Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).
Departamento de Investigaciones Biológicas.

Actividad de Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng. tabletas
100 mg sobre la musculatura lisa intestinal

Lic. Yanier Nuñez Figueredo,1 Dra. Juana Tillán Capó,2 Téc. Carmen Carrillo Domínguez,3 Téc. Claudia Montero Alarcón,3 Lic. Rosa Menéndez Castillo4 y Lic. Rafael Diego León5

RESUMEN

En el presente trabajo se evaluaron las tabletas de 100 mg de Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng. (orégano francés) sobre la musculatura lisa y su influencia en la transmisión colinérgica, para lo cual se utilizaron cobayos machos de la raza Hartley de 200-250 g de masa corporal, para la extracción de diferentes porciones de íleon. Como resultado se obtuvo que las tabletas 100 mg de P. amboinicus (Lour.) Spreng., a las diferentes concentraciones evaluadas, provocaron contracción inmediata de la musculatura lisa; el orégano francés mostró un marcado efecto antimuscarínico frente a las concentraciones inducidas por acetilcolina (ACh) de 10^-6 a 10^-3 M. La administración conjunta de P. amboinicus (Lour.) Spreng. 10 mg/mL y ACh 10^-3 M no superó la contracción provocada por esta última de manera independiente y la atropina 3 x 10^-12 M disminuyó las contracciones provocadas por las diferentes concentraciones de orégano francés y ACh 10^-3 M, por lo que las tabletas evaluadas presentan tanto efecto agonista como antagonista de la transmisión colinérgica.

Palabras clave: Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng., orégano francés, antimuscarínico, íleon, asma bronquial.

El empleo de las plantas con fines medicinales es una de las opciones terapéuticas más empleadas. En la actualidad se ha convertido en una alternativa de primera elección para el tratamiento de diversas enfermedades.

Al Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng., conocido como orégano francés, se le atribuyen propiedades anticonvulsivas, antiepilépticas, antiasmáticas, antiespasmódicas, sedantes, broncodilatadoras y antimicrobianas.¹

En Cuba se usa principalmente como condimento, aunque también en remedios caseros como cocimiento contra los catarros. Tanto en nuestro país como en Viet Nam se utiliza contra el asma y catarros crónicos, la epilepsia, y otras afecciones convulsivas. Además se le atribuyen propiedades antiflogísticas y sedantes.¹

Por su gran aceptación popular para el tratamiento del asma bronquial, en nuestro centro se realizó la investigación de P. amboinicus (Lour.) Spreng., por lo que decidimos evaluar el efecto del mismo sobre la musculatura lisa y en especial sobre la transmisión colinérgica, ya que como es conocido cuando la acetilcolina (ACh) interactúa con sus receptores m 1 y m 3 presentes en el músculo liso, provoca contracción del mismo y por lo tanto incide de manera negativa en los cuadros asmáticos.²

MÉTODOS

Sustancia de ensayo

Tabletas de 100 mg de P. amboinicus (Lour.) Spreng., lote 7002, procedentes de la UCTB Tecnologías Básicas, CIDEM y obtenidas a partir del extracto acuoso seco de dicha planta (número de herbario 45797 de la Estación Experimental de Plantas Medicinales Juan Tomás Roig). El proceso de secado por atomización seca se realizó en el Centro de Biopreparados (BIOCEN). Las tabletas se disolvieron en agua destilada para su empleo.

Estas presentaron las siguientes características: polifenoles totales: 15,4 mg/tableta, peso promedio: 0,2247 g y conteo microbiano: cumple.

Reactivos

Acetilcolina a partir de una solución de 2 x 10^-4 M. SIGMA, USA.
Atropina 3 x 10^-12 M. lote 00002. Laboratorios ERON S.A, Cuba.

Animales de experimentación

Se utilizaron cobayos machos, de la raza Hartley, de 200 a 250 g de masa corporal procedentes del Centro Nacional de Producción de Animales de Laboratorios (CENPALAB).

Condiciones ambientales y de laboratorio

Los animales se mantuvieron en un cuarto con temperatura controlada de 22 ± 2 ºC, con un ciclo luz – oscuridad 12/12 h. La dieta administrada consistió en pienso convencional para cobayos CCO 1302 del CENPALAB y agua a voluntad.

Método

Los animales fueron sacrificados por tracción de la nuca para la obtención del íleon de acuerdo a la técnica de Sainz y otros colaboradores.^3,4 Los fragmentos del órgano, de aproximadamente 2-3 cm de longitud, fueron colocados en un baño de 20 mL de capacidad, que contenía solución de Krebs a una temperatura de 37 ^oC y burbujeada con una mezcla de O₂ (95 %) y CO₂ (5 %).

