Instituto de Neurología y Neurocirugía

Efecto de los extractos acuoso y etanólico de Cestrum nocturnum L. sobre la conducta exploratoria y pruebas de analgesia

Lic. María Teresa Buznego Rodríguez,1  Téc. Alfredo Cuba Peña,2 MSc. Eneida Garriga Sarría,3   Dr. Armando Cuéllar Cuéllar4 y  Dr. Héctor Pérez-Saad5

Resumen

Se estudió el efecto neurofarmacológico  de las fracciones acuosa y etanólica obtenidas a partir de las hojas secas de Cestrum  nocturnum L. mediante su administración aguda sobre los modelos de conducta exploratoria y pruebas de analgesia. El propósito del estudio fue iniciar la búsqueda de los principios activos en  estas fracciones responsables de los efectos analgésicos y sedantes. La fracción acuosa produjo una hipoactividad en  la conducta exploratoria y redujo la respuesta al dolor en forma dependiente de las dosis en la prueba de las contorsiones inducida por ácido acético así como un aumento del tiempo de reacción en el método del plato caliente. La fracción etanólica provocó una disminución de la conducta exploratoria y de la permanencia en el círculo central, así como una disminución de las contorsiones inducidas por ácido acético en forma dependiente de las dosis y del tiempo de reacción en el plato caliente. Una ausencia de paralelismo entre las curvas dosis-efecto de ambos modelos sugirió una independencia molecular entre ambos efectos farmacológicos, los que parecen deberse a principios activos diferentes.

Palabras clave: Cestrum nocturnum L., conducta exploratoria, analgesia.

Estudios anteriores  han demostrado  que la decocción de hojas secas de Cestrum nocturnum L. poseen efectos analgésico, sedante 1 y antiepiléptico.2 Estos resultados concuerdan con el uso que se le da a esta planta en la medicina natural y confirma lo informado por Juan T. Roig  en su libro “Plantas medicinales, aromáticas o venenosas de Cuba”.3

En la literatura, diferentes resultados señalan que la planta posee efectos curativos en enfermedades de la piel, que tiene actividad cardiotónica, hipotensora y estimulante respiratorio (datos no publicados: Nilkulrat L, Master Thesis, Faculty of Pharmacy, Chulalongkorn University Bangkok, Thailand, 1979), abortiva, dispépsica, fungicida, antiespasmódica, diurética, herbicida, antiviral, entre otras.4-10 Trabajos fitoquímicos indican que posee diferentes compuestos con actividades biológicas, posiblemente responsables de las acciones farmacológicas encontradas, como alcaloides, saponinas, ácidos grasos, aceites esenciales, fenoles y otros.11,12

Por otra parte, se conoce que existen varios desórdenes neurológicos que concomitan con dolor crónico. No todas las neuralgias tienen origen nociceptivo, dentro de ellas se encuentran algunas neuropatías que son causadas por disfunción del sistema nervioso periférico.13  Algunas drogas como antiepilépticos,  anestésicos locales son utilizadas como analgésicos,   actúan modulando o bloqueando canales e inhiben de esta manera  la excitabilidad neuronal y la generación de impulsos nerviosos.14-20  No necesariamente todos los antiepilépticos tienen buena actividad analgésica.21-23 Debido a estas razones se emplean en los tratamientos farmacológicos antiepilépticos y analgésicos.  

Por estos antecedentes , es de interés conocer los principios activos responsables de los efectos sedante y analgésico para su posible utilidad en las enfermedades neurológicas.

El propósito del presente trabajo fue comenzar la búsqueda de los principios activos en  las fracciones acuosa y etanólica de C. nocturnum  responsables de  los efectos analgésicos y sedantes mediante su administración aguda sobre los modelos de conducta exploratoria y las  pruebas de analgesia.

Métodos

La especie C. nocturnum  fue identificada  por el Dr. Víctor Fuentes Fiallo y registrada con el número de herbario ROIG 4633, en la Estación Experimental de Plantas Medicinales "Dr  Juan Tomás Roig", CIDEM. Se recolectó en el mes octubre de 2003.

Los experimentos se realizaron en ratones machos, de la línea OF1,  de 18 a 22 g  de peso corporal. Se utilizaron 4 grupos de animales en cada experimento. A todos se le administraron 3 dosis de una fracción (acuosa o etanólica) y  al grupo control, solución salina (NaCl 0,9 %) o etanol al 6 % en solución salina.

El extracto etanólico se diluyó en polivinilpirrolidona al 1% y después de secado a baño de maría se disolvió en etanol al 6 % en solución salina. Las fracciones acuosa y etanólica se emplearon en las dosis de 20,100, 500 y 8, 40 y 200 mg/kg, respectivamente.

Las fracciones y la solución salina se  administraron por vía intraperitoneal, en volumen de 0,01 mL/g de peso corporal, 30 min antes de comenzar la observación. 

