Evaluación analítica de óvulos de quitina

Analytical evaluation of chitin pessaries

Yania Suárez Pérez^I; Claudia Hidalgo Cabrer^II ]]>

^ILicenciada en Ciencias Farmacéuticas. Doctora en Ciencias Farmacéuticas. Master en Ciencias, Tecnología y Control de Medicamentos. Profesora Auxiliar. Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana. La Habana, Cuba.
^IILicenciada en Ciencias Farmacéuticas. Master en Ciencias, Tecnología y Control de Medicamentos. Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana. La Habana, Cuba.

RESUMEN

Los óvulos de quitina constituyen nuevos productos en fase de investigación. Para la evaluación analítica de estos, se desarrolló un método gravimétrico directo para supositorios vaginales de diferente dosificación. La técnica se basa en la separación de la quitina de los demás componentes de la formulación según sus diferencias de solubilidad, con el empleo de la filtración al vacío. El método se validó para control de calidad, y se obtuvieron resultados satisfactorios en los parámetros evaluados: linealidad, precisión, exactitud y selectividad.

Palabras clave: Óvulos de quitina, gravimetría, validación.

ABSTRACT

Key words: Chitin pessaries, gravimetry, validation.

INTRODUCCIÓN

La industria farmacéutica se encuentra involucrada en garantizar la máxima calidad posible de los productos desde la etapa de diseño. Para ello es necesario tener en cuenta una serie de aspectos, dentro de los cuales se destaca la validación de las técnicas de análisis empleadas. Evidentemente el desarrollo de un nuevo método analítico conlleva un proceso de validación para demostrar su idoneidad.¹

Los óvulos de quitina son formas farmacéuticas en etapa de desarrollo. Teniendo en cuenta las características físico-químicas de este polímero natura,^2,3 las dificultades que existen para lograr su cuantificación por métodos directos, así como las experiencias adquiridas en el análisis de este fármaco en otras formas farmacéuticas,⁴ se diseñó un método gravimétrico para controlar la dosis de quitina en los óvulos. Fue necesario realizar la validación del método para el control de calidad del producto según las exigencias actuales.⁵

]]> MÉTODOS

Desarrollo de la gravimetría directa como método analítico para el control de calidad

Se desarrolló un método sencillo teniendo en cuenta la solubilidad en agua caliente de los excipientes de la formulación. Se determinó el volumen requerido previo a la filtración al vacío a través de filtros Gooch, los cuales se llevaron a peso constante (P₁). Después de la filtración, cada filtro se secó a 105 ± 2 ^oC y se llevó a peso constante (P₂). Se observó la viscosidad de la mezcla antes de filtrar, además de la facilidad y la rapidez durante la filtración. Se graficó el peso del residuo retenido en el filtro P (mg), el cual se calculó por diferencia de peso entre P₂ y P₁. Con estos resultados se seleccionó el volumen de agua más adecuado para disolver la mezcla del excipiente de la formulación.

Posteriormente se evaluaron diferentes volúmenes de lavado: 15, 30 y 45 mL respectivamente divididos en 3 fracciones cada uno. Se determinó nuevamente el peso del residuo (P) y se observó la presencia de partículas de quitina en el vaso de precipitado, además de la rapidez de la filtración.

Descripción del método

Con los resultados obtenidos, se estableció el procedimiento que incluyó la disolución de los excipientes con 30 mL de agua caliente y el lavado final con 20 mL. La toma de muestra para el análisis se realizó con la aplicación de la metodología para formas terminadas sólidas. Se determinó el contenido de quitina a través de la siguiente expresión:

Validación del método analítico para el control de calidad

Se evaluaron los parámetros linealidad, exactitud, precisión, selectividad y rango. Los criterios de aceptación para cada uno se reflejan en la tabla 1.

Linealidad del método. Se realizó mediante el análisis de 5 concentraciones de quitina por triplicado en cada caso, en un rango de 50-150 % de la cantidad teórica declarada. Se prepararon placebos de cada producto, cargados con quitina equivalente al 50, 75, 100, 125 y 150 % de la concentración teórica según la formulación propuesta. Se construyó una curva de calibración de concentración experimental (Y) vs. concentración teórica (X). Los resultados se procesaron estadísticamente a través del paquete STATISTICA for Windows (opción regresión lineal múltiple). ]]> Exactitud. Se construyó una curva de recuperación de mg recuperados (Y) vs. mg añadidos (X) de los puntos equivalentes al 50, 100 y 150 % analizando por triplicado placebos cargados. Los resultados fueron procesados estadísticamente de igual forma que la curva de calibración de la linealidad del método. Se calculó el porcentaje de recobro (R) mediante la formula:

Se incluyó la determinación del recobrado medio (R) y del coeficiente de variación total (CV). Además, se realizó la prueba de Cochram (prueba G), para determinar si el factor de concentración tiene alguna influencia en los resultados. El valor de G_exp se comparó con el tabulado G_tab (a= 0,05, k= 3, n= 3. Si G_exp ‹ G_tab las varianzas de las 3 concentraciones son equivalentes, o lo que es igual, el factor concentración no influye en la variabilidad de los resultados.

Por último se aplicó la prueba de la t de Student para demostrar que no existen diferencias significativas entre el valor medio de recobro obtenido y el 100 %. Siendo: n-1 los grados de libertad y a= 0,05.

