ARTÍCULO ORIGINAL

 

Acción antiedemagénica de los extractos de corteza del fruto de Citrus sinensis L. y Citrus aurantiun L. en modelo de hiperpermeabilidad vascular en ratas

 

Anti-edematogenic action of extracts from Citrus sinensis L. and Citrus aurantium L. fruit barks on a vascular hypermeability model in rats

 

 

María Antonia Alfonso Valiente^I; Milagros García Mesa^II; Gertrudis García Lazo^III; Dulce Sánchez Hernández^IV; Daisy Duperon del Sol^V; Rodobaldo Lemus Dávila^VI

^I Máster en Bioenergética y Atención Primaria de Salud. Investigadora Auxiliar. Departamento de Cirugía Experimental. Instituto Nacional de Angiología. Ciudad de La Habana, Cuba.
^II Doctora en Ciencias Biológicas. Profesora Titular. Investigadora Titular. Departamento de Bioquímica. Instituto Nacional de Angiología. Ciudad de La Habana, Cuba.
^III Máster en Bioenergética y Atención Primaria de Salud. Profesora Asistente. Facultad Salvador Allende. Ciudad de La Habana, Cuba.
^IV Licenciada en Farmacia. Centro de Producción de Medicina Natural. Empresa de Medicamentos del Este. Ciudad de La Habana, Cuba.
^V Licenciada en Farmacia. Centro de Producción de Medicina Natural. Empresa de Medicamentos del Este. Ciudad de La Habana, Cuba.
^VI Técnico en Veterinaria. Departamento de Cirugía Experimental. Instituto Nacional de Angiología. Ciudad de La Habana, Cuba.

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RESUMEN

INTRODUCCIÓN: a los extractos de Citrus sinensis L. y Citrus aurantium L. se les atribuyen acciones farmacológicas útiles para las enfermedades circulatorias, sin embargo, no existe una demostración científica que pueda avalar tales efectos.
OBJETIVO: evaluar la acción antiedemagénica de los extractos de corteza del fruto seca de Citrus sinensis L. y Citrus aurantium L.
MÉTODOS: se calculó el área del edema formado en la piel del lomo de las ratas tratadas con extractos de Citrus sinensis L. y Citrus aurantium L. 60 ratas Wistar con peso promedio de 250 g, fueron divididas en 3 grupos de 20 animales cada una y tratadas con los extractos por vía oral (50, 100 y 200 mg/kg) en distintos tiempo (2 h; 3, 7 y 14 d); 24 h después de tratadas se inyectó por vía intradérmica histamina y dextrana grado A 200-27500 para inducirle el incremento de la permeabilidad. Se midieron los edemas producidos en el lomo de las ratas. Se calculó el área y se comparó con el grupo control.
RESULTADOS: se observó marcada reducción de edemas en la piel de las ratas tratadas al compararlas con los controles. El tiempo óptimo de tratamiento para producir el efecto deseado fue de 7 d.
CONCLUSIONES: se demostró la acción antiedemagénica de los extractos estudiados.

Palabras clave: Histamina, dextrana, permeabilidad capilar, edemagénico, Citrus sinensis, Citrus aurantium.

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ABSTRACT

INTRODUCTION: useful pharmacological actions upon circulatory disorders have been attributed to the Citrus sinensis L. and Citrus aurantium extracts. However, there is no scientific evidence endorsing such benefits.
OBJETIVE: to evaluate the anti-edematogenic action of extracts from Citrus sinensis L. y Citrus aurantium dry fruit barks.
METHODS: the edematous area that appeared on the rat´s back skin, which had been treated with extracts from Citrus sinensis L. y Citrus aurantium, was estimated. Sixty Wistar rats weighing 250 g as average were divided into 3 groups of 20 animals each and orally treated with the extracts (50, 100 and 200 mg/kg) at different intervals (2 h; 3, 7 and 14 days); 24 hours after treatment, they were intradermically injected histamine and grade A dextrane 200-27500 in order to induce increased permeability. All the edemas on the back of rats were measured. The area was estimated and compared with that of the control group.
RESULTS: substantial reduction of edemas on the skin of treated rats was observed when making a comparison with the control group. The optimal treatment time to reach the desired effect was 7 days.
CONCLUSIONS: the anti-edematogenic action of the studied extracts was demonstrated.