Método de extracción

Consistió en  secado al aire del material  vegetal, a temperatura ambiente. Luego, este material se trituró hasta quedar en pedazos muy  pequeños y se colocaron en un dedal de un equipo soxhlet de extracción continua (80 g de planta y 750 mL). Las extracciones se realizaron durante 8 a 16 h, de forma sucesiva sobre el mismo material vegetal con los siguientes disolventes: etanol y agua.24 Las 2 fracciones de forma independiente se concentraron a extracto seco con la utilización de un rotoevaporador al vacío, calculándose su rendimiento por gravimetría y se guardaron en desecadora hasta el momento de efectuar su evaluación biológica.

Conducta exploratoria

La conducta exploratoria se evaluó en ratones mediante un recipiente de campo abierto, con una pared de 15 cm de alto y un diámetro de 30 cm. En el piso se dibujó un círculo concéntrico de 10 cm de diámetro.25 La observación comenzó con la colocación del animal en el círculo central y a partir de ese momento se midieron los indicadores siguientes: 1. latencia (tiempo inicial transcurrido en el círculo central), 2. número de empinamientos, 3. número de veces que el animal atraviesa el círculo central- conducta diagonal y 4. tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central  durante todo el tiempo de observación. Se empleó  un cronómetro manual-mecánico  y el tiempo total de observación fue de 6 min.

Pruebas de analgesia

Prueba del ácido acético. Se inyectó ácido acético al 0,6 % por vía intraperitoneal y se observaron inmediatamente las contorsiones y estiramientos producidos durante 20 min.26

Plato caliente. Los ratones se colocaron encima de una plancha metálica puesta en contacto directo con el agua de un ultratermostato mediante unas paletas soldadas en su superficie inferior.26  Estos fueron restringidos en su movimiento con el empleo de un cilindro de vidrio de 10 cm de diámetro y 15 cm de altura, la temperatura empleada fue de 54 ± 10° C. El tiempo de reacción se tomó como el tiempo de demora de lamido de una de las patas traseras o salto y el tiempo de observación total fue de 2 min.

Resultados

La fracción acuosa provocó una disminución significativa del  número de cruces más empinamientos  con la administración de las dosis  100 y 500 mg/kg (tabla1). Sin embargo no afectó la latencia, ni el tiempo de permanencia total en el círculo central.       

Tabla 1. Efectos de diferentes dosis de la fracción acuosa de C. nocturnum sobre la conducta exploratoria

	Solución salina	Dosis (mg/kg)
		20	100	500
Latencia(s)	5,8	4,7	4,8	7,4
T-círculo(s)	27,4	39,2	42,5	37,1
No. cruces + empinamientos	24,8	17,5	8,9	1,3

n = 10. Los datos representan las medias. 
T-círculo: tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central.
*(p<0,05), **(p<0,01) respecto a solución salina según las pruebas
de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.

La fracción acuosa disminuyó significativamente el número de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético, en una forma dependiente de la dosis.

La dosis de 100 mg/kg prolongó significativamente el tiempo de reacción del plato caliente (tabla 2).

Tabla 2. Efecto de diferentes dosis de la fracción acuosa de C. nocturnum sobre el método de plato caliente y la prueba de ácido acético

Dosis (mg/kg)	Tiempo de reacción: lamidos de patas traseras o saltos (s)	Número de estiramientos y contorsiones
Solución  salina	13,0	35,0
20	17,7	8,1**
100	25,0 *	3,2 **
500	10,8	0,8**

n = 10. Los datos representan las medias.
*(p<0,05), **(p<0,01) respecto a solución salina según las pruebas
de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.

En la figura 1,  se puede observar la ausencia de paralelismo entre las  curvas dosis-efecto  de la conducta exploratoria y de la prueba de analgesia.

Fig. 1. Curvas dosis-efecto del extracto acuoso en la conducta exploratoria y en la prueba de irritación peritoneal inducida por ácido acético. Se encontraron diferencias significativas (p < 0,05), en la comparación de las pendientes de las rectas según la prueba de regresión, n = 10

La administración aguda de la fracción etanólica produjo una disminución significativa de los  cruces más empinamientos y del tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central con  las dosis de 40 y 200 mg/kg correspondientemente (tabla 3), sin afectar la latencia.

Tabla 3. Efectos de diferentes dosis de la fracción etanólica de C. nocturnum sobre la conducta exploratoria

	Diluente	Dosis (mg/kg)
		8	40	200
Latencia (s)	8,2	4,7	9,4	10,4
T-círculo (s)	42,5	26,4	5,9 *	1,8**
No. cruces + empinamientos	16,4	10,7	4,6 *	0,9**

n = 10. Los datos representan las medias.
Diluente: etanol al 6 % en solución salina.
T-circulo: tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central.
*(p<0,05), **(p<0,01)  respecto al diluente según las pruebas
de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.

