Dra. Juana I. Tillán Capó,1 Lic. Annia Benítez López,2 Lic. Ivette Hernández Paderni,3 Téc. Carmen Carrillo4
Allium sativum L. es ampliamente utilizado por la población cubana en la medicina tradicional y natural para aliviar procesos inflamatorios y en especial en la artritis reumatoide; sin embargo, su actividad no ha sido demostrada científicamente como para poder establecer un ensayo clínico para su registro y producción industrial. En el presente trabajo se evaluó la acción de un jarabe de Allium sativum L. sobre la artritis reumatoide experimental, empleando los modelos de edema de la pata y pleuresía en ratas Wistar, basados en la reacción pasiva de Arthus. En los dos modelos, se ensayaron placebo y dosis de 45, 90 y 180 mg/kg de peso corporal, en base a sólidos totales contenido en el jarabe de A. sativum. Como controles positivos se utilizó ibuprofeno y prednisona a las dosis de 200 y 10 mg/kg respectivamente. Tanto los controles positivos, como las dosis de jarabe de Allium sativum L. ensayadas disminuyeron el proceso inflamatorio desencadenado por la reacción antígeno anticuerpo que se logra mediante la reacción pasiva de Arthus, el antisuero de albúmina de huevo y antisuero de albúmina bovina para el edema de la pata y el desarrollo de pleuresía respectivamente.
Palabras clave: Allium sativum L., antiiflamatorio, antiartrítico, Reacción pasiva de Arthus, antisueros, ratas.
La artritis reumatoide es una forma de reumatismo crónico, inflamatorio, donde se involucran mecanismos de autoinmunidad. Comienza en las pequeñas articulaciones de las manos y progresa en forma centrípeta y simétrica por todas las articulaciones del cuerpo. Sus síntomas son: dolor, tumefacción, disminución de la movilidad articular, rigidez matutina y entumecimiento.1
El factor reumatoideo es un anticuerpo policlonal que actúa sobre las inmunoglobulinas, se combina con las IgG y forma un complejo inmunitario, activa el complemento, da como resultado la producción de numerosos fenómenos de la inflamación tales como el incremento de la permeabilidad vascular y la adherencia de los neutrófilos, monocitos y macrófagos, cuyas interacciones tienen como consecuencia la inflamación.2-5
Allium sativum L. contiene ácido amino sulfurado la aliína, alicina ajoenos, fructosanos, peroxidasa, lisosimas, desoxirribonucleasas y fosfomonoesterasa, yodo, sílice, azufre y vitaminas (A, B 1 , B 2 y C). Es ampliamente utilizada por la población como hipotensor (vasodilatador periférico), antiséptico, expectorante, hipoglucemiante antirreumático, antiedematoso, antiagregante plaquetario e hipocolesteromiante.6
Los resultados científicos lo ubican como inhibidor de la síntesis de prostaglandinas, de la agregación plaquetaria, la 5–lipooxígenasa y la ciclooxígenasa, y del aumento de linfocitos T periféricos.7
Debido a la amplia utilización de Allium sativum L. por parte de la población en los procesos inflamatorios crónicos y a la existencia de una formulación en forma de jarabe, nos propusimos evaluar su acción antiartrítica en los modelos de edema de la pata de la rata y exudado de la cavidad pleural de rata (volumen y conteo de células), inducidos por una inyección intradérmica del anticuerpo seguida por una inyección intravenosa del antígeno (reacción pasiva de Arthus ).2
Jarabe de Allium sativum L. elaborado a partir de tintura de ajo al 20 % con 2,9 % de sólidos totales (en base a los sólidos contenidos en la tintura) suministrado por la Empresa Laboratorios Farmacéuticos Saúl Delgado, con Nº de lote 3001, así como el placebo correspondiente a la formulación del jarabe.
]]> Antisuero de albúmina bovina y antisuero de albúmina de huevo, obtenidos en el laboratorio mediante la administración intradérmica a conejos albinos de 2 mL de una emulsión de las respectivas albúminas en cloruro de sodio 0,9 % y adyuvante completo de Freund. Se realizaron 3 administraciones con intervalos de 15 días.Se utilizaron ratas Wistar hembras, con peso corporal de 200 – 250 g, procedentes de la Unidad de Control Biológico del CIDEM. Se mantuvieron en una sala con temperatura controlada de 22 ± 2 ºC y ciclo de luz/oscuridad de 12-12 horas. La alimentación consistió en pienso peletizado CMO 1001®, del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB) y agua a voluntad.
Los tratamientos estuvieron conformados por un grupo control sin administrar, otro con placebo (20 mL/kg), un grupo control positivo administrado con ibuprofeno (200 mg/kg) o prednisona (10 mg/kg) para los ensayos de edema de la pata y exudado pleural respectivamente y 3 grupos tratados con jarabe de Allium sativum L. elaborado a partir de la tintura al 20 %, a las dosis de 45, 90 y 180 mg/kg de peso corporal (expresadas en base al contenido de sólidos presentes en la tintura).