Precisión

Repetibilidad: Se evaluaron por triplicado placebos cargados con la concentración equivalente al 100 % y un valor bajo y otro alto comprendido dentro del rango de la linealidad del método. Se calculó el CV en estos 3 niveles de concentración y se comparó con el criterio establecido. Las determinaciones las realizó el mismo analista en las mismas condiciones de trabajo.

Precisión intermedia: Participaron 2 analistas en 2 días diferentes. Se analizaron por triplicado en cada caso placebos cargados con el 100% de ambos principios activos en el mismo laboratorio. Se calculó el CV total. La prueba F de Snedecor se utilizó para determinar si existían diferencias significativas entre los resultados de los analistas que emplearon el mismo método y entre los días en que se realizaron los análisis. Si F_exp ‹ F_tab no existe diferencia significativa entre la precisión alcanzada por los analistas, en 2 días de trabajo.

La prueba de la t de Student se utilizó para comprobar si los valores obtenidos entre los analistas, que emplearon igual método, y los 2 días en que realizaron los análisis eran homogéneos, para el nivel de significación a= 0,05 y los grados de libertad seleccionados F= (n1 + n2) - 2.

Selectividad: Se realizó mediante la evaluación por triplicado de placebos del producto, con la técnica propuesta. Se determinó la posible interferencia de los componentes de la matriz a través del peso de los residuos obtenidos en los filtros, después del secado hasta peso constante. Además se realizó el espectro IR al residuo obtenido al analizar placebo cargado con el 100 % de quitina, para comprobar la identidad del analito obtenido después del análisis gravimétrico, el cual se comparó con el de la materia prima. ]]> Rango: Se estableció el intervalo en que se cumplen los criterios de linealidad, exactitud y precisión.

RESULTADOS

Desarrollo del método analítico para el control de calidad

Se escogió como disolvente el agua caliente por ser el más barato y disponible, pero además porque todos los componentes de la formulación (gelatina, glicerina, metil y propilparabenos) son perfectamente solubles en estas condiciones, en contraparte con la total insolubilidad de la quitina. El agua debe estar caliente para disolver los parabenos, pero además el calentamiento contribuye a reducir la viscosidad de la muestra, aspecto favorable para mejorar la filtración. Con 20 mL se redujo la interferencia de los excipientes, y disminuyó la viscosidad notablemente, por lo que la filtración tuvo lugar más rápidamente. El residuo remanente con 30 mL fue despreciable, tal como se aprecia en la figura. Esta es la razón por la cual fue 30 mL el volumen seleccionado, ya que aunque con 40 mL el residuo fue nulo, se demoraría innecesariamente la filtración, sin reducir la calidad de los resultados.

Los resultados del experimento para seleccionar volumen de lavado se resume en la tabla 1. El volumen escogido para el lavado final fue el intermedio, 3 fracciones de 10 mL, ya que con el menor volumen quedan algunas partículas remanentes y con el mayor, se demora innecesariamente la filtración y no se reflejan diferencias en cuanto a los porcentajes de quitina recuperados. Con 30 mL se recuperó la quitina y se alcanzaron elevados valores de recobrado.

Validación del método analítico para el control de calidad ]]> Los resultados se resumen en la tabla 2. El cumplimiento de los criterios de aceptación demuestra la validez del método para el uso previsto. La selectividad fue demostrada por comparación de los espectros IR de la quitina materia prima y de los residuos retenidos en los filtros por gravimetría, ya que se observó total coincidencia en estos. Además no se obtuvo interferencia de los componentes de la formulación.

DISCUSIÓN

La quitina carece de grupos analíticamente activos que propicien el desarrollo de otras técnicas analíticas directas. La aplicación de los métodos indirectos reportados para alguno de sus productos de hidrólisis, no se recomienda en formas terminadas, debido a que se afecta inevitablemente, su recuperación y por tanto la exactitud del método. Estas razones han conllevado a plantear como la metodología más acertada desde el punto de vista analítico, la separación de la quitina de las sustancias auxiliares en función de las diferencias en cuanto a solubilidad y su posterior cuantificación por gravimetría. Los resultados obtenidos en la validación, permiten aplicar esta técnica en el control de calidad del producto terminado, independientemente de la dosis de los óvulos.

]]> REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Gil M. Protocolos de validación de métodos de análisis, materias primas y productos termina dos.1995. Madrid: Universidad Complutense de Madrid; p. 1-16

2. Muzzarelli R. Chitin. Ancona: Pergamon Press Ltd, University of Ancona; 1977. p. 24-36.

3. Galperin M. Sustancias poliméricas de organismos marinos: la quitina y la quitosana. Manuf Chemist. 1984;55(9):73-5.

4. Suárez Y, Almirall I, González H.M, Bilbao O, Nieto OM. Metodología para estudios de estabilidad química en formulaciones de quitina . Rev Cubana Farm. 2000;34(1):12-9.

5. ICH Q2B, 1997. Harmonised Tripartite Guideline. Validation of Analytical Procedures: Methodology. 1997.

Recibido: 25 de abril de 2008.
Aprobado: 2 de junio de 2008. ]]>  

Lic. Yania Suárez Pérez. Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana. Ave 23 No. 21425 entre 214 y 222, La Coronela, municipio La Lisa, La Habana, Cuba. Correo electrónico: yania_as@yahoo.es ]]> 1 1995 1-16 2 1977 24-36 3 1984 55 9 9 73-5 4 2000 34 1 1 12-9 5 1997