Evaluación de desempeño del método de ensayo de disolución para tabletas metformina 500 mg producidas en Cuba

Performance evaluation of the dissolution test method for metformin tablets 500 mg produced In Cuba

Rafael León Rodríguez^I; Caridad M. García Peña^II; Iverlis Díaz Polanco^III; Vivian Martínez Espinosa^IV

RESUMEN

Se validó un método para evaluar la disolución de las tabletas de metformina 500 mg producidas en Cuba por espectrofotometría, con detección ultravioleta a 233 nm. Se evaluaron los parámetros de especificidad, linealidad, precisión e influencia de la filtración. En el estudio de la influencia de la filtración se demostró que a través del filtro de línea, no se absorbe el principio activo, ni se aportan interferencias al filtrado, por lo que se recomienda su empleo. Se demostró la especificidad del método al no observarse interferencias de los excipientes de la formulación, en la determinación del principio activo. La curva de linealidad se realizó en el intervalo de 3,0 a 7,0 µg/mL con un coeficiente de correlación igual a 0,999. El método resultó preciso ya que los valores se encontraron dentro de los límites establecidos.

Palabras clave: Metformina, validación, ensayo de disolución.

ABSTRACT ]]> We validated a method to assess dissolving of Metformin tablets (500 mg) produced in Cuba by spectrophotometry, with UV detection at 233 nm. We evaluate also the parameters of specificity, linearity, accuracy, and filtration influence. In study of this latter, we showed that through the line-filter, it is impossible to absorb the active principle and there weren't filtration interferences, recommending thus its use. We showed also method specificity because of there weren't interferences of the formula excipients, in the active principle determination. Linearity curve was established in the interval of 3,0 to 7,0 µg/mL, with a correlation coefficient similar to 0,999. Method was accurate since values were within the established limits.

Key words: Metforming, validation, dissolution assay.

INTRODUCCIÓN

El clorhidrato de metformina es un agente hipoglicemiante derivado de la biguanida utilizado en el tratamiento de la diabetes mellitus de tipo 2. Se administra a pacientes que no responden a las sulfonilureas o en combinación con sulfonilurea.¹

La metformina mejora la tolerancia a la glucosa en pacientes con diabetes de tipo 2 disminuye las concentraciones de glucosa, basales y posprandial, en plasma. Actúa mediante la disminución de la producción de glucosa hepática y la absorción intestinal de esta. Además mejora la sensibilidad a la insulina por incremento de la recaptación y utilización de la glucosa periférica. A diferencia de las sulfonilureas, la metformina no produce hipoglicemia en los pacientes que presentan diabetes mellitus de tipo 2 ni en los pacientes normales.^1,2

El ensayo de disolución constituye uno de los estudios más importantes en el desarrollo de una forma farmacéutica sólida oral. Permite evaluar los procesos de fabricación, la calidad intralotes e interlotes, además de predecir en algunos casos la bioequivalencia y biodisponibilidad de productos sólidos orales y la estabilidad del preparado farmacéutico.³

En la Farmacopea Británica (BP 2007) aparece reportado un método analítico para el ensayo de disolución de las tabletas recubiertas de metformina, se emplea para este un método espectrofotométrico, con lecturas a 233 nm, y como blanco, solución de fosfato de potasio monobásico a pH 6,8.⁴

La USP 30, 2007,⁵ plantea para el ensayo de disolución (categoría III) el estudio de la precisión, mientras que los restantes parámetros se realizarán en dependencia de la naturaleza específica del ensayo. Sin embargo, en otros reportes o fuentes se incluyen aspectos tan importantes como: la especificidad con respecto al placebo, la linealidad, la precisión y la influencia de la filtración.^6,7 ]]> El presente trabajo tiene como objetivo la evaluación del desempeño del método reportado en la BP 2007, para el ensayo de disolución de las tabletas de metformina 500 mg producidas en Cuba, mediante la evaluación de los parámetros de especificidad, linealidad, precisión e influencia de la filtración.

MÉTODOS

Las tabletas de metformina fueron elaboradas en el Laboratorio de Formas Terminadas, perteneciente al Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM), La Habana, Cuba, e identificadas con el número de lote 17. Para la elaboración de los núcleos se empleó la vía de granulación húmeda, y excipientes de uso común en la industria farmacéutica; el recubrimiento de los núcleos se realizó en un bombo tipo Pellegrini (Italia) sin perforación y como agente filmógeno un polímero de hidroxipropilmetilcelulosa.

