RESPONSE OF DIFFERENT GENOTYPES OF SOLANACEAE TO Meloidogyne incognita (KOFOID AND WHITE) CHITWOOD RACE 2 AND M. arenaria (NEAL) CHITWOOD
Farah María González*, Lucila Gómez**, Mayra G. Rodríguez**, Maité Piñón*, A. Casanova*, Olimpia Gómez*, Yaritza Rodríguez*
*Instituto de Investigaciones Hortícolas Liliana Dimitrova (IIHLD), Carretera Bejucal _ Quivicán, km 33½, Quivicán, La Habana, Cuba. Correo electrónico: farah@liliana.co.cu; **Grupo Plagas Agrícolas, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA), Apartado 10, San José de las Lajas, La Habana, Cuba
RESUMEN
Con el objetivo de conocer el grado de resistencia/susceptibilidad de seis genotipos de solanáceas, frente a Meloidogyne incognita raza 2 y de M. arenara, en macetas, se inocularon las plantas con tres niveles de nematodo (0,5, 1,5 y 2,5 huevos - J2.g de suelo-1). Se utilizó como control susceptible la variedad de tomate Campbell-28. Para la categorización de los genotipos se determinó el Índice de Agallamiento (IA), el Factor de Reproducción (FR) y el Índice de Reproducción (IR) de los nematodos, siguiendo la metodología establecida. Los genotipos S. torvum y S. erianthum tuvieron un comportamiento inmune frente M. incognita y altamente resistentes a M. arenaria. S. mammosum fue altamente resistente a ambas especies pero su eficiencia disminuyó cuando se enfrentó al nivel más alto de M. incognita. Los cultivares de tomate Motelle y Rossol fueron altamente resistentes a M. incognita. D. stramoniun no mostró síntomas de agallamiento ni grado de reproducción de los nematodos por lo que se clasificó como inmune para ambas especies. La población de M. arenaria se mostró más virulenta que la de M. incognita raza 2. Se discute la respuesta mostrada por los genotipos y las poblaciones de Meloidogyne, así como los posibles usos de los genotipos como patrones porta injertos.
Palabras clave: Meloidogyne incognita; Meloidogyne arenaria; resistencia; susceptibilidad; Solanáceas; portainjertos
The resistance/susceptibility of six solanaceous genotypes to Meloidogyne incognita race 2 and M. arenaria were assessed, under a range of population densities (0,5, 1,5 and 2,5 eggs - J2.g of soil-1) of both nematodes. The plants were grown in pots in a greenhouse. The tomato variety Campbell-28 was used as a susceptible control. The gall index, reproductive index and reproductive factor were the parameter evaluated to assign a resistance/susceptible category of the genotypes according to the established methodology. S. torvum and S. erianthum were immune to M. incognita whereas they were highly resistant to M. arenaria with no significant differences at any inoculum level. S. mammosum responded as highly resistant to both populations but the efficiency was negatively affected by the highest level of M. incognita. The tomato cultivars Motelle and Rossol were also highly resistant to M. incognita. D. stramoniun was classified as immune to both M incognita and M. arenaria populations as no symptoms or reproduction of the nematode were observed on its roots. M. arenaria population appeared to be more virulent than the population of M. incognita race 2. The reaction of the genotypes and nematodes, as well as the possible use of the genotypes as stocks for grafting are discussed.
Key words: Meloidogyne incognita; Meloidogyne arenaria; resistance; susceptibility; Solanaceae; grafting
INTRODUCCIÓN
A nivel mundial, se señalan a los nematodos del género Meloidogyne Göldi como la principal plaga en los vegetales (1). Estos poseen importancia económica potencial en los sistemas de producción de hortalizas tanto en condiciones protegidas como de campo abierto (2). Se ha estimado que por su causa, las pérdidas provocadas en estos cultivos oscilan entre el 24 y el 33% a nivel mundial (3). Las especies más comunes en las regiones cálidas son Meloidogyne incognita (Kofoid y White) Chitwood, M. arenaria (Neal) Chitwood y M. javanica (Treub) Chitwood (4).
En Cuba estos nematodos constituyen uno de los principales factores limitantes de los rendimientos en la producción protegida de hortalizas (5), siendo M. incognita y M. arenaria las de mayor frecuencia y distribución, cohabitando a menudo con especies importantes como M. mayaguensis Rammah y otras de difícil identificación (6, 7).