Key words: Histamine, dextrane, capillary permeability, edematogenic, Citrus sinensis, Citrus aurantium

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INTRODUCCIÓN

Las enfermedades vasculares constituyen una de las primeras causas de morbilidad al nivel mundial, ocasionan graves trastornos al hombre que pueden llegar a invalidez parcial o total los que sobreviven.¹

Estas enfermedades se caracterizan por afectar principalmente a las personas de la tercera edad, las cuales sufren afectación en su calidad de vida.^2,3

La naranja es una de las plantas del género Citrus más abundante en Cuba. Los principales metabolitos con actividad biológica que presentan son los flavonoides,^4,5 a los cuales se le atribuye actividad antiinflamatoria, antioxidante, protectora de los vasos sanguíneos, antiagregante plaquetario^6-8 y antiaterogénico. Estas propiedades biológicas los señalan como posibles opciones para el tratamiento de enfermedades vasculares.

A pesar del potencial terapéutico para las enfermedades vasculares que poseen las plantas cítricas en Cuba, no se han realizado estudios para evaluar estas acciones farmacológicas, lo cual es un requisito indispensable para determinar su posible utilidad para el tratamiento de enfermedades vasculares.

Por tal motivo, en el presente trabajo se evaluó la acción antiedemagénica de los extractos Citrus sinensis L. y Citrus aurantium L. de producción nacional.

MÉTODOS

Se utilizaron 60 ratas Wistar machos con un peso promedio de 250 g, procedentes del Centro Nacional para Animales de Laboratorio (CENPALAB).

Las ratas se dividieron aleatoriamente en 3 grupos de 20 animales, el medicamento fue aplicado por vía oral mediante una cánula intragástrica, los tiempos de tratamiento fueron de: 2 h y 3, 7, 14 d antes de realizar el modelo de inducción de edema.

Las ratas se anestesiaron con una mezcla de ketamina, atropina y diazepam, se inyectó por vía intraperitoneal 1,5 mL de la mezcla antes mencionada, el pelo de la región dorsal fue removido. En esta región se aplicaron por duplicado inyecciones intradérmicas (0,1 mL de soluciones de histamina a una concentración de 40 µg/mL y de dextrana grado A 200-275 000 a una concentración de 200 µg/mL como agentes edemagénicos a diferentes concentraciones en solución salina fisiológica). Después de 30 min se inyectó 1 mL de una solución de azul de Evans (10 mg/mL en solución salina fisiológica) por vía intravenosa (vena cava); 20 min más tarde, las ratas fueron sacrificadas por exposición de la cavidad torácica y la piel del lomo cortada. Seguidamente, se midieron con una regla plástica los diámetros de las manchas azules presentes en cada sitio de inyección y se calculó el área de cada mancha expresada en mm².

Los extractos proceden del Centro Producción de Medicina Natural. Empresa de Medicamentos del Este, se trabajaron con los números de lotes siguientes: Citrus sinensis L 801003 (Enero 08) y Citrus aurantium L 804002 (Abril 08).

Los métodos utilizados con los extractos son bajo las Normas de Salud Pública #311 de 1991.

El contenido de alcohol fue eliminado mediante el proceso de rotoevaporización y se completó el volumen prefijado con agua.

Para los ensayos de los extractos se prepararon diluciones del menstruo equivalente a las que se utilizaron en los extractos, los cuales fueron suministrados a los grupos controles.

Cálculo de la dosis: las diluciones se prepararon a razón de 1 mL/100 g de peso y estuvo en dependencia de la cantidad de extracto que se deseaba suministrar.

Estas investigaciones se realizaron de acuerdo con las normas éticas para el uso de animales en la experimentación, establecida en la Declaración de las XVIII y XLI Asamblea Médica de Helsinki y Hong Kong, respectivamente. Se tuvieron en cuenta las estrategias estatales vigentes en la República de Cuba según las Buenas Prácticas de Laboratorio para los estudios preclínicos y aquellas medidas que garantizaran el bienestar animal, siguiendo el código de trabajo de los lineamientos de Bioética y aplicando la teoría de las 3 R en el trabajo con animales de laboratorio.

En cuanto al análisis estadístico para la determinación de las diferencias entre los grupos tratados y controles se utilizó un análisis de varianza (ANOVA) y la prueba t de Student para conocer entre cuáles de los grupos había diferencia significativa.

RESULTADOS

Los primeros estudios realizados fueron encaminados a evaluar la posible acción anti-edemagénica del extracto C. sinensis en etanol 70 %, con diferentes dosis de flavonoides expresado como hesperidina. En la tabla 1 se observó que de las 4 dosis utilizadas, solo existió diferencia significativa (p< 0,05) en cuanto a la reducción del edema con la dosis de 74,9 mg de hesperidina/kg de peso. Sin embargo, esta dosis tuvo acción letal para 100 % de los animales controles, por lo que en lo adelante se trabajaron con los extractos previamente sometidos a un proceso de eliminación del etanol, con el objetivo de facilitar la evaluación de una dosis superior de los principios activos presentes en los extractos, sin interferencia de las acciones del etanol.