La sustancia de referencia química de clorhidrato de metformina utilizada fue suministrada por el Departamento de Patrones del Laboratorio de Aseguramiento de la Calidad del CIDEM, de procedencia India y como fabricante BDR PHARMACEUTICAL Int. Todos los reactivos respondían a la calidad analítica requerida para el estudio, según BP 2007.

Las condiciones del ensayo de disolución utilizadas fueron las reportadas en la BP

2007:⁴

Aparato: cesta, 100 rev/min ]]> Medio: solución de fosfato de potasio monobásico a pH 6,8; 900 mL

Tiempo: 30 min

El equipo utilizado en el estudio fue un disolutor Erweka DT 6 RE de 6 plazas (Alemania).

Para el análisis se disolvió en solución de fosfato de potasio monobásico a pH 6,8, una cantidad exacta de la sustancia de referencia química de clorhidrato de metformina, de modo que se obtuviera una concentración de 5,5 µg/mL.

Para el análisis de las tabletas un vez que se alcanzó una temperatura de 37 ^oC se adicionó una tableta en cada uno de los vasos del disolutor. Trascurridos los 30 min de duración del ensayo, se tomó y filtró una alícuota de 10 mL. Posteriormente, se realizaron las diluciones necesarias con el objetivo de obtener una concentración similar a la sustancia de referencia química.

La validación del ensayo de disolución de las tabletas de metformina 500 mg, se realizó teniendo en cuenta que el método reportado en la BP 2007. Los parámetros evaluados fueron los siguientes: influencia del filtrado, especificidad, linealidad, precisión.

Influencia de la filtración

Para evaluar la influencia de la filtración, se analizaron 6 unidades del lote 17, y se compara ron entre sí los resultados de las muestras filtradas por filtro de línea (PALL, 0,2 µm Nylon Acrodise, Estados Unidos), con las muestras centrifugadas a 3 000 rev/min^-1en una centrífuga Jouan MR18-22 (Francia), durante 10 min. Debe cumplirse que el valor de t calculada fuera menor que el valor de t tabulado, al compararse estadísticamente los resultados con uno de los medios filtrantes.⁸

Especificidad ]]> El estudio se realizó con el empleo de 6 unidades del placebo, según el procedimiento descrito para el ensayo de disolución, con el objetivo de determinar las posibles interferencias de los excipientes empleados en la formulación en la determinación del principio activo. Debió cumplirse que no apareciera absorbancia en el placebo superior al 1 % en relación con las obtenidas en la sustancia de referencia química, en la zona de máxima absorbancia del principio activo.⁹

Linealidad

Para el estudio de la linealidad de la respuesta del detector se preparó una curva de calibración con 5 soluciones patrón de metformina en un intervalo de concentraciones de 3,0 a 7,0 µg/mL, que representaron el 60, 80, 100, 120 y 140 %, de la cantidad declarada en la formulación. Debió cumplirse que el coeficiente de correlación (r) fuera mayor o igual que 0,9990; el coeficiente de variación de los factores de respuesta (CV_f £ 5 %); en la prueba de significación del intercepto, mediante la prueba de la t de Student, la t calculada (t cal) debió ser menor que la t tabulada (t tab).¹⁰

Precisión

La precisión del ensayo de disolución se estudió mediante 6 ensayos de disolución en los que se evaluaron las tabletas en dos días diferentes. Debió cumplirse para un método lineal que los valores de t cal de cada muestra fueran menores que el valor de t tab, para g. l.: 5; p < 0,05.⁹

Todos los análisis estadísticos fueron procesados mediante el Programa STATGRAPHICS Plus versión 5.1, abril 2002.

Aplicación del método en el control de la calidad

Se realizó el estudio de disolución a 3 lotes de producto terminado, fabricado en la UCTB Tecnologías Básicas pertenecientes al Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).

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RESULTADOS

Influencia de la filtración

Los resultados medios de la influencia de la filtración aparecen reportados en la tabla 1, tanto de las muestras centrifugadas como de las muestras filtradas con filtro de línea, así como los valores de la prueba de la t de Student calculados para cada muestra.