Para la determinación del efecto del P. amboinicus sobre la musculatura lisa se realizaron los siguientes ensayos:

• Efecto de las concentraciones de 1, 3 y 10 mg/mL de P. amboinicus tabletas sobre la musculatura lisa.
• Curva acumulativa de acetilcolina en un rango de concentraciones de 1 x 10^-6 a 1 x 10^-3 M, sola y en presencia de las soluciones de P. amboinicus sobre la musculatura lisa del órgano, para lo cual las porciones de íleon son incubadas durante 10 minutos con las diferentes concentraciones de orégano francés y posteriormente se le adiciona el agonista.
• Evaluación de la solución de acetilcolina que provoque el 100 % de contracción del órgano en presencia de la concentración de P. amboinicus de mayor respuesta. En este caso se le adiciona el orégano francés y en el momento que ocurre la máxima contracción se adiciona la ACh 10-3 M; también se estimula el órgano con ambos agonistas de manera independiente.
• Efecto de la atropina sobre la respuesta provocada por las diferentes concentraciones de P. amboinicus. Para ello el órgano es incubado durante 10 minutos con atropina 3 x 10^-12 M y posteriormente se adicionan las diferentes concentraciones de orégano francés y ACh 10^-3 M de manera independiente.

En todos los casos se determinó la amplitud de las contracciones de las porciones de órganos aislados, repitiendo cada operación 5 veces. Los registros se realizaron con la ayuda de un transductor isotónico acoplado a un polígrafo Nihon Khoden con una velocidad de 10 mm/min y una sensibilidad igual a 10.

Procesamiento estadístico

Los resultados obtenidos en los diferentes ensayos, se expresaron a través de la media ± desviación estándar. Se procesaron mediante un análisis de varianza de una vía y posteriormente se realizó un test de Duncan con un nivel de significación de p < 0,05.⁵

RESULTADOS

En la Fig. 1 se observan las contracciones provocadas por P. amboinicus sobre la musculatura lisa, la cual guarda una relación dosis-dependiente en el rango de concentraciones evaluadas (1, 3 y 10 mg/mL).

Fig. 1. Porciento de contracción provocada por el Plectrhanthus amboinicus (Lour.) Spreng. con respecto a la ACh 10^-3 M.

La concentración de 10 mg/mL provocó una contracción que difiere significativamente para p < 0,01 de 1 y 3 mg/mL y de la dosis de ACh que provocó la máxima contracción (10^-3 M).

En la curva acumulativa (Fig. 2) se puede observar cómo las tabletas de orégano francés a las concentraciones de 1 y 3 mg/mL estimulan los efectos contráctiles del agonista cuando este se encuentra a concentraciones inferiores a 10^-5 M; lo cual no ocurre con la concentración de 10 mg/mL del orégano francés.

Fig. 2. Porciento de respuesta antimuscarínica del Plectrhanthus amboinicus (Lour.) Spreng tabletas 100 mg.

A partir de las concentraciones del agonista mayores a 10^-4 M se observa una respuesta totalmente opuesta para la curva acumulativa de ACh en presencia de orégano francés 1 y 3 mg/mL, produciéndose una disminución dosis dependiente de las contracciones inducidas por la ACh. La contracción provocada por ACh 10^-3 M se vio disminuida un 92 % por la concentración de 10 mg/mL de P. amboinicus.

En la Fig. 3, se muestran los resultados de la administración del orégano francés 10 mg/mL y ACh 10^-3 M administrados de forma conjunta donde se observa una mayor contracción del íleon que la provocada por el orégano francés y menor que la inducida por la ACh sola.

Fig. 3. Contracción provocada por Plectrhanthus amboinicus (Lour.) Spreng. 10 mg/mL y ACh 10^-3 M administrados juntos y de manera independiente.

En la figura 4, se puede observar cómo la atropina 3 x 10^-12 M provoca inhibición de la respuesta contráctil inducida por las diferentes concentraciones del orégano francés y la ACh 10^-3 M.

Fig. 4. Contracción provocada por Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng. a las diferentes concentraciones evaluadas y la ACh 10^-3 M de forma independiente y en presencia de atropina 3 x 10^-12 M.