La fracción etanólica disminuyó significativamente el número de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético, en una forma dependiente de la dosis. El extracto en  las dosis de 40 y 200 mg/kg disminuyó significativamente el tiempo de reacción del plato caliente (tabla 4).

Tabla 4. Efecto de diferentes dosis de la fracción etanólica de C. nocturnum  sobre el método de plato caliente y la prueba de ácido acético

Dosis   (mg/kg)	Tiempo de reacción: (lamidos de patas traseras o saltos(s)	Número de estiramientos y contorsiones
Diluente	10,8	40,0
8	12,5	3,5**
40	8,9 *	0,9 **
200	4,4*	0,6**

n = 10. Los datos representan las medias.
Diluente: etanol al 6 % en solución salina.
*(p<0,05),**(p<0,01) respecto al diluente según las pruebas
de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.

La figura 2 muestra 2 curvas dosis-efecto de la conducta exploratoria y de la prueba de analgesia plantar, en la que se observa una ausencia de paralelismo entre ambas.

Fig.2. Curva dosis-efecto del extracto etanólico en la conducta exploratoria y en la prueba de irritación peritoneal inducido por ácido acético. En la comparación de las pendientes de las rectas se encontraron diferencias significativas (p<0,05) según la prueba de regresión. n=10.

Discusión

Tanto el extracto acuoso como el etanólico mostraron resultados concordantes con el modelo de irritación peritoneal inducido por ácido acético, ya que en ambos casos existió una clara relación dosis-efecto. No ocurrió lo mismo con la prueba del plato caliente, en la que, por el contrario, los efectos fueron opuestos y no existió una relación dosis-efecto.

Es necesario tomar en consideración que las dosis del extracto etanólico que produjeron reducción en el tiempo de reacción del plato caliente inhibieron notoriamente la conducta exploratoria, lo que puede  determinar un efecto aparentemente hiperalgésico debido a una mayor inmovilidad del animal en el plato caliente.

Se puede afirmar que ambos extractos se comportaron como sedantes en la conducta exploratoria y como analgésicos periféricos en el modelo de irritación peritoneal.  Si se toma  en cuenta la ausencia de paralelismo entre estos 2 efectos, los resultados indican que ambos  no se encuentran relacionados molecularmente y que  obedecen a principios activos diferentes.

A pesar de que estudios anteriores reflejan un perfil de acción hipnoanalgésica, 1 estos resultados muestran que la acción analgésica de la planta es independiente de los efectos centrales inhibitorios de la conducta. Si se considera que el efecto sedante pudiera estar asociado a la actividad antiepiléptica 2 descrita para esta planta, el sinergismo de esta propiedad farmacológica con la acción analgésica periférica podría resultar beneficiosa en los desórdenes neurológicos con dolor neural crónico. En conclusión, los extractos acuoso y etanólico de C. nocturnum ponen en evidencia la presencia en la planta de algún principio activo analgésico de tipo periférico y otro con acción sedante.

Summary

Effect of aqueous and ethanol extracts of Cestrum nocturnum L. on the animal´s exploring behaviour and on analgesia tests

The neuropharmacological effect of aqueous and ethanol fractions from Cestrum nocturnum L. dry leaves through acute administration on animal´s exploring behaviour and analgesia test models was studied. The objective of this study was to begin searching for the active principles existing in these fractions, which are responsible for analgesic and sedative effects. The aqueous fraction caused hypoactivity animal's exploring behaviour and reduced dose-dependent response to pain in acetic acid-induced contortions as well as increase in reaction time in the hot-plate method. The ethanol fraction caused a reduction in animal's exploring behavior and in the length of stay in the 10-cm diameter central circle as well as a decrease in acetic acid-induced contortions depending on the dose, and in reaction time in the hot-plate method. The lack of parallelism between the dose-effect curves of both models suggested molecular independence in both pharmacological effects, which seem to be due to different active principles.

Key words: Cestrum nocturnum L., exploring behavior, analgesia.

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Recibido: 8 de noviembre de 2004. Aprobado: 22 de julio de 2005.
Lic. María Teresa Buznego Rodríguez. Instituto de Neurología y Neurocirugía. Avenida 29 y calle D, Habana 10400, Plaza de La Revolución. La Habana, Cuba. Teléfono: 553034 e-mail: [e-mail]

1Licenciada en Ciencias Biológicas. Investigadora Auxiliar.
2Técnico en Investigación Científica.
3Máster en Informática en Salud. Licenciada en Matemática. Profesora Auxiliar.
4Doctor en Ciencias Químicas. Máster en Ciencias. Profesor Titular.
5Doctor en Ciencias Médicas. Investigador Titular.

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