Juan Abreu Payrol,1 Migdalia Miranda Martínez,2 Griset Toledo Carrabeo3 y Osmaida Castillo García4
Se presentan los resultados del estudio farmacológico preliminar de un extracto hidroalcohólico concentrado de los frutos de Bromelia pinguin L. (piña de ratón) mediante bioensayos sencillos y confiables. Se determinó la toxicidad frente a Artemia salina Leach, que resultó muy baja. Se probó la actividad antihelmíntica contra Lombricus terrestri, con resultados relevantes. El extracto no mostró actividad contra diversas cepas de hongos y bacterias.
DeCS: PLANTAS MEDICINALES; EXTRACTOS VEGETALES/toxicidad; EXTRACTOS VEGETALES/farmacología; BROMELAINAS/farmacología; ARTEMIA; ANTIHELMINTICOS; QUIMICA FARMACEUTICA; BIOENSAYO/métodos
En Bromelia pinguin L. han sido realizados escasos ensayos farmacológicos. Sus raíces y tallos han mostrado actividad citotóxica y sus frutos actividad anticoagulante y antiinflamatoria.1,2 ]]>
En 1982, Meyer y otros reportaron un éxito notable mediante un bioensayo simple con la utilización de camarones de mar (Artemia salina Leach). El método es rápido, confiable, barato, y puede ser convenien-temente aplicado por químicos, botánicos, u otros que carecen de recursos o la capacidad técnica requerida para realizar bioensayos estándar.3-5 El ensayo ha mostrado buena correlación con la citotoxicidad P-388,6 y se confirmó su utilidad para la determinación preliminar de la actividad antitumoral.Kaushik y otros (1981) describieron un ensayo simple para determinar la actividad antihelmíntica.7 El método se ha simplificado con el empleo de Lumbricus terrestris, de más fácil adquisición y manejo.8 Ha sido empleado con éxito por varios autores en el estudio de la actividad antihelmíntica de extractos vegetales9 (Iyarreta M. Estudio preliminar de Por-tulaca oleracea L. como droga antihelmíntica. Tesis. Universidad de La Habana, Instituto de Farmacia y Alimentos. 1996).
La actividad antimicrobiana de las plantas puede detectarse mediante la observación de la respuesta al crecimiento de varios microorganismos a tejidos o extractos de plantas puestos en contacto con ellos. En una investigación de carácter general debe seleccionarse la mayor diversidad de microorganismos posible,10 solo para tener conocimiento de la presencia o ausencia de sustancias con actividad antimicrobiana en el extracto.
Dado que el uso tradicional de los frutos de esta especie es como antipara-sitario, ingeridos al natural, en nuestro trabajo evaluamos de modo preliminar su actividad farmacológica, incluyendo su actividad citotóxica, antimicrobiana y antihelmíntica.
El extracto hidroalcohólico estudiado, con consistencia de sirope, se obtuvo según el procedimiento expuesto en la fig. Toxicidad contra Artemia salina Leach: se procede según Meyer y otros.5 Los huevos de Artemia salina Leach se obtienen del Centro de Reproducción de Larvas de Camarón de Yaguanabo (Cienfuegos). Se evalúan concentraciones de 10, 100 y 1 000 mg/mL, a las cuales es posible determinar la concentración letal media (LC50) en extractos activos.
Actividad antihelmíntica: se procede según la técnica in vitro descrita,7 con el empleo del anélido L. terrestris9 (Iyarreta M. Estudio preliminar de Portulaca oleracea L. como droga antihelmíntica. Tesis. Universidad de La Habana, Instituto de Farmacia y Alimentos. 1996). El extracto hidroalcohólico que se evalúa se diluye al 1 y 10 % con agua y se ensayan los extractos acuosos así obtenidos. Como referencia se emplean soluciones de hexahidrato de piperazina, fabricado por la Empresa
Fig. Procedimiento para la obtención del extracto hidroalcohólico evaluado.
Tabla 1. Experimento de actividad biológica contra Artemia salina Leach ]]>
| Concentración (mg/mL) | % de muertes | Concentración (mg/mL) | % demuertes | Concentra ción (mg/mL) | % de muertes |
| 10 |
0 | 100 | 10 | ]]> 1 000 | 30 |
|
10 | 10 | 100 | 30 | 1 000 | 10 |
| 10 | 20 | ]]> 100 | 16,7 | 1 000 | 50 |
| Media | 10 | Media | 18,9 | Media | 30 |
Laboratorio Farmacéutico "Saúl Delgado", Ciudad de La Habana, al 0,06 y al 2 %, preparadas con agua destilada. Se evalúa el tiempo de parálisis y muerte de los vermes, considerado este último cuando no son estimulados al introducirlos en baño de agua a 50 °C durante 10 s. ]]>
Estudio para determinar la actividad antimicrobiana de la muestra: se procede según el método de difusión en agar,11 con el uso de discos de papel. El medio de cultivo que se emplea es agar Mueller--Hinton; se utiliza como control agua destilada. Se evalúa una solución del extracto hidroalcohólico diluido en agua al 10 %. Los microorganismos tomados como control son: Bacillus subtilis ATCC 6633, Bacillus turingiensis, Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Candida s.p.p.
