Preparación y caracterización de un Material de Referencia de Trabajo de Acetil Colina para determinar Grupos Oacetilo en polisacáridos vacunales.
Preparation and Characterization of an Acetyl-Choline Working Reference Material for the Determination of O-Acetyl groups in Vaccine Polysaccharides.
Nuris Iglesias1, Ileana Martínez1, Jennifer Abreu1, Esther María Fajardo1, Gustavo de Cárdenas2, Domingo González1
1Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba. Email: niglesias@finlay.edu.cu
2Centro de Inmunoensayo. Ciudad de La Habana, Cuba
RESUMEN
]]> El control de la calidad de los polisacáridos vacunales exige la evaluación del contenido de grupos O-acetilo, que conjuntamente con otros índices, proporciona criterios de la integridad molecular importantes para su inmunogenicidad, como en el caso del polisacárido Vi de Salmonella typhi. El método comúnmente empleado es colorimétrico y requiere de un material de referencia de cloruro de acetil colina para preparar la curva de calibración contra la que se comparan las muestras en estudio. Generalmente, se adquiere el reactivo comercial (sólido) y de éste se prepara la solución de referencia. Esto genera imprecisiones por errores de pesada, características higroscópicas del reactivo, temperatura y tiempo de conservación, entre otras, que influyen en la estimación del contenido de O-acetilo de las muestras. En este trabajo se describe la preparación y caracterización de un Material de Referencia de Trabajo (MRT) de Acetil Colina, liofilizado, para ser empleado en los laboratorios del Instituto Finlay involucrados en el control de la calidad de los polisacáridos purificados de Neisseria meningitidis serogrupo C y Salmonella typhi. Para su caracterización se empleó como referencia el producto de SIGMA. Los parámetros evaluados fueron: linealidad (r2 ≥ 0,99), precisión intermedia (CV=2,63%), reproducibilidad (CV=2,73%), exactitud (recuperación: 96%) y estabilidad (10 meses hasta el momento actual). Los resultados obtenidos en la evaluación de este MRT demostraron que es adecuado para el ensayo. Esto ha sido corroborado durante más de 10 meses de uso en la rutina del laboratorio.Palabras Claves: Acetil colina, O-acetilo, polisacárido, Salmonella typhi, Neisseria meningitidis, material de referencia
ABSTRACT
The quality control of polysaccharides, used as vaccine antigens, requires the quantification of the O-acetyl group content. Together with other parameters, that determination provides criteria about the molecular integrity, which is very important for the immunogenicity, as in the case of Salmonella typhi Vi polysaccharide. The colorimetric method is the one most commonly performed. It requires an acetyl-choline chloride standard, for determining the standard curve used for the evaluation of test samples. The present paper describes the preparation and characterization of a lyophilized Acetyl-Choline Working Reference Standard (WRS), for use at the Finlay Institute laboratories involved in the quality control of purified polysaccharides from serogroup C Neisseria meningitidis and Salmonella typhi. The equivalent product from SIGMA was used as a reference for the characterization. The evaluated parameters were: linearity (r2 ≥ 0.99), in-lab precision (CV = 2.63%), reproducibility (CV = 2.73%), accuracy (96% recovery) and stability (from 10 months to the present). The results obtained during the characterization process of the WRS demonstrated that it is appropriate for use as a standard in the assay. That has been confirmed during more than 10-months use in the routine tests carried out in the laboratory.
Keywords: Acetyl-choline, O-acetyl group, polysaccharide, Salmonella typhi, Neisseria meningitidis, working reference standard.
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REFERENCIAS
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