En la tabla 2 se observó que a partir de los extractos obtenidos sin etanol 70 %, se apreció en las 3 dosis diferencias estadísticamente significativas (p< 0,001), al comparar cada una de las dosis con el control.

El análisis de varianza entre las 3 dosis no arrojó diferencias significativas para p< 0,005, lo que demuestra la similitud entre las dosis en relación con la disminución del edema, la dosis de 50 mg de hesperidina/kg de peso fue la mínima efectiva para lograr la acción farmacológica deseada.

En la tabla 3 se aprecia que el análisis de varianza no mostró diferencias estadísticamente significativas entre las 3 dosis estudiadas y resultaron similares los valores obtenidos, por lo cual sugiere que en la dosis de 50 mg/kg de peso existe una relación dosis efecto. La prueba t de Student evidenció diferencias estadísticamente significativas entre los resultados obtenidos de cada dosis con respecto al control.

En la tabla 4 se señalan los 4 tiempos de tratamiento en relación con las distintas dosis aplicadas. El análisis de varianza arrojó una diferencia significativa (p< 0,005). El tiempo óptimo para obtener una respuesta deseada fue de 7 d.

DISCUSIÓN

Los cítricos desempeñan un papel destacado por constituir una fuente natural de metabolitos secundarios como son los aceites esenciales, flavonoides y las cumarinas.⁹

Los flavonoides son de gran interés por parte de la comunidad científica, porque se les atribuyen propiedades antiinflamatorias, limitan la acción de los radicales libres, y son protectores de los vasos sanguíneos, además de presentar otras funciones.¹⁰

Uno de los flavonoides que se encuentra en los extractos Citrus sinensis L. y Citrus. aurantium L., es la hesperidina, la cual reduce la permeabilidad capilar en modelos experimentales; los resultados del presente estudio coinciden con lo planteado por Mesa sobre la acción antiedemagénica de la hesperidina.³

Se investigó el extracto C. aurantium con el objetivo de compararlo con el C. sinensis y tener información acerca de su posible acción antiedemagénica. Se seleccionaron las mismas dosis 50, 100 y 200 mg/kg de peso. Se observaron diferencias significativas en relación con el control, no existieron diferencias entre las dosis utilizadas. No se ha reportado en la literatura consultada estudios de este extracto con el objetivo de medir acción antiedemagénica.

En todos los extractos estudiados se reflejó que a los 7 d es que se obtiene la acción antiedemagénica. Se obtuvieron resultados novedosos que demuestran la presencia de la acción antiedemagénica en los extractos de plantas cítricas estudiadas, no reportados en la literatura.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Allegra C. The Cof CEAP suggeted definintion and refinements.An international Union of Phebology Conference Experts. J Vasc Surg. 2003;37:129-31.

2. Podnos Y. Chronic venous. Med J. 2002;4(1):12.

3. Quiñones M. Tratamiento ambulatorio de las úlceras flebostática. Rev Cubana Angiol. 2002;3(1):16-20.

4. García M, Armenteros D, Mahía M, Díaz A, Fernández J. Plantas Cítricas en el Tratamiento de Enfermedades Vasculares. Rev Cubana Angiol. 2002;3(2):39-46

5. Del Río JA. Citrus: a source of flavonoids of pharmaceutical interest. Food Chemistry. 2004;4:457-61.

6. Kawaii S, Tomono Y, Katase E, Ogawa K, Masamichi Ykoizumi M. Quantitative study of flavonoids of Citrus plants. J Agric Food Chem. 2000;48:65-71.

7. Porres J. Interacción entre fármacos y Plantas medicinales. An Sist Sanit Navar. 2006;29(2):233-52.

8. Sánchez A. Plantas Medicinales. Rev Cubana Farm. 2000;34(1)34-43.

9. Lee CH, Jeong TS, Choi YE, Hyun BX, Oh GT. Antiatherogenic effect of citrus flavonoids naringin and naringenin associated with hepatic ACAT and AORTIC VCAM-1 and MCP-1 in high-cholesterol fed rabbits. Biochem Biophys Res Commum. 2001;284:681-8.

10. Emim JA, Oliveira AB, Lapa AJ. Pharmacological evaluation of the antiinflammatory activity of a citrus bioflavonoid in rats and mice. J Pharm Pharmacol. 1994;46:118-22.

Recibido: 8 de agosto de 2008.
Aprobado: 14 de octubre de 2008.

M. C. María Antonia Alfonso Valiente. Departamento Cirugía Experimental. Instituto Nacional de Angiología. La Habana, Cuba. Correo electrónico: [e-mail]