Para la inducción del edema, basado en la reacción pasiva de Arthus, se inyectó en el tren posterior del área plantar de la pata derecha de la rata, 0,1 mL de una solución de antisuero de ovoalbúmina de conejo diluido 1:3 en cloruro de sodio al 0,9 %. La pata contralateral fue inyectada con 0,1 mL de cloruro de sodio 0,9 % utilizada como control e inmediatamente también fue inyectada por vía intravenosa albúmina de huevo, a la dosis de 25 mg/kg de peso corporal.
El volumen de la pata inflamada y control fueron medidas a las 3 horas de la inyección subplantar con un pletismógrafo 7150 (Ugo, Basilea). El edema de la pata fue determinado por la diferencia entre el valor del volumen de la pata tratada y control.
El ensayo de pleuresía basada en la reacción pasiva de Arthus se llevó a cabo mediante la administración a los animales de 2 mL de una solución de antisuero de albúmina bovina de conejo, diluida 1:10 en cloruro de sodio 0,9 % en la cavidad pleural. Pasados 20 minutos se administró por vía intravenosa 25 mg/kg de albúmina bovina. Los animales fueron sacrificados 6 horas después de la inyección intrapleural. El volumen de exudado de la cavidad pleural fue medido en mL y centrifugado durante 5 minutos a 1500 r.p.m. en una centrífuga Heinz Janetzki T23, el sedimento fue fijado sobre una lámina portaobjeto con metanol para su posterior tinción con Giemsa y el conteo diferencial al microscopio de células polimorfonucleares (neutrófilos) y linfocitos.
Los resultados fueron procesados mediante un análisis de varianza de una vía y la prueba de Duncan para las diferencias entre las medias. Para determinar la dosis efectiva media (DE 50 ) del jarabe se empleó el método de los Probits.8
En la Figura 1, se muestra el resultado de las diferentes dosis de jarabe de Allium sativum L. sobre el edema plantar de la rata, donde se puede apreciar la inhibición de la formación del edema dependiente de la dosis de jarabe de Allium sativum L. La DE 50 estimada por el método de Probit9 para la inhibición del edema fue de 143,62 mg/kg.
Fig 1. Efecto del jarabe de Allium sativum L. sobre el edema plantar inducido por la reacción ]]>
de interacción antígeno anticuerpo.En la Figura 2, se pueden apreciar los resultados del jarabe de Allium sativum L., alcanzados sobre el volumen de exudado pleural inducido por la reacción antígeno anticuerpo; así como el conteo diferencial de linfocitos y neutrofilos. En todos los grupos tratados con el jarabe de Allium sativum L. o prednisona se observa una disminución significativa del volumen del exudado pleural con respecto al grupo control negativo que no recibió tratamiento. También se observó una disminución significativa del conteo de neutrófilos y un incremento de los linfocitos (Figuras 3 y 4).
Fig 2. Efecto del Jarabe de Allium sativum L. sobre el volumen de exudado de la cavidad pleural inducido por la reacción de interacción antígeno anticuerpo.
Fig 3. Efecto del Jarabe de Allium sativum L. sobre el contenido de neutrófilos del exudado de la cavidad pleural inducido por la reacción de interacción antígeno anticuerpo.
Fig 4. Efecto del Jarabe de Allium sativum L. sobre el contenido de linfocitos del exudado de la cavidad pleural inducido por la reacción de interacción antígeno anticuerpo.
La reacción de Arthus permite reproducir experimentalmente la patofisiología local de la artritis reumatoidea. La lesión obtenida es caracterizada por edema, eritema y acumulación de polimorfonucleares. Cuando el antígeno es inyectado se forma el complejo con el anticuerpo y se produce la estimulación del complemento; las anafilatoxinas son generadas rápidamente y causan degranulación de los mastocitos. El complejo local intravascular puede causar también agregación plaquetaria y liberación de aminas vasoactivas provocando un aumento del edema, eritema y la formación de factores quimiotácticos que producen la afluencia de los leucocitos polimorfonucleares (PMN).1
La administración del jarabe de Allium sativum L. a las dosis ensayadas, incrementó significativamente ( p < 0,05) el porcentaje de inhibición de la inflamación inducida por la reacción antígeno anticuerpo con respecto al grupo control negativo y al grupo placebo. Con la dosis de 180 mg/kg de jarabe de Allium sativum L. se obtuvo una inhibición del edema de 54,51 %, y al calcular la DE 50 (143,62 mg/kg) por el método de Probit se observó linealidad y una buena relación dosis respuesta.
