Estandarización de los métodos electroforéticos en geles de poliacrilamida en el Phast System y cromatográficos para la caracterización de nuevos antígenos vacunales y componentes de medios de cultivo.
Phast System acrylamyde gel electrophoresis and chromatography method standardization for the characterization of new vaccine antigens and culture media components.
Ileana Martínez, María de los Ángeles Padrón, Rubén Cabrera, Michel Acosta, Yadira Pino, Yamisley González, Miguel E. Martínez, Gustavo Bracho, Yisabel Aranguren, Yovania Fernández, José Luis Pérez, Marta González, Sara Catalina Esnard, Bárbara Cedré, Luis García.
Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana. Cuba. E-mail: imartinez@finlay.edu.cu
RESUMEN
En este trabajo se realizó un análisis de diferentes parámetros que caracterizan la estandarización para la determinación del tamaño molecular de nuevos antígenos de interés vacunal, a través de electroforesis en “Phast System” y de distintas matrices cromatográficas. La evaluación electroforética de la linealidad en las curvas de patrones indicó valores de coeficientes de correlación y determinación superiores a 0,98, con una adecuada repetibilidad; no se manifestaron diferencias entre los resultados obtenidos por varios analistas, en días diferentes y el método resultó ser exacto y robusto en las condiciones recomendadas. Se evaluaron los parámetros que caracterizan la eficiencia en el empaquetamiento de cuatro matrices cromatográficas (Superosa 12, Sephacryl S-100, Sepharosa CL- 4B y Sephacryl S-1000). Los resultados obtenidos para ambos sistemas de determinación permitieron la evaluación satisfactoria de muestras de proteínas de membrana externa y lipopolisacárido, procedentes de Vibrio cholerae, Leptospira ssp, Pseudomona aeruginosa y Shigella ssp.
ABSTRACT
We have analyzed different parameters to standardize the molecular weight determination of new vaccine antigens by gel electrophoresis in the Phast System and by a chromatography method. Linearity was obtained by SDS-PAGE using the reference curves with correlation and determination coefficients higher than 0.98. Repeatability was acceptable and there were no differences between the results of several analysts obtained on three different days. This method is exact and robust under the recommended conditions. Column efficiency was evaluated in four chromatographic matrixes (Superosa 12, Sephacryl S-100 y Sepharosa CL- 4B y Sephacryl S-1000). Good results in both systems allowed the evaluation of outer membrane proteins and lipopolysaccharide from Vibrio cholerae, Leptospira ssp., Pseudomona aeruginosa, Shigella ssp.
Keywords:Standardization, gel electrophoresis, chromatography, Vibrio cholerae, Leptospira ssp, Pseudomona aeruginosa, Shigella ssp.
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