Centro de investigación y desarrollo de medicamentos (CIDEM). UCTB control biológico.

Efecto de Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng. tabletas sobre la anafilaxia pasiva cutánea, transmisión histaminérgica y adrenérgica

Yanier Nuñez Figueredo,1 Juana Tillán Capó,2 Carmen Carrillo Domínguez,3 Rosa Menéndez Castillo4 y Rafael Diego León5

RESUMEN

Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng., más conocido en nuestro país como orégano francés, es una planta a la que se le confieren una gran cantidad de propiedades terapéuticas para el tratamiento de diferentes enfermedades dentro de las que se encuentra el asma bronquial. En el presente trabajo se realizó la evaluación de las tabletas 100 mg de Plectranthus amboinicus sobre la anafilaxia pasiva cutánea y la transmisión adrenérgica e histaminérgica. Como resultado final de este trabajo pudimos comprobar que Plectranthus amboinicus tabletas de 100 mg inhibe la anafilaxia pasiva cutánea, potencia la transmisión adrenérgica e inhibe los efectos de la histamina cuando esta interactúa con los receptores H₁ presentes a nivel intestinal. Podemos concluir que las tabletas de 100 mg de Plectranthus amboinicus podrían emplearse en el tratamiento de enfermedades alérgicas tipo I y con esto justificar el uso popular de la planta en el asma bronquial.

Palabras clave: Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng., anafilaxia pasiva cutánea, transmisión adrenérgica, transmisión histaminérgica, reacciones de hipersensibilidad tipo I, asma bronquial.

El empleo de las plantas con fines medicinales es una de las opciones terapéuticas más empleadas. En la actualidad se ha convertido en una alternativa de primera elección para el tratamiento de diversas enfermedades.

Al Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng., conocido como orégano francés, se le atribuyen propiedades anticonvulsivas, antiepilépticas, antiasmáticas, antiespasmódicas, sedantes, broncodilatadoras y antimicrobianas.1

En Cuba, se usa principalmente como condimento, aunque también en remedios caseros como cocimiento contra los catarros. Tanto en nuestro país, como en Viet Nam, se utiliza en el asma y catarros crónicos, la epilepsia y otras afecciones convulsivas. Además, se le atribuye propiedad antiinflamatoria y sedante.¹

Por su gran aceptación popular para el tratamiento del asma bronquial, en nuestro centro se realiza la investigación de P. amboinicus. Decidimos evaluar los efectos sobre las reacciones de hipersensibilidad tipo I, mediante el ensayo de anafilaxia pasiva cutánea, basada en la administración intradérmica del anticuerpo, seguida de la aplicación intravenosa del antígeno (fenómeno de Arthus), transmisión adrenérgica e histaminérgica in vitro.

MÉTODOS

Sustancia de ensayo

Tabletas de 100 mg de P. amboinicus, lote 7002, procedentes del Departamento de Formas Terminadas del CIDEM y obtenidas a partir del extracto acuoso seco de dicha planta (número de herbario ROIG 45797 de la estación experimental de plantas medicinales Juan Tomás Roig). El proceso de secado por atomización seca se realizó en el Centro de Biopreparados (BIOCEN). Las tabletas se disolvieron en agua destilada para su empleo.

Las tabletas presentaron las siguientes características: polifenoles totales: 15,4 mg/tableta, peso promedio: 0,2247 g y conteo microbiano: cumple.

Reactivos

Adrenalina 1 mg/mL, lote 97002, Laboratorios Eron S.A., Cuba.
Fosfato ácido de histamina, BDH, USA.
Ketotifeno 1 mg como control positivo, lote 020899043, Laboratorios Eron S.A., Cuba.
Albúmina de huevo. Fluka Chemie AG, CH-9740 Buchs, Francia.

Animales de experimentación

Se utilizaron ratas Wistar machos, de 300 a 350 g de peso corporal y ratones albinos suizos machos de 18 a 22 g de peso corporal para el ensayo de anafilaxia pasiva cutánea; en la evaluación de la transmisión adrenérgica se emplearon ratas Wistar machos de 300-400 g de masa corporal procedentes de la UCTB Control Biológico del CIDEM; para el ensayo antihistamínico in vitro se usaron cobayos Hartley machos (400- 450 g de peso corporal) procedentes del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB).