Especificidad

Como se muestra en la tabla 2, no se observa absorbancia del placebo superior al 1 % en relación con las obtenidas en la sustancia de referencia química, en la zona de máxima absorbancia del principio activo. Mientras que los valores de absorbancia de la sustancia de referencia química de clorhidrato de metformina y de las muestras son similares.

Linealidad

Al aplicar el método de los mínimos cuadrados a los resultados registrados, se obtuvo la ecuación de la recta que se expresó según: y = 0,0561 X + 0,1753. El coeficiente de correlación lineal fue de 0,99944. Al aplicar la prueba de linealidad, utilizando el coeficiente de variación de los factores de respuesta, se obtuvo un CV_f= 3,91 %. Al realizar la prueba de significación de la pendiente, el valor de t calculada (t cal= 1,97) resultó menor que la t tabulada (t tab= 2,14). ]]> Precisión

En la tabla 3 se muestran los resultados del estudio al realizar diferentes ensayos de disolución con el objetivo de analizar la disolución de las tabletas recubiertas de metformina, en dos días diferentes. Se reportan los valores de las medias obtenidas en los ensayos de disolución realizados en los días diferentes, además los valores de la prueba de la t de Student calculados para cada muestra.

Aplicación del método en el control de la calidad

En la tabla 4 se reportan los resultados del ensayo de disolución realizado a 3 lotes de producto terminado.

DISCUSIÓN ]]> Los resultados del estudio de la influencia de la filtración demostraron que no existieron diferencias significativas entre los resultados alcanzados con muestras filtradas y muestras centrifugadas, ya que el valor de t calculada resultó ser menor que la t tabulada. Los resultados se encuentran dentro de los límites establecidos para el estudio de este parámetro en la validación de un ensayo de disolución.^6,8 Esto permitió asegurar que como resultado de la filtración el principio activo no fue absorbido por el sistema de filtración ni se detectaron interferencias en el filtrado, por lo que es posible su empleo, para la cuantificación de metformina en tabletas de liberación inmediata, de manera que se propuso la filtración por filtro de línea (PALL, 0,2 µm nylon Acrodise) como medio de filtración.

Los resultados en el estudio de especificidad permitieron afirmar que el método es específico en relación con los excipientes que componen la tableta porque la respuesta obtenida en el placebo, con respecto a la muestra, fue menor del 1 % y además no se observaron interferencias de estos en la determinación del principio activo. Los resultados se encuentran dentro de los límites establecidos para el estudio de especificidad.⁵

La curva de calibración del estudio de linealidad del sistema, a 233 nm, se comportó de forma lineal en el intervalo de concentraciones comprendidas entre 3,0 y 7,0 µg/mL, con un adecuado valor del coeficiente de correlación (r ³ 0,99900). El valor del coeficiente de variación de los factores de respuesta se encontró dentro de los límites establecidos para la evaluación de este parámetro en la validación (CV_f £ 5 %), demostrándose una adecuada linealidad.⁵

Los resultados del estudio de la precisión mostraron que el método es preciso ya que en todos los casos no existieron diferencias significativas; los valores de t cal resultaron menores que la t tab, para cada una de las muestras analizadas. Los resultados, para cada uno de los valores medios obtenidos, se encuentran dentro de los límites establecidos para el estudio de precisión.⁵ Además los valores obtenidos en las muestras evaluadas satisfacieron el límite establecido para el ensayo de disolución de las tabletas de metformin (Q ³ 80 %).⁴

En los 3 lotes estudiados los resultados del parámetro evaluado se encontraron dentro de los límites establecidos (Q ³ 80 %).⁴

En conclusión, se demuestra el desempeño de las condiciones del ensayo de disolución descrito en la Farmacopea Británica (BP 2007) para las tabletas de metformina 500 mg producidas en Cuba. Se validó el método de disolución de las tabletas de metformina de liberación inmediata, con resultados ajustados a la linealidad, precisión y especificidad.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ]]> 1. Goodman A, Gilman, A. Las bases farmacológicas de la terapéutica. Tomo II. 3ra ed. La Habana: Editorial Científico Técnica; 1994. p. 466-7. (Edición Revolucionaria).

2. PDR. Physicians´ Desk Reference. 57 ed. New York