CIENCIA ANIMAL

Actividad de la enzima lipasa pancreática en pollos de ceba que consumen harina del fruto de Roystonea regia en la ración. Nota técnica

Yesenia Vives^{2  *} 

Madeleidy Martínez-Pérez² 

Maryen Alberto² 

Yasmila Hernández² 

²Instituto de Ciencia Animal, Apartado Postal 24, San José de las Lajas, Mayabeque, Cuba

Resumen

Se utilizaron 40 pollos de ceba machos para determinar la actividad de la enzima lipasa pancreática de pollos de ceba que consumen harina del fruto de Roystonea regia (harina de palmiche) en la ración. Se aplicó un diseño completamente aleatorizado con cuatro tratamientos, que consistieron en la sustitución de 0, 5, 10 y 15 % por harina de palmiche. A los 42 d, se sacrificaron para obtener los páncreas y se determinó la actividad enzimática de la lipasa pancreática. Se observó efecto de la dieta en este indicador, que fue mayor en los pollos que consumieron harina de palmiche, en comparación con la dieta control (1983 vs 2500, 2566, y 3283 mL de NaOH/min/mg de proteína, respectivamente) (P<0.05). Se concluye que la inclusión de harina de frutos de palmiche en dietas para pollos de ceba aumenta la actividad de la enzima lipasa pancreática para digerir los lípidos en el tracto gastrointestinal.

Palabras clave: actividad enzimática; lípidos; aves; harina de palmiche

La búsqueda de alimentos alternativos mediante materias primas no convencionales, que permitan en gran medida sustituir las importaciones, reducir la competitividad con la alimentación humana y preservar el medio ambiente, ha sido uno de los objetivos trazados en Cuba desde hace más de tres décadas. La palma real, Roystonea regia (Kunth) O.F. Cook, es la planta de la familia Arecaceae más abundante en Cuba. Por sus propiedades, tiene múltiples usos: ornamentales, industriales, medicinales y nutricionales. Es además, proveedora de distintos productos de trascendencia económica, entre los que se encuentra el palmiche.

La composición química de este fruto hace que se considere una buena fuente de energía, debido a su alto contenido de lípidos y, en menor medida, a su elevado contenido de fibra (^{Oliva et al. 2018}). Predominan en su aceite los ácidos oleico, láurico, palmítico y linoleico, que contienen 8 y 18 átomos de carbono, responsables principales de su condición de fuente energética. El palmiche es uno de los principales alimentos energéticos alternativos que están disponibles en Cuba, donde es de popularidad como fuente no convencional de alimentación para el ganado porcino (^{Ly et al. 2017}), pero sin resultados concretos en las aves.

Como fuente alta en lípidos, para ser digerida en el tracto gastrointestinal de las aves, el palmiche necesita de enzimas lipolíticas. Entre ellas, la lipasa pancreática es una de las más estudiadas. Esta enzima se puede utilizar como marcador de la digestión de esta fracción. Por ello, el objetivo de este estudio fue determinar la actividad enzimática de la lipasa pancreática en pollos de ceba que consumen harina de frutos de Roystonea regia en la ración.

Se utilizaron 40 pollos de ceba machos, de ocho días de edad (HE21), alojados en jaulas metálicas. Los animales se sometieron a las dietas experimentales, desde los 8 d hasta los 42. Estas se formularon según los requerimientos establecidos por la ^{NRC (1994)} para esta categoría de aves. El control consistió en una dieta convencional soya-maíz. En los otros tres tratamientos se incluyó 5, 10 y 15 % de harina de palmiche, de manera que se mantuvieron las dietas isoproteicas e isoenergéticas para los períodos de inicio, crecimiento y acabado. Durante todo el tiempo de experimentación, los pollos tuvieron libre acceso al agua y al alimento.

El palmiche, in natura, se obtuvo de la provincia Mayabeque. El proceso de secado consistió en desprender las semillas de palmiche de forma manual, y luego se expusieron al sol extendidas en un plato de secado, durante cinco días consecutivos.

