RESUMEN

Descriptores DeCS: ACIDO URICO; ESTANDARES DE REFERENCIA; SOLUCIONES; ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS; TIMEROSAL; ESTREPTOMICINA; JUEGO DE REACTIVOS PARA DIAGNOSTICO; ESPECTROFOTOMETRIA.

Los productos finales del metabolismo de degradación de las purinas varían considerablemente en las diferentes especies animales. En el hombre el producto final de esta degradación es el ácido úrico (urato).¹ En el suero el urato se presenta en 2 formas, libre y unido a la albúmina; la afinidad del urato por la albúmina es distinta en el suero normal que en el patológico.² Tanto el ácido libre como sus sales son insolubles en agua, lo cual provoca que en algunos individuos el ácido precipite y cristalice en la orina formando cálculos renales y lesionando el riñón.

La gota es la principal afección referible al metabolismo de las purinas, patológicamente se caracteriza por ataques inflamatorios que afectan las articulaciones y van acompañadas por depósitos de uratos.² Habitualmente la concentración de ácido úrico varía de un individuo a otro en dependencia de diversos factores, tales como: sexo, origen étnico, constitución genética y embarazo. Los valores normales oscilan entre 119 y 464 mmol/L.³

Con vistas a garantizar la confiabilidad del trabajo en el laboratorio clínico, es conveniente disponer de soluciones de referencia preparadas de manera centralizada mediante un método que asegure no sólo la posibilidad de obtener buena linealidad en la curva de calibración, sino también una correspondencia entre los valores de concentración declarados y los que realmente tienen las soluciones, por esta razón se necesita encontrar una formulación que garantice la invariabilidad de las concentraciones de las sustancias que se analizan en el transcurso del tiempo, en un plazo lo más largo posible.

En el caso del ácido úrico se han empleado numerosos solventes, tales como: trishidroximetilaminometano (TRIS), trietanolamina, glicina-NaOH y carbonato de litio,^4,5 con el propósito de alargar la vida útil de las soluciones de referencia. Estos solventes no garantizan por sí solos la estabilidad de estas soluciones, por lo que se hace imprescindible la utilización de preservos.

Los preservos se clasifican en 2 grandes grupos, los que evitan transformaciones químicas y los que impiden proliferación de microorganismos. Para su utilización se debe tener en cuenta sus posibles efectos sobre la investigación a realizar.

La solución de referencia que se produce actualmente en la Empresa de Productos Biológicos "Carlos J. Finlay" contiene en su formulación formaldehído como agente preservante, el cual confiere estabilidad a las soluciones de ácido úrico cuando la determinación se realiza por el método de Henry, Sobel y Kim (reducción del fosfotungstato de sodio),⁶ pero presenta franca incompatibilidad con el método enzimático, ya que inhibe la actividad de la uricasa,⁷ por lo que el objetivo de nuestro trabajo fue la utilización de otros preservos que reúnan las condiciones adecuadas para prolongar la vida útil de estas soluciones y evitar incompatibilidad en los métodos de determinación empleados.

MÉTODOS

Preparación de los juegos de soluciones de referencia

Como resultado del estudio de recu-peración, se seleccionaron como preservos el timerosal y la estreptomicina. Se prepararon 2 juegos de soluciones de referencia utilizando estos preservos, por separado, en un intervalo de concentración de 199 a 595 mmol/L. Las soluciones se ajustaron a pH neutro en ambos casos, con soluciones de hidróxido de sodio 0,1 mol/L y ácido clorhídrico 0,1 mol/L.

Se realizaron las curvas de calibración y se comprobó su linealidad mediante un análisis de regresión lineal simple. Las pendientes se compararon mediante la prueba de Duncan.

Métodos para evaluar la concentración de ácido úrico

• Método espectrofotométrico indirecto mediante una reacción química: el ácido úrico reduce al fosfotungstato de sodio, en medio alcalino, originando la formación de un cromógeno azul que se determina espectrofotométricamente a 640 nm.

