Validación de un ELISA para la cuantificación de IgG antipolisacárido capsular de Neisseria meningitidis serogrupo C en sueros de ratones.
Validation of the ELISA for quantifying capsular anti-polysaccharide IgG of Neisseria meningitidis of the serogroup C in mice sera.
Maribel Cuello, Yanely Acosta , Juan C. Martínez, Osmir Cabrera, Rolando Ochoa, Julio A Balboa, Carmen R. Soto, Miguel E. Martínez, y Gustavo Sierra.
Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba. ]]> E-mail:mcuello@finlay.edu.cu
RESUMEN
Se desarrolló un ensayo inmunoenzimático de fase sólida (ELISA) indirecto para cuantificar anticuerpos IgG
específicos antipolisacárido C en ratón, utilizando un prerrecubrimiento con Poli-L-lisina y luego el polisacárido
capsular de Neisseria meningitidis serogrupo C (Instituto Finlay, La Habana, Cuba), para evaluar la respuesta
inmune contra este componente en candidatos vacunales en estudios preclínicos. Como conjugado se utilizó
anti-IgG ratón conjugado a fosfatasa alcalina, el cual se une a los anticuerpos antipolisacárido C producidos en
ratones. La reacción es evidenciada por la degradación del sustrato p-nitrofenilfosfato. La detectibilidad del
ensayo fue de 123,74 U/mL y la especificidad fue alta. La precisión interensayo, intraensayo y total, así como las desviaciones de la recuperación, linealidad y paralelismo no sobrepasaron el 10%. El ELISA permitió cuantificar los anticuerpos antipolisacárido C inducidos en ratones tanto por candidatos vacunales conjugados, como por la vacuna VA-MENGOC-BC y el polisacárido C sin conjugar. ]]>
Palabras claves: ELISA, antipolisacárido C, Neisseria meningitidis serogrupo C, validación.
ABSTRACT
An indirect enzyme-linked immunoabsorbent assay (ELISA) was developed to determine antibody anti-polysaccharide C mouse IgG. Polystyrene plates precoating with poly-L-lysine, then Neisseria meningitidis group C polysaccharide (Finlay Institute, Havana, Cuba) was used to evaluated the immune response against this component in a candidate vaccine in pre-clinical studies. Alkaline phosphatase conjugate was used for recognizing mouse antibodies against polysaccharide C. The enzymatic reaction is evidenced by using the specific substrate p-nitrophenylphosphate. The detection limit of the assay was 123,74 U/mL, the specificity of assay was high. Intra-and interassay lack of precision, parallelism, linearity, and recovery were ± 10% of the expected values.
Keywords: Antipolysaccharide C ELISA, Neisseria meningitidis serogroup C, validation.
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