Todos los animales permanecieron en condiciones de temperatura controlada de 22 ± 2 ºC y ciclo luz – oscuridad 12/12 h. La alimentación consistió en pienso convencional para ratas-ratones y cobayos proveniente del CENPALAB y agua a voluntad.

Obtención del antisuero de ovoalbúmina

Se administraron 0,2 mL de solución sensibilizante de albúmina de huevo 0,1 % a un grupo de 20 ratones por vía intraperitoneal.

La solución sensibilizante posee la siguiente composición:

Albúmina de huevo 0,1%	10 mL
NaHCO 3 8,4 %	4,5 mL
KAl(SO4) 2 10 %	10 mL
PBS pH 7,4	20 mL

Fueron realizadas 2 administraciones con 7 días de intervalo; 14 días después de la última administración se sacrificaron los animales para extraer la sangre por la vena femoral, la cual se centrifugó a 2500 rpm por 10 min para la obtención del antisuero.

Ensayo in vivo

Ensayo de anafilaxia pasiva cutánea

Para el ensayo se formaron 3 grupos de trabajo de 3 animales cada uno: un grupo recibió P. amboinicus 100 mg tabletas, a una dosis de 750 mg/kg, el grupo control positivo administrado con ketotifeno 3 mg/kg y un grupo control que no recibió tratamiento.

P. amboinicus se administró por vía oral durante un período de 10 días. El ketotifeno se administró por la misma vía 1 h antes de inducir la anafilaxia, al igual que la última administración realizada del producto de ensayo.

Las ratas fueron rasuradas en el área dorsal 1 h antes de la administración intradérmica, de 0,1 mL de antisuero de albúmina de huevo diluido en cloruro de sodio 0,9 % en 6 sitios del lomo de cada animal. Pasadas 24 h, se provocó la reacción anafiláctica mediante la administración por vía intravenosa de 1 mL de una solución al 0,1 % de albúmina de huevo en el colorante azul de Evans 1 %. Los animales fueron sacrificados, 1 h después de provocada la reacción de anafilaxia para la extracción de porciones de piel que fueron colocadas en tubos de ensayo que contenían 4 mL de formamida e incubadas a 37 °C durante 48 h. Se midió la densidad óptica del colorante extravasado a una l = 623 nm. Los valores de densidad óptica obtenidos fueron expresados en mg de azul de Evans extravasado/sitio.^2-6

Ensayos in vitro

En los ensayos in vitro los órganos aislados se prepararon según la técnica propuesta por Sainz y otros7,8 empleando un baño de órgano de 20 mL de capacidad que contenía solución Krebs a 37 ºC, burbujeada con una mezcla de O2 (95 %) y CO2 (5 %).

Evaluación de la transmisión adrenérgica 7

Se utilizaron conductos deferentes de ratas para realizar las cuevas acumulativas de adrenalina en presencia y ausencia de orégano francés tabletas a concentraciones de 1, 3 y 10 mg/mL. El orégano francés se añadió al baño 10 min antes de cada dosis de adrenalina, las cuales se encontraban en un rango de 10^-8 a 3 x 10^-7 M.

Se formaron 4 grupos de tratamientos: control, recibió epinefrina a las concentraciones de 10^-8; 3 x 10^-8; 10^-7; 3 x 10^-7 M; epinefrina a las mismas concentraciones + orégano francés Tab. 1 mg/mL; epinefrina a las mismas concentraciones + orégano francés Tab. 3 mg/mL; epinefrina a las mismas concentraciones + orégano francés Tab. 10 mg/mL.

Actividad antihistamínica 8,9

Se realizó la evaluación de la curva acumulativa de histamina en íleon aislado de cobayos, en un rango de concentraciones entre 10-8 y 10-5 M. Las concentraciones de orégano francés ensayadas fueron 0,3; 1 y 3 mg/mL.