• Método espectrofotométrico indirecto mediante una reacción enzimática: se basa en la oxidación de ácido úrico a alantoína, con uricasa y la formación de H₂O₂, el cual reacciona en presencia de peroxidasa, originando el 2,4 diclorofenolsulfonato y 4 aminofenazona para formar un compuesto rojo, el cual se determina espectrofotométricamente a 510 nm.

Los juegos de soluciones de referencia preparados fueron sometidos a 3 condiciones de almacenamiento para estudiar la estabilidad del analito: 2 a 8 EC, temperatura ambiente y 37 EC.

RESULTADOS

En la tabla 2 se observa la concentración de ácido úrico obtenida al emplear el método espectrofotométrico indirecto por vía enzimática.

El estudio de estabilidad acelerado del juego de soluciones de referencia de ácido úrico preservadas con timerosal, durante 1 año, se muestra en la tabla 3. ]]> TABLA 3. Estudio de estabilidad

DISCUSIÓN

Esta estabilidad se atribuye no sólo a la acción antimicrobiana, sino también a la posibilidad de que pueda existir una interacción química entre el preservo y el ácido úrico.

Según los resultados del análisis de regresión, se obtuvieron coeficientes de regresión lineal mayores que 0,996 y un intercepto no significativo en todos los casos. Esto indica que la acción de los preservos utilizados no perjudica la linealidad analítica de la curva de calibración.

En la tabla 2 se observan los resultados al evaluar la concentración de ácido úrico obtenida, mediante el método espectrofotométrico por vía enzimática, los cuales no difieren significativamente del valor esperado, lo que nos demuestra que la presencia de timerosal o estreptomicina no afecta la determinación enzimática.

En las soluciones preparadas en presencia de estreptomicina ocurrió una contaminación micótica al cabo de los 30 d. Esto se corroboró mediante una prueba microbiológica. Las soluciones preservadas con timerosal, exhiben buena linealidad en las 3 condiciones de almacenamiento, notándose que al cabo de 1 año sólo se mantiene la linealidad analítica en las soluciones almacenadas de 2 a 8 EC. Esto se comprobó mediante un análisis de regresión lineal. Además se realizó la prueba de rango múltiples de Duncan para comparar las pendientes, no observándose diferencias significativas para los niveles de significación 0,05 y 0,01.

En conclusión las soluciones de referencia de ácido úrico preparadas con timerosal o estreptomicina como agente preservante, pueden ser evaluadas por el método espectrofotométrico indirecto mediante una reacción química o enzimática.

La información obtenida, en cuanto a la estabilización de las soluciones de referencia del urato, resulta de vital importancia para el desarrollo de la tecnología de producción de éstas. ]]> Las sustancias antibacterianas probadas no garantizan por sí solas la protección de las soluciones que se someten a riesgo de contaminación micótica en el trabajo diario, por lo que se recomienda estudiar la posibilidad de combinar los agentes antibacterianos con agentes antimicóticos.

SUMMARY

Subject headings: URIC ACID; REFERENCE STANDARDS; SOLUTIONS; DRUG STABILITY; THIMEROSAL; STREPTOMYCIN; REAGENTS KITS, DIAGNOSTIC; SPECTROPHOTOMETRY.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Lehninger AL. Bioquímica. 2 ed. Barcelona: Editorial Omega, 1980:750.
2. Davidsohn I, Henry J. Diagnóstico clínico para el laboratorio. 6 ed. Madrid: Jims, 1982:610-2.
3. Wiener Lab. Manual de reactivos para el laboratorio clínico. Buenos Aires: Editorial Rosario, 1995:1-2.
4. Lindsey AS, Sharma RK. Some observations on the stability of uric acid in alkaline solutions. Anal Lett 1981;14(B10):799-811.
5. Mc Culloch JC. A solubility problem in the preparation of uric acid standars. Clin Chem 1971;84:269-71.
6. Henry RJ, Cannon DC, Winkelman JW. Química clínica: principios y técnicas. 2 ed. Barcelona: Jims, 1980; t 1:529.
7. Tsan ZL. Thymol preservative interferes with quantitation of serum uric acid by direct acid ferric reduction method. Clin Chem 1981;27(6): 1144-5.