Para el control de esta plaga se empleaba regularmente la fumigación de suelos con productos químicos sintéticos de amplio espectro de acción. Sin embargo, dado el peligro evidente que representan los mismos para la salud ambiental y humana, su uso ha sido restringido y en muchos casos prohibidos (ej, Bromuro de metilo). Bajo estas circunstancias la búsqueda de alternativas ambientalmente seguras y económicamente factibles para el manejo de las poblaciones de nematodos se ha convertido en uno de los objetivos de primer orden en la comunidad científica internacional y para los productores.
Entre los diferentes métodos o prácticas alternativas para el manejo de los nematodos, el uso de cultivares resistentes tiene una importancia trascendental. Sin embargo, a menudo es poco frecuente encontrar cultivares que no sean afectados por algunas de las especies del género, debido fundamentalmente por la alta variabilidad inter e intra especifica de las poblaciones, que favorece su adaptabilidad y mejores ventajas selectivas sobre sus hospedantes (8). ]]>
En este sentido el injerto sobre patrones silvestres resistentes ha cobrado auge en la actualidad, sobre todo en los países desarrollados donde el 25% de los suelos destinados a la producción protegida de tomate es cultivado en injertos sobre patrones resistentes (9). Las mejores fuentes de resistencia a estos nematodos se han encontrado en variedades silvestres que no tienen valor para la comercialización; sin embargo, de este modo, se logra el desarrollo de cultivares susceptibles de interés económico al evitar el contacto de la planta sensible con el suelo infestado.En el Manual para la Producción Protegida de Hortalizas en Cuba (10), se establece un conjunto de medidas integrales para el manejo de plagas en estos cultivos donde se contempla el empleo del injerto sobre patrones resistentes a nematodos. A pesar de esto, no siempre se conoce el comportamiento de estos materiales frente a las diferentes especies y poblaciones de Meloidogyne presentes en el país.
Por esta razón el objetivo de este trabajo es evaluar la respuesta de diferentes genotipos de Solanaceae frente a las especies M. incognita y M. arenaria, con vistas a su posible utilización como patrones porta-injertos en la producción protegida de hortalizas en Cuba.
MATERIALES Y MÉTODOS
Las dos poblaciones de nematodos formadores de agallas utilizadas para el estudio fueron M. incognita raza 2 y M. arenaria. Ambas, provenientes de una casa de cultivo enclavada en el municipio de San José de las Lajas, provincia La Habana y mantenidas sobre tomate var. Campbell-28, en el banco de poblaciones puras del CENSA.
Los cultivares evaluados frente a ambas especies fueron Solanum torvum Sw., Solanum mammosum L., Solanum erianthum D. Don, Datura stramonium L. Las variedades comerciales de tomate (Solanum lycopersicum L.). Motelle y Rossol se evaluaron solamente con la especie M. incognita.
Las semillas de cada genotipo se colocaron a germinar en bandejas de polietileno con alvéolos (cepellones) contentivas de una mezcla estéril de suelo y materia orgánica (proporción 1:1). A los 21 días de haber germinado, las plántulas se transfirieron a macetas de 1,5L de capacidad, contentivas de una mezcla de suelo y material orgánica (1:1) esterilizada en autoclave a 121°C durante 1 hora.
Se prepararon tres niveles de inóculo para cada especie de nematodo, consistentes en 0,5, 1,5 y 2,5 huevos - J2.g de suelo-1 siguiendo la metodología de Hussey y Barker (11). Cada inóculo se introdujo en el suelo de las macetas una semana después del trasplante, practicando cuatro orificios sobre el sistema radical cercano al tallo de cada planta, por el vertimiento de la suspensión correspondiente.
Los experimentos se realizaron en condiciones semi-controladas, en los aisladores biológicos del CENSA. Las macetas se dispusieron siguiendo un diseño completamente aleatorizado, donde los genotipos inoculados con los diferentes niveles de inóculo de las respectivas especies de nematodos constituyeron los tratamientos. Se establecieron cinco repeticiones de cada uno y se utilizó como control susceptible igual cantidad de plantas de tomate var. Campbell-28. Las plantas se mantuvieron con riego en días alternos y se ejecutaron evaluaciones semanales del estado sanitario de las mismas. ]]>
A los 60 días de la inoculación, se determinó el Índice de Agallamiento (IA) mediante la escala de Hartman y Sasser (12) y se extrajeron de las raíces los huevos y juveniles (J2), a través del método de Hussey y Barker (11), para determinar la población final de nematodos. La cuantificación de la suspensión resultante se efectuó a través del conteo directo de los J2- huevos en un estéreo microscopio Zeiss con 160 aumentos, con lo que determinó el Factor de reproducción (FR) mediante la fórmula: FR = Pf / Pi; donde Pf constituye la población final extraída de las raíces después del experimento y Pi la cantidad de huevos _larvas inoculadas a las plantas.La categorización de los hospedantes se hizo a través de la metodología utilizada por Gómez (7). Para ello se determinó el Índice de Reproducción utilizando la siguiente fórmula: Índice de Reproducción (IR)= (Pvar. X 100)/P testigo; donde, P. var = número de huevos-J2 producido por la variedad vegetal que se evalúa y P testigo: número de huevos-J2 producido por la variedad vegetal que se empleó como testigo susceptible.