En ambos ensayos in vitro se determinó la amplitud de las contracciones de las preparaciones de órganos aislados, cada operación fue repetida 5 veces, los registros se realizaron con la ayuda de un transductor isotónico acoplado a un polígrafo Nihon-Kohden, con una velocidad de 10 mm/min y una sensibilidad igual a 10.

Procesamiento estadístico

Los resultados obtenidos, en los diferentes ensayos, se expresaron como media ± desviación estándar. Los mismos se procesaron mediante un análisis de varianza de una vía y posteriormente se realizó un test de Duncan con un nivel de significación de p <0,05.10

RESULTADOS

Anafilaxia pasiva cutánea (ACP)

Los resultados de la administración de las tabletas de orégano francés a la dosis de 750 mg/kg, por un período de diez días sobre la ACP, en ratas, se muestran en la tabla 1, reflejándose las intensidades de la reacción anafiláctica, a través de la cantidad de colorante extravasado/sitio (mg/sitio).

Al realizar el análisis estadístico se comprobó que los valores obtenidos de la cantidad de colorante extravasado en el grupo administrado con las tabletas 100 mg de P. amboinicus presentaron diferencias significativas con respecto a los otros grupos para ( p < 0,01).

Tabla 1. Medias de la cantidad de colorante extravasado/sitio en cada uno de los grupos de ensayo.

Grupos de ensayos	µg/sitio ± D. S
Control negativo	9,81 ± 0,873 a
Tabletas de orégano francés 750 mg/kg	4,33 ± 0,983 b
Ketotifeno 3 mg/kg	0,91 ± 0,28 c

Transmisión adrenérgica

En la Fig.1, se puede apreciar que las tabletas de orégano francés 100 mg potencian la respuesta contráctil del conducto deferente de ratas tras la administración de las diferentes concentraciones de epinefrina. También pudimos observar que el orégano francés administrado de manera independiente no provocó contracción del órgano.

Fig. 1. Efecto de Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng. sobre el conducto deferente de ratas estimulado con epinefrina.

Actividad antihistamínica in vitro

Los resultados se muestran en la Fig. 2, donde se puede observar cómo el porcentaje de respuesta contráctil del íleon provocada por la administración de las diferentes concentraciones de histamina (10^-8 M – 10^-5 M), disminuye a medida que se incrementan las concentraciones del orégano francés en el baño, siendo este efecto dosis dependiente y diferente respecto al control para p < 0,01. Vale destacar que las concentraciones de P. amboinicus tabletas 100 mg de 1 y 3 mg/mL disminuyeron en más de un 50 % la contracción provocada por la histamina 10^-5 M.

Fig. 2. Porciento de respuesta antihistamínica del Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng. tabletas 100 mg.

Discusión

Como es conocido, la reacción antígeno - IgE produce un cambio estructural a nivel de la membrana del mastocito que suele alterar la permeabilidad de la misma, permitiendo el rápido ingreso de diversos iones, entre ellos el calcio, el cual es esencial para la degranulación de éstas células. Además, se produce un cambio bifásico en los niveles de AMP cíclico, lo que hace que ocurra un incremento rápido del mismo, seguido de una disminución notable. Es precisamente durante esta disminución notable de AMP cíclico que se liberan los mediadores de la anafilaxia.^3-6,11

En el presente ensayo se provocó la anafilaxia pasiva cutánea mediante un mecanismo inmunológico y se observó el efecto inhibitorio mostrado por las tabletas 100 mg de orégano francés a una dosis de 750 mg/kg probablemente debido a que estas:

• Impidan de alguna manera la reacción antígeno - anticuerpo.
• Impidan la síntesis y/o liberación de los mediadores alérgicos como consecuencia de la reacción antígeno – anticuerpo especialmente de la histamina, serotonina, bradiquinina, factor activador de plaquetas, prostaglandinas y/o leucotrienos por ser ellos los que provocan fragilidad capilar, por parte de los mastocitos.^3-6,11
• Antagonicen los receptores de la histamina, serotonina, bradiquinina, prostaglandinas y/o leucotrienos impidiendo así que se produzca la fragilidad capilar provocada por ellos y por lo tanto que halla una disminución de la cantidad de colorante extravasado/sitio, ya que los productos antagonistas de estos mediadores inhiben el aumento de la permeabilidad capilar producida por estos.^3-6,11

Por todo lo anterior el empleo de las tabletas 100 mg de orégano francés pudieran ser efectivas en el tratamiento profiláctico de enfermedades alérgicas tipo I.