Los resultados del ensayo de toxicidad contra A. salina Leach se muestran en la tabla 1. A la mayor concentración empleada (1 000 mg/mL) solo se alcanzó el 30 % de mortalidad como valor medio. Por otra parte, el análisis de regresión indicó que no existe una relación importante entre la concentración y la actividad biológica, pues r y F no tuvieron valores significativos, para un nivel de significación del 95 % (r = 0,536; F = 2,826).
Los resultados del ensayo de actividad antihelmíntica se resume en la tabla 2. Se muestran los tiempos de parálisis y muerte en los casos en que esto ocurrió. Se valoraron otras manifestaciones que se discuten más adelante.
En el ensayo de actividad antimicro-biana no se detectó inhibición en el crecimiento de ninguno de los microor-ganimos evaluados.
Tabla 2. Experimento de actividad biológica contra Lumbricus terrestris
|
Tiempo de parálisis (h) | Tiempo de muerte (h) | |
| ]]>
Control de agua destilada | - | - |
| Control de suero salino fisiológico | - | - |
| Referencia de piperazina 0,06 % |
6 | ]]> 24 |
|
Referencia de piperazina 2 % | - | 0,5 2 |
|
Solución de muestra al 1 % | - | - |
| Solución de muestra al 10 % | - | ]]> 0,5 |
La actividad biológica del extracto hidroalcohólico frente a A. salina Leach es baja (tabla 1), ya que a la concentración más alta, 1 000 ug/mL, no se alcanza la LC50; mientras que con estas concentraciones (las normadas en el ensayo), ya es posible determinarla en extractos activos.5,6
Es posible plantear entonces que, dada la correlación entre este ensayo y la citotoxicidad, el extracto hidroalcohólico parece tener baja citotoxicidad.
En el ensayo de determinación de la actividad antihelmíntica (tabla 2), en los controles de agua destilada y solución salina fisiológica no hubo muerte ni parálisis, e incluso los vermes no sufrieron alteración.
En la solución de piperazina al 0,06 %, a los 15 min se produjo sangramiento, disminución de la motilidad; a los 2 h mostraron afectación en el tegumento; parálisis a las 6 h y muerte al cumplirse las 24 h del estudio.
Los vermes expuestos a la solución de piperazina al 2 % mostraron a los 15 min disminución de la motilidad, afectación del tegumento, sangre, presencia de excremen-tos, o sea, daño general, para sufrir a los 30 min parálisis general. La muerte ocurrió a las 2 h.
En la solución al 1 %, a los 15 min se observó sangre y excrementos, este estado se mantuvo las 24 h que duró el experimento, pero no ocurrió parálisis ni muerte.
En la solución al 10 % casi inmedia-tamente se evidenció relajación, flaccidez, falta de tegumento, y sangre; la muerte de los vermes ocurrió en 30 min. ]]>
Este ensayo evidencia que la actividad antihelmíntica de la solución al 10 % del extracto hidroalcohólico es superior a la de una solución de piperazina al 2 %; sin embargo, su solución al 1 % es menos activa que una solución de piperazina al 0,6 %. Esta actividad puede ser de interés farmacológico.En el estudio de la actividad antimicrobiana no se produjo inhibición del crecimiento de los microorganismos controles. Luego, el extracto hidroalcohólico no muestra actividad antimicrobiana en una solución al 10 %, que es alta, ya que el extracto hidroalcohólico inicial se obtuvo por concentración hasta sirope de más de 10 L de extracto (fig).
La fracción soluble en etanol del fruto no muestra baja citotoxicidad contra A, salina Leach y posee al 10 % considerable actividad antihelmíntica, por lo que queda demostrada la actividad atribuida. Puede ser entonces un extracto útil para emplearse como antihelmíntico, y deben continuarse los estudios en esta dirección.
The results of the preliminary pharmacological study of a concentrated hydroalcoholic extract from the fruits of Bromelia pinguin L. ("piña de ratón") by simple and reliable bioassays are presented. The toxicity against Artemia salina Leach, which was very low, was determined. The anthelmintic activity against Lombricus terrestri was proved with remarkable results. No activity of the extract against the strains of fungi and bacteria was observed.
Subject headings: PLANTS, MEDICINAL; PLANT EXTRACTS/toxicity; PLANT EXTRACTS/pharmacology; BROMELAINS/pharmacology; ARTEMIA; ANTHELMINTICS; CHEMISTRY, PHARMACEUTICAL, BIOLOGICAL ASSAY/methods.
Recibido: 19 de septiembre del 2000. Aprobado: 30 de octubre del 2000. ]]>
Lic. Armando Payo Hill. Instituto de Ecología y Sistemática. Carretera de Varona km 3½ Capdevila, municipio Rancho Boyeros, Ciudad de La Habana, Cuba.1 Máster en Ciencias Química Farmacéutica. Profesor Auxiliar.
2 Doctora en Ciencias Farmacéuticas. Profesora Titular.
3 Master en Ciencias en Tecnología Farmacéutica.
4 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. ]]>