DISCUSIÓN

Las tabletas de 100 mg de P. amboinicus tienen la propiedad de inducir contracción de la musculatura lisa inmediatamente después que se le adiciona al baño; dicha contracción permanece durante un período de tiempo inferior a los 2 minutos y posteriormente el órgano vuelve a su estado de relajación inicial.

Una vez que ha transcurrido el período de incubación podemos observar que si el íleon es estimulado con ACh a concentraciones que se encuentran entre 10-5 y 10-3 M, sus contracciones son significativamente inferiores; vale destacar que las concentraciones de 1 y 3 mg/mL de P. amboinicus aumentan la contracción provocada por la ACh a concentraciones entre 3 x 10^-6 y 10^-5 M. Este comportamiento es justificable si tenemos en cuenta que nuestro objeto de estudio es un producto de origen natural.

Cuando la estimulación del órgano se realizó mediante la administración conjunta e independiente de ACh 10^-3 M y orégano francés 10 mg/mL se pudo observar que la respuesta contráctil provocada por ambos agonistas juntos no superó la contracción provocada por la ACh de forma independiente, de ahí que el efecto agonista observado de P. amboinicus parece estar mediado por los receptores de la ACh a nivel de la musculatura lisa.

Cuando provocamos un previo bloqueo de los receptores muscarínicos añadiendo al baño 3 x 10^-12 M de atropina la cual como se conoce es un antagonista muy selectivo de dichos receptores⁶, obtuvimos que las tabletas 100 mg de P. amboinicus provocan contracción de la musculatura lisa, principalmente por la interacción con los receptores muscarínicos, aunque no se puede descartar la posibilidad de que también contraiga la musculatura lisa por otro mecanismo, ya que la atropina a pesar de disminuir significativamente la contracción provocada por el orégano francés, dicha disminución fue menor que la alcanzada cuando el órgano fue estimulado con ACh.

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, nos inclinamos a pensar que las tabletas analizadas presentan actividad antagonista⁷ y agonista sobre los receptores de la ACh a nivel de la musculatura lisa. Este resultado bifásico puede deberse a que las tabletas 100 mg de P. amboinicus fueron obtenidas a partir del secado del extracto acuoso de las hojas de dicha planta, el que como es conocido, presenta una composición química heterogénea,^8-12 lo que le confiere la propiedad de presentar diversos efectos biológicos.

El predominio del efecto antimuscarínico observado puede disminuir la intensidad de las crisis asmáticas. Es por ello que actualmente las combinaciones de fármacos con actividad anticolinérgica están indicados para la terapia de esta enfermedad.^13,14

Nuestros resultados nos permiten concluir que las tabletas 100 mg de P. amboinicus provocaron contracción de la musculatura lisa, mostraron efecto antimuscarínico, presentaron un efecto bifásico sobre la musculatura lisa con predominio de la respuesta antimuscarínica y la atropina disminuyó las contracciones provocadas por las tabletas.

Summary

Activity of Plectranthus amboinicus (Lous.) Spreng 100 mg tablets on the intestinal smooth musculature

In the present paper, the effects of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreg (French origan) 100 mg tablets on the smooth musculature, as well as their influence on the cholinergic transmission were evaluated by using male Hartley guinea pigs with 200 to 250 g of body mass for extracting different portions of ileum. It was observed that the P. amboinicus (Lour.) Spreg, 100 mg tablets at the different assessed concentrations provoked an immediate contraction of the smooth musculature. The French origan showed a marked antimuscarinic effect against Acethylcholine-induced contractions (ACh) from 10^-6 to 10^-3 M. The combined administration of P. amboinicus (Lour.) Spreg 10 mg/mL and ACh 10^-3 M did not surpass the contraction induced by the latter in a independent way, whereas atropine 3 x 10^-12 M decreased the contractions produced by different concentrations of French origan and ACh 10^-3 M. That is why, the evaluated tablets present an agonist and antagonist effect of the cholinergic transmission.

Key words: Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng, French origan, antimuscarinic, ileum, bronchial asthma.

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Recibido: 5 de octubre de 2006. Aprobado: 30 de ocutbre de 2006.
Lic. Yanier Nuñez Figueredo. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). Departamento de Investigaciones Biológicas. 17 No. 6208 e/ 62 y 64 Playa. Ciudad de La Habana. Cuba. E-mail: [e-mail]
[e-mail] Fax: [phone]

1Licenciado en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a investigador.
2Doctora en Ciencias Veterinarias. Investigadora Auxiliar.
3Técnico Medio en Farmacia.
4Licenciada en Farmacia. Investigadora Auxiliar.
5Licenciado en Química. Investigador Auxiliar.