El material seco se almacenó en sacos, bajo techo, en naves con adecuada ventilación y bajo nivel de humedad. Cada cinco días se molió con el resto de los componentes de la dieta de granos y cereales en la proporción correspondiente, con el propósito de alargar la vida útil de la harina de palmiche que se enrancia con rapidez, y disminuye su calidad biológica y palatabilidad (^{Oliva et al. 2018}).

A los 42 d del experimento, se pesaron y sacrificaron diez pollos por tratamiento, según el método de desangrado de la vena yugular. Para ello se siguieron los procedimientos tradicionales (aturdimiento, desangrado y eviscerado), exactamente dos horas y treinta minutos después de que los animales hubiesen ingerido alimento, con el propósito de tomar las muestras del páncreas y obtener el homogenado pancreático. Inmediatamente, a cada pollo se le extrajo el páncreas, y se sumergió en 4 mL/g de solución salina fisiológica, entre 0 y 4 ºC, para su traslado al laboratorio. Los órganos de tres animales se homogeneizaron manualmente. Se centrifugaron a 5000 r.p.m. durante 10 min a 4 ºC en una centrifuga refrigerada marca Thermoscientific IEC CL31R. Se descartó el pellet y se almacenó el sobrenadante en pequeñas alícuotas a -80 °C.

La concentración de proteínas se determinó mediante el método de ^{Bradford (1976)} en un espectrofotómetro UV-vis Rigol, serie Ultra-3400. El cálculo de las concentraciones se realizó mediante la interpolación de los valores de absorbancia de las muestras en la curva estándar de seroalbumina bovina (BSA) (0.01-5 mg/mL). Esta se estandarizó para todos los homogenados en estudio a 3 mg/mL, para lo que se realizaron las diluciones correspondientes en cada caso. Todos los análisis se realizaron por triplicado.

Para lograr la máxima fiabilidad en la determinación de la actividad enzimática, se trabajó en el rango lineal propuesto para la enzima, para lo que se utilizó un tiempo de incubación de cinco minutos (^{León et al. 2014}). La actividad de la lipasa se determinó mediante el método propuesto por ^{Tietz y Fiereck (1966)}. Se determinó el volumen necesario de NaOH (50 mM) para neutralizar los ácidos grasos liberados, luego de la degradación enzimática. El sistema se mantuvo en agitación moderada a 37 °C y se emplearon 3 mL de aceite de oliva como sustrato. La actividad de la enzima se expresó como mL de NaOH/min/mg de proteína.

Para el análisis estadístico de los resultados, se utilizó un diseño completamente aleatorizado, con cuatro tratamientos y tres repeticiones (tres páncreas cada uno). Las diferencias entre las medias se determinaron según ^{Duncan (1955)} en los casos necesarios. El paquete estadístico que se utilizó fue Infostat (^{Di Rienzo et al. 2012}).

Se observó efecto significativo de la inclusión de la harina de palmiche en la dieta, específicamente en la actividad de la enzima lipasa pancreática en pollos de ceba (figura 1). El tratamiento con la inclusión de 15 % de harina de palmiche aumentó la actividad de la enzima de forma significativa con respecto al resto de los tratamientos. Los tratamientos con 5 y 10 % no difirieron entre sí. El control fue el tratamiento que mostró la menor actividad (P<0.05). Este comportamiento probablemente esté asociado con el contenido de grasa en la dieta, pues se conoce que el tipo, origen y nivel de grasa en la dieta son factores importantes que afectan la secreción de enzimas lipolíticas por el páncreas (^{Barberá 2016}).

Figure 1 Enzymatic activity of pancreatic lipase in broilers consuming different levels of royal palm nut meal  

Según ^{Gonçalves et al. (2010)}, factores nutricionales como los metabolitos secundarios, también pueden modificar la actividad de la lipasa pancreática. Estos autores plantearon que la ausencia de flavonoides poliméricos de alto peso molecular, a los que se les ha atribuido la acción de inhibir la actividad de la lipasa pancreática, al ejercer una interacción específica con la enzima, suelen estar presentes en frutos de colores intensos como la uva. Aunque el fruto del palmiche presenta coloración pardo negruzca, en el tamizaje fitoquímico cualitativo realizado a la harina de este fruto, se descartó la presencia de metabolitos secundarios (^{Ly et al. 2017}), lo que explicaría el resultado que se obtuvo.

