
Título de etanol (%)
Lote	Inicio	1ra.	2da.	3ra.	4ta.
1	70,10	68,24	68,24	66,38	67,31
2	69,17	68,24	67,31	67,31	66,38
3	69,17	68,24	68,24	67,31	67,31

En cuanto a los perfiles cromatográfico, los 3 lotes mostraron desde el comienzo hasta el final la misma cantidad de bandas y el comportamiento fue similar frente a los sistemas de detección utilizados.

Se refleja en la tabla 3 que los lotes evaluados se encontraron por debajo de los límites microbiológicos establecidos y no se detectaron microorganismos patógenos en ninguno de ellos.5

TABLA 3. Resultados del control microbiológico realizado a los lotes de tintura de Artemisia absinthium L.

Número de Evaluaciones	Conteo total de bacterias	Conteo total de enterobacterias	Conteo total de hongos
Inicio
L - 1	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
L - 2	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
L - 3	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
2da Evaluación
L - 1	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
L - 2	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
L - 3	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
4ta Evaluación
L - 1	25 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
L - 2	< 1 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL
L - 3	102 UFC x mL	< 10 UFC x mL	< 10 UFC x mL

Límite:

Ausencia de microorganismos patógenos:

CB: 105 UFC/mL.
CEB: 103 UFC/mL.
CH: 102 UFC/mL.

Leyenda:

CB: conteo total de bacterias. CEB: conteo total de enterobacterias. CH: conteo total de hongos. UFC: unidades formadoras de colonias.

Discusión

Las características organolépticas de todos los lotes de tintura obtenidos coincidieron con lo publicado en las farmacopeas tomadas como base para este estudio. Los valores de índice de refracción, densidad relativa y pH oscilaron dentro de un intervalo relativamente estrecho, también el título de etanol y residuo seco se encontraron dentro de los límites establecidos.
Al revelar la placa cromatográfica con tricloruro de antimonio apareció la banda verde amarillenta con un valor de Rf 0,65-0,61 que coincidió en intensidad de color y tamaño de la banda con lo publicado en la literatura consultada y cuando se atomizó con el reactivo de anisaldehído aparecieron: una banda ocre a un Rf de 0,15-0,14; una banda verdosa a 0,59 -0,57; a un Rf 0,69-0,68 la violácea; una rosada a Rf de 0,77-0,72 y 2 bandas violáceas en el frente del solvente.

En el estudio de estabilidad se demostró que la mayoría de los indicadores evaluados se mantuvieron prácticamente invariables en el transcurso de un año. Para el caso de los sólidos totales, los valores no se diferenciaron grandemente entre sí y se mantuvieron por encima del límite aceptado ( ³ 1.00 %). También el porcentaje de títulos etanólicos en los 3 lotes se encontró dentro del rango establecido durante todo el estudio (60-70 %) y se diferenciaron muy poco uno de otros.

Los perfiles cromatográficos obtenidos en la tintura de forma general coincidieron en cuanto al tamaño y color de las diferentes bandas.

Los resultados de este estudio demostraron que la tintura de A. absinthium, puede ser obtenida de plantas cultivadas en las condiciones de Cuba y tener los indicadores de calidad y el perfil cromatográfico que exigen las farmacopeas homeopáticas oficiales, además esta tintura puede ser conservada a temperatura ambiente por un año, en frascos de vidrio de color ámbar de 30 mL sin que se afecte su calidad.

Agradecimientos. Los autores agradecen a la compañera Miralys Reyes Árias, operadora de microcomputadora, su colaboración en la realización de este trabajo.

Summary

The present paper is aimed at studying the evaluation and quality control of the homeopathic tincture of Artemisia absinthium L. cultivated under Cuba's conditions. It is a widely used species and it has a renowned therapeutic value. The aerial and fresh flowered parts of this plant were used during the research. 13 batches of tincture were obtained according to the French school's method. The following quality indicators were established at a titer of ethanol 65 % v/v: organoleptic characteristics, capillary image, refraction index, relative density, pH, titer of ethanol and percentage of dry residual. Identification tests were made to determine the presence of bicyclic ketones, phenols and turbidity. A profile of the tincture was standardized by thin layer chromatography. Its quality indicators were within the limits established by the pharmacopeias taken as reference in all the batches obtained. A study was conducted to determine the time of useful life of the tincture during a year at room temperature in ambar glass flasks of 30 mL. It was proved that it kept its optimum characteristics under these conditions and that its microbial count was below the permissible levels during the whole experiment. These results show that it is really possible to obtain this tincture in Cuba with a quality similar to that demanded by the official homeopathic pharmacopeias.

Subject headings: ARTEMISIA; MOTHER TINCTURE; HOMEOPATHIC PHARMACOTECHNIQUES; QUALITY CONTROL.

Referencias bibliográficas

1. Pharmacopea Homeopática de los Estados Unidos Mexicanos. México DF: Publicaciones e impresiones de calidad. S.A; 1998: 335.
   
2. Vannier L, Poirier J. Compendium de Materia Médica Homeopática. 6ta ed. São Paulo: Andrei; 1987: 568.
   
3. Allen TF. The Encyclopedia of pare Materia Médica Vol. I. New Delhi: B. Jain Publishers (p ) Ltd; 1997.622p.
   
4. Encyclopedia of Homeopathic Pharmacopoeia. P. N. Varma & Indu. New Delhi: VAID. B. Jain Publisher ( P ) LTD Delh;. 1995.1103 p.
   
5. Cuba. Medicamentos no estériles. Determinaciones microbiológicas. NC. 26-121: 92: 1992.

Recibido: 16 de septiembre del 2003. Aprobado: 30 de septiembre del 2003.
Lic. Madeline Chalala Vázquez. Estación Experimental de Plantas Medicinales. "Dr juan Tómás Roig". San Antonio de los Baños. Provincia La Habana, Cuba.

1 Licenciada en Química.
2 Máster en Química. Investigadora Auxiliar.
3 Técnico Medio en Tecnología Farmacéutica.
4 Técnico Medio en Agronomía.