]]> Estudios realizados en órganos aislados han demostrado que el extracto de Allium sativum L. produce inhibición de la síntesis de prostaglandina de forma dosis dependiente, lo cual pudiera explicar nuestros resultados.9En el modelo de la pleuresía, las dosis de jarabe ensayadas, disminuyeron significativamente el volumen del exudado de la cavidad pleural y el número de neutrófilos presentes en dicha cavidad con respecto al grupo placebo (p < 0,05). Los mejores resultados se lograron con la dosis de 90 mg/kg, aunque no hubo diferencias significativas entre las dosis de jarabe ensayadas. Con el conteo diferencial del exudado de la cavidad pleural se puedo observar un aumento de la proporción de neutrófilos presentes en el grupo placebo el cual se ve disminuido significativamente en los grupos administrados con el jarabe de Allium sativum L.
Investigaciones realizadas por Ramos,9 en la reacción pasiva de Arthus peritoneal, demostraron que los mastocitos juegan un papel importante en la inducción de la inflamación mediada por un complejo inmune. La histamina, leucotrienos y el factor de necrosis tumoral (TNF) liberados de los mastocitos, así como la activación del complemento, son factores necesarios para la iniciación del reclutamiento de neutrófilos.10 En la fase inicial de la reacción de inflamación los macrófagos como células de alarma juegan un papel importante en el reclutamiento de neutrófilos, mediados en parte por la liberación de factores quimiotácticos.
Los resultados obtenidos con los dos modelos empleados en el presente trabajo demuestran que el jarabe de Allium sativum L. inhibe la formación de edema, el volumen del exudado de la cavidad pleural y la cantidad de neutrófilos en el foco inflamatorio causado por una reacción de antígeno anticuerpo (reacción pasiva de Arthus).
Allium sativum L is widely used by Cuban people in folk and natural medicine to alliviate inflammatory processes and specially in rheumatoid arthritis; however, its activity hasn’t scientifically enough demonstrated to stablish a clinical assay for its registration and industrial production. In present paper, action of a Allium sativum syrup on experimental rheumatoid arthritis was assessed, using models of leg edema and pleurisy in Wistar rats, based on passive reaction of Arthus. In two models, placebo and doses of 45, 90, and 180 mg/kg of body weight were assayed based on total solids in A.sativum syrup. As positive controls Ibuprofen and Prednisone were used at dosis of 200 and 10 mg/kg, respectively. Positive controls and assayed dosis of Allium sativum L syrup decreased inflammatory process triggered by antigen-antibody reaction achieved by means of passive reaction of Arthus, by means of egg albumin antiserum, and bovine albumin antiserum for leg edema and development of pleurisy, recpectively.
Key words: Allium sativum L, anti-inflammatory, anti-arthritic, passive reaction of Arthus, antisera, rats.1. Litter Manuel. Farmacología experimental clínica 7ma ed. Buenos Aires: El Ateneo;1986.
2. Wong A, Kenny TP, Ermel R. IgG3 reactive rheumatoid factor in Rheumatoid Arthritis: etiologic and pathogenic considerations .Autoimmunity.1994;19(3):199-10.
3. Kalsi J, Isenberg D. Rheumatoid factor: primary or secondary event in the pathogenesis of Rheumatoid Arthritis. Int Arch Allergy-Immunol.1993;102(3):209-15.
4. Stites DP, Stobo JD Fundenberg HH. Immunología básica y clínica. 5ª ed. Cambridge: Cambridge University Press; 1987.
5. Roig JT. Plantas medicina les aromáticas o venenosa de Cuba. La Habana: Ed. Ciencia y Técnica. Instituto del Libro; 1974.
6. Weniger B, Robineau L. Elementos para una farmacopea caribeña. Seminario Gramil.1988;21-25.
7. Finney DJ. Probits analysis. 3ª ed. Cambridge: Cambridge University Press;1971.
8. Ali M, Khattar M, Farid A. Aqueous extracts of garlic ( Allium sativum ) inhibit prostaglandin synthesis in the ovine ureter. Prostaglandins- leucotrienes- Essenty Fatty Acids.1993;49(5):855-59.
9. Ramos BF, Zhang Y, Jakschik BA. Neutrophil elicition in the reverse passive Arthus reaction. J Immunol.1994; 152(3):1380-84.
Recibido: 4 de mayo de 2007. Aprobado: 14 de mayo de 2007.
Dra. Juana I. Tillán Capó. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM)
Dirección de Investigaciones. Ave 26 Nº 1605 entre Boyeros y Puentes Grandes Plaza Ciudad de la Habana, Cuba.
E- mail: cinfa@infomed.sld.cu ; juana@cidem.quimefa.cu
1Lic. en Bioquímica Farmacéutica, Investigadora Auxiliar, Dra en Ciencias Veterinarias.
2Lic. en Ciencias Farmacéuticas. ]]>
3Lic. en Ciencias Farmacéuticas.
4Técnico en Farmacia.