^{Barberá (2016)} demostró que los cambios en la composición de la dieta, que involucren diferentes fuentes de lípidos y ácidos grasos, pueden provocar modificaciones en la actividad de la enzima lipasa. Si bien es importante considerar que las secreciones pancreáticas responden a un estímulo alimentario, la actividad de estas enzimas, una vez que ingresan a la mucosa intestinal, también se puede afectar en pollos de engorde (^{León et al. 2014}), como se observó en el presente estudio.

El incremento de la actividad de la lipasa pancreática pudiera aumentar la digestión de los lípidos, lo que puede ser beneficioso para el animal, ya que se conoce que estas biomoléculas desempeñan diversas funciones biológicas importantes en el organismo. Entre ellas se puede referir que constituyen componentes estructurales de las membranas, así como formas de transporte y almacenamiento del combustible catabólico. Se desempeñan además, como cubierta protectora sobre la superficie celular, lo que se relaciona con el reconocimiento célula-célula, la especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos. Poseen también una intensa actividad biológica, ya que se encuentran entre ellas algunas vitaminas (A, B, D, E y K) y hormonas.

Se concluye que la inclusión de harina de frutos de palmiche en dietas para pollos de ceba aumenta la actividad de la enzima lipasa pancreática, la cual hace posible que se digieran los lípidos en el tracto gastrointestinal.

References

Barberá, A. 2016. Influencia de la matriz y tipo de grasa en la digestibilidad de lípidos y proteínas de algunos productos de la pesca. PhD Thesis. Escola Tècnica Superior d’Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural, Universitat Politècnica de València, València, España. p. 42

Bradford, M.M. 1976. “A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding”. Analytical Biochemistry, 72(1-2): 248-254, ISSN: 0003-2697, DOI: 10.1016/0003- 2697(76)90527-3

Di Rienzo, J.A., Casanoves, F., Balzarini, M.G., González, L., Tablada, M. & Robledo, C.W. 2012. InfoStat. version 2012,[Windows], Universidad Nacional de Córdoba, Argentina: Grupo InfoStat. Available: http://www.infostat.com.ar

Duncan, D.B. 1955. “Multiple Range and Multiple F Tests”. Biometrics, 11(1): 1-42, ISSN: 0006341X, DOI: 10.2307/3001478

Goncalves, R., Mateus, N. & De Freitas, V. 2010. “Study of the interaction of pancreatic lipase with procyanidins by optical and enzymatic methods”. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58(22): 11901-11906, ISSN: 0021- 8561, DOI: 10.1021/jf103026x

León, M. V, Colina, J.J., Rico, D., Araque, H., Rossini, M., Castañeda, M.V & de Arvelo, E.E.R. 2014. “Actividad de las enzimas tripsina y lipasa pancreáticas en cerdos alimentados con harina de pijiguao (Bactris gasipaes HBK) y lisina sintética”. Revista de la Facultad de Ciencias Veterinarias, UCV, 55(1): 11-17, ISSN: 0258-6576

Ly, J., Ayala, L. & Delgado, E.J. 2017. “Valor nutritivo de palmiches en cerdos y factores que lo afectan”. Livestock Research for Rural Development, 29(4), Available: https://www.lrrd.cipav.org.co/lrrd29/4/ly29064.html

N.R.C. (National Research Council). 1994. Nutrient requirements of poultry. 9th Revised Ed. Ed. National Academies Press, Washington D.C., USA. p. 176, ISBN: 0309048923

Oliva, D., Martínez, M., Jiménez, L. & Ly, J. 2018. “Performance traits of growing pigs fed on diets of royal palm nut meal”. Cuban Journal of Agricultural Science, 52(2): 1-8, ISSN: 2079-3480.

Tietz, N.W. & Fiereck, E.A. 1966. “A specific method for serum lipase determination”. Clinica Chimica Acta, 13(3): 352-358, ISSN: 0009-8981, DOI: 10.1016/0009-8981(66)90215-4.

Recibido: 29 de Julio de 2019; Aprobado: 08 de Enero de 2020

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