Para determinar la influencia de los tratamientos en los parámetros evaluados se aplicó un Análisis de Varianza Simple y la comparación entre las medias se realizó a través de la prueba de rangos múltiples de Duncan en los casos donde existieron diferencias (p<0,05).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Los resultados evidenciaron un comportamiento inmune de S. torvum, D. stramoniun y S. erianthum frente a M. inocgnita, con Índices de agallamiento y reproducción igual a cero en todos los niveles de nematodos ensayados. Sin embargo, en S. mammosum no hubo diferencias significativas entre el nivel más bajo y el intermedio, donde mostro alta resistencia, pero si entre estos y el nivel de inóculo más alto (p<0,05), donde alcanzó la categoría de moderadamente resistente. La respuesta de los cultivares de tomate Motelle y Rossol, se considera altamente resistente, sin diferencias significativas entre los niveles de inóculo (Tabla 1).
Sin embargo, S. torvum, S. erianthum y S. mammosum se comportaron altamente resistentes a M. arenaria, sin mostrar diferencias significativas entre los niveles de nematodos. Por su parte, D. stramoniun mostró una ausencia total de síntomas y ningún grado de reproducción frente a M. arenaria (Tabla 2), al igual que frente a M. incognita raza 2, por lo que se consideró inmune para ambas especies.
La resistencia de solanáceas silvestres a nematodos formadores de agallas ha sido informada por numerosos investigadores (9,13). La misma está basada en la presencia de un gen simple dominante llamado gen Mi, que confiere resistencia a tres de las especies más dañinas M. incognita, M. arenaria y M. javanica (14). La resistencia mediada por el gen Mi activa una respuesta de hipersensibilidad a través de la muerte de la célula momentos después de que los nematodos inician su alimentación en los sitios cercanos al haz vascular (15).
La reacción mostrada por los genotipos empleados en este estudio frente a las dos especies de nematodos evidencia la presencia de genes de resistencia. Por otra parte, también se observó la variabilidad entre las especies del género Meloidogyne. En este particular es importante señalar que la población de M. arenaria resultó ser más virulenta que la de M. incognita, pudiendo desarrollar determinado grado de reproducción sobre genotipos que se mostraron inmunes a M. incognita. Sin embargo, aun así, estos genotipos poseen características de gran valor para ser incorporados como porta injertos en suelos que presenten ambas especies.
Los resultados mostrados por S. torvum, son similares a los obtenidos en investigaciones desarrolladas en el ámbito nacional e internacional. Gómez et al. (16) encontraron un comportamiento inmune de S. torvum frente a una población cubana de M. inocgnita raza 2. Rahman et al. (17), demostraron la resistencia de S. torvum frente a M. incognita cuando se utilizó como patrón porta injerto de variedades susceptibles en condiciones semi-controladas y en campo. Según estos autores, las plantas injertadas mostraron mayores rendimientos que las plantas no injertadas. Por su parte, Daunay y Dalmasso (18) informaron que este genotipo se comportó como resistente a poblaciones de M. incognita y de M. arenaria de diferentes áreas geográficas y como pobre hospedante de M. javanica. Específicamente, Luc et al. (19) alcanzaron resultados similares a los de este trabajo destacando el alto nivel de resistencia de S torvum frente a M. arenaria. ]]>
En los resultados antes referidos se manifiestan claramente los planteamientos de Dropkin (20), quien informa que los nematodos de una especie en particular son muestras de fenotipos de numerosos genes que poseen múltiples alelos en muchos loci. La frecuencia de un alelo particular fluctúa a través del tiempo y varía desde un área de su distribución geográfica a la siguiente, surgiendo poblaciones con hospedantes distintivos (variación intra-específica). Es de suponer entonces, que la población cubana de M. incognita raza 2, utilizada en este estudio tenga características distintivas que propician un comportamiento diferente al resto de las poblaciones enfrentadas a S. torvum en otras regiones geográficas.En el genotipo S. mammosum, la variabilidad entre las especies de Meloidogyne es más marcada, apreciándose una disminución de la resistencia cuando se enfrentó a un nivel poblacional de M. incognita más alto. En este caso, se observó una menor eficiencia frente a este nematodo. En este sentido, Cook y Starr (8) plantean, que la eficiencia de los hospedantes se afecta por la densidad poblacional de los nematodos. Adicionalmente, en términos del cultivo, es importante que en trabajos posteriores se realicen evaluaciones para determinar en qué medida estos genotipos son afectados por los nematodos (tolerancia-intolerancia) ya que en la práctica la sensibilidad no solo depende de su composición genética sino también de cuantos nematodos los atacan.