El conducto deferente de ratas es un órgano que cuenta predominantemente con receptores a - adrenérgicos que responden a las catecolaminas mediante una contracción,⁷ por esta razón este modelo es empleado para el estudio de sustancias que actúan a este nivel.

Los resultados obtenidos en la evaluación del orégano francés 100 mg/tabletas sobre la transmisión adrenérgica nos sugieren que existe un incremento de la interacción de la adrenalina con sus receptores posiblemente por un bloqueo de algunos de sus mecanismos de inactivación¹² o por un aumento de la afinidad por su sitio de unión en el mismo. Igualmente constituyen datos muy alentadores para el empleo de dichas tabletas en el tratamiento del asma bronquial, sobre todo si tenemos en cuenta que los fármacos que interactúan con los receptores adrenérgicos ß₂ presentes en la musculatura lisa bronquial provocan que la misma se relaje y de esta manera se facilita el intercambio gaseoso.¹³

Los resultados del efecto antihistamínico del orégano francés, nos hacen pensar en un posible bloqueo de los receptores H₁ presentes a nivel de la musculatura lisa.

A pesar de que durante una crisis asmática no son liberadas grandes cantidades de histamina en relación con los otros mediadores, sí es conocido que esta al interactuar con los receptores H₁ presentes en la musculatura lisa provoca contracción de la misma, de ahí que en algunos casos esté indicado el tratamiento con antihistamínicos en pacientes asmáticos, principalmente si estos presentan además rinitis alérgica.^11,14

Nuestros resultados nos permiten concluir que las tabletas de P. amboinicus: inhibieron la anafilaxia pasiva cutánea en ratas, aumentaron el efecto contráctil de la adrenalina sobre el conducto deferente en ratas, mostraron efecto antihistamínico in vitro sobre los receptores H₁ a nivel intestinal.

Summary

Effect of Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng tablets on the passive cutaneous anaphylaxis, histaminergic and adrenergic transmission.

Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng, well-known in our country as French origan, is a plant with many therapeutical properties for the treatment of different diseases, including bronchial asthma. In the present paper, the effect of Plectranthus amboinicus tablets (100 mg) on the passive cutaneous anaphylaxis and on the adrenergic and histaminergic transmission was evaluated. As a final result of this paper, it was possible to confirm that these tablets inhibit the passive cutaneous anaphylaxis, potentiates the adrenergic transmission, and inhibits the effects of histamine when it interacts with H₁ receptors present at the intestinal level. It was concluded that the Plectranthus amboinicus tablets 100 mg could be used in the type I treatment of allergic diseases, and thus justify the popular use of this plant for bronchial asthma.

Key words: Plectranthus amboinicus (Lour.) Spreng, passive cutaneous anaphylaxis, adrenergic transmission, histaminergic transmission, type I hyperresponsiveness reactions, bronchial asthma.

REFERENCIAS BIBIOGRÁFICAS

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Recibido: 10 de octubre de 2006. Aprobado: 25 de octubre de 2006.
Lic. Yanier Nuñez Figueredo. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).Departamento de Investigaciones Biológicas. 17 No. 6208 e/ 62 y 64 Playa. Ciudad de La Habana. Cuba. E-mail: [e-mail]
[e-mail] Fax: [phone]

1Licenciado en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a investigador.
2Doctora en Ciencias Veterinarias. Investigadora Auxiliar.
3Técnico Medio en Farmacia.
4Licenciada en Farmacia. Investigadora Auxiliar.
5Licenciado en Química. Investigador Auxiliar.