Por su parte, los cultivares de tomate Motelle y Rossol, mostraron un comportamiento similar a los informados por otros autores (21, 22) Estos cultivares poseen gen Mi-1 que es homólogo del gen Mi que proporciona una alta resistencia a las especies evaluadas en este trabajo (23). Resultados similares fueron obtenidos por Cuadra et al. (24) quienes informaron que el cultivar de tomate Rossol presentó bajos niveles de susceptibilidad a M. inocgnita raza 2.
No obstante, a pesar de lo planteado anteriormente, en los genotipos donde se evidenció la presencia de agallas, no se observó ningún grado de deterioro en las raíces (datos no mostrados), como se presenta en los cultivares o genotipos de tomate susceptibles como Cambell-28 (7), utilizado como control susceptible en este estudio.
La presencia de agallas en las raíces es el síntoma que caracteriza a los cultivos afectados por nematodos del género Meloidogyne. Su tamaño y forma están relacionados con el cultivo hospedante, el número de nematodos que penetre la raíz y la especie en particular (4).
Es importante tener en cuenta la reacción de S. mammosum frente a M. arenaria, pues desde el punto de vista práctico, pudiera ser empleado como patrón porta injerto en suelos donde esté presente esta especie, integrándolo adecuadamente con otras medidas de manejo de nematodos.
El comportamiento de D. stramoniun frente a ambas especies es de particular trascendencia para nuestro trabajo, pues resultar inmune a dos de las especies de mayor importancia en los sistemas hortícolas lo convierte en un candidato potencial para ser utilizado como porta injerto en nuestras condiciones, sobre todo en suelos donde estas dos especies estén presentes simultáneamente. Por otra parte, representa una fuente de genes de resistencia a ser estudiada por los fitomejoradores.
D. stramoniun no había sido evaluado en Cuba en cuanto a su resistencia a nematodos del género Meloidogyne, pero si había sido empleado como enmienda orgánica al suelo para la disminución de poblaciones de nematodos fitoparásitos en otros países (25). Esta información adiciona a D. stramoniun otros posibles usos como biofumigantes del suelo a ser evaluados para el manejo de nematodos formadores de agallas.
El injerto en hortalizas, se ha utilizado ampliamente en la producción protegida, demostrando que existen posibilidades de emplearlo sobre patrones silvestres resistentes, sin usar desinfectantes de suelo (9, 26), por lo que los resultados obtenidos en este trabajo son de gran valor para ser utilizados en los programas de manejo de nematodos del género Meloidogyne en los sistemas de producción protegida de hortalizas.
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REFERENCIAS1. Sikora RA, Fernández E. Nematode of vegetable. En: Luc M, Sikora RA, Bridge J, editors. Plant parasitic nematodes in Subtropical and tropical agriculture. 2da Edición. CABI, UK; 2006. p. 319-392.
2. Langlais C, Ryckewaert P. Guía de los cultivos protegidos de hortalizas en la zona tropical húmeda. CIRAD. Guadaloupe; 2002. p. 90.
3. Netscher C, Sikora RA. Nematodes parasites of vegetables. En: Luc M, Sikora RA, Bridge J, editors. Plant Parasitic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture. CAB International. Institute of Parasitology. UK; 1990. p. 237-283.
4. Karssen G, Moens M. Root-knot nematodes. En: Perry R, Moens M, editors. Plant nematology. CABI, UK; 2006. p. 59-90.
5. Gómez Lucila, Rodríguez Mayra G, Enrique R, Miranda Ileana, González E. Factores limitantes de los rendimientos y calidad de las cosechas en la producción protegida de hortalizas en Cuba. Rev Protección Veg. 2009; 24(2):117-122.
6. Rodríguez Mayra G, Gómez Lucila, Cuadra R, Díaz-Viruliche Luisa, Fernández E, Casanova A, et al. Nematodos formadores de agallas en Sistemas de Cultivos Protegidos: Diagnóstico y Manejo. Informe Final de Proyecto. Programa Ramal de Hortalizas - MINAG. Lab. Nematología. CENSA; 2006. p. 171.
7. Gómez L. Diagnóstico de nematodos agalleros y prácticas agronómicas para el manejo de Meloidogyne incognita en la producción protegida de hortalizas. Tesis para optar por el Grado Científico de Doctor en Ciencias Agrícolas. UNAH- CENSA; 2007.
8. Cook R, Starr JL. Resistant Cultivars. En: Perry RN, M. Moens, editors. Plant Nematology. CABI. UK; 2006. p. 370-391.
9. Miguel A, Torre AM, Baixauli F, Maroto C, Jordá J. El injerto herbáceo. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Madrid; 2007. p. 168.
10.Casanova AS, Gomez Olimpia, Pupo RF, Hernandez M, Chailloux Marisa, Depestre T, et al. Manual para la producción protegida de hortalizas. MINAGRI-VCV-IIHLD, La Habana. Cuba; 2007. p. 138.
11.Hussey RS, Barker KB. A comparison of methods of colleting inoculate of Meloidogyne spp. including a new technique. Plant Dis. Reptr. 1973; 57: 1025-1028.
12.Hartman KM, Sasser JN. Identification of Meloidogyne species on the basis of differential host test and perineal pattern morphology. En: Barker KR, Carter CC, Sasser JN, editors. An advanced treatise on Meloidogyne. Vol. II: Methodology. Dept. Plant Pathology and Unite Agency for International Development. North Caroline State University Graphics; 1985. p. 69-78.
13.Morra L, Troisi A, Bilotto M, D'Amore R. Grafted aubergines, agronomic effects and crop protection. Colture Protette. 2000; 29(1):33-38.
14.Medina-Filho HP, Stevens MA. Tomato breeding for nematode resistance: survey of resistant varieties for horticultural characteristics and genotype of acid phosphates. Acta Horticult. 1980; 100:383-391.
15.Dropkin VH. Cellular responses of plants to nematode infections. Ann. Rev. Phytopath. 1969; 7:101-122.
16.Gómez Lucila, Rodríguez Mayra G, Sánchez Lourdes, González Farah M y Casanova A. Potentialities of Solanum torvum as a resistant plant to Meloidogyne incognita for vegetable grafting. Rev Protección Veg. 2005;20(2):139.
17.Rahman MA, Rashid MA, Salam MA, Masud MAT, Masum ASMH, Hossain MM. Performance of some grafted eggplant genotypes on wild Solanum root stocks against root-knot nematode. J Biol Sci. 2002; 2(7):446-448.
18.Daunay Marie-Christine, Dalmasso A. Multiplication de Meloidogyne javanica, M. incognita et M. arenaria sur divers Solanum. Revue Nematol. 1985;8(1):31-34.
19.Luc M, Sikora RS, Brige J. Plant parasitic Nematodes in Sub-tropical and Tropical Agriculture. CAB International UK; 1990. 629 p.
20.Dropkin VH. The concept of race in Phytonematology. Ann Rev Phytopathol. 1988;26:145-161.
21.Jacquet M, Bongiovanni M, Martinez M, Verschave P, Wajnberg E, Castagnone-Sereno P. Variation in resistance to the root-knot nematode Meloidogyne incognita in tomato genotypes bearing the Mi gene. Plant Pathol. 2005; 54:93-99.
22.Goggin, Fiona. Activadores de las plantas y resistencia genética para el control integrado de nematodos y áfidos o pulgones en los tomates. (Consultada: 1 Nov 2007). Disponible en: http://www.ccma.csic.es/dpts/prot/mmuniz.htm.
23.Fuller Victoria, Lilley C, Urwin P. Nematode resistance. (Consultada: 1 dic. 2008). Disponible en: http://www.new.phytologist.journal.compilation
24.Cuadra R, Cruz X, Ortega J, Shagarodsky T, González M. Respuesta de Lycopersicum spp. frente al ataque del nematodo de las agallas (Meloidogyne incognita). Rev Protección Veg. 2005;20(2):114-121.
25.Insunza V. Propiedades nematicidas de plantas chilenas: II. Evaluación de invernadero de 19 especies de plantas usadas como enmiendas en suelos. Fitopatología. 1994;29(1):45-48.
26.López-Pérez JA, Le Strange M, Kaloshian I, Ploeg AT. Differential response of Mi gene-resistant tomato rootstocks to root-knot nematodes (Meloidogyne incognita). Crop Protection. 2006; 25:382-388.
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(Recibido 4-8-2009; Aceptado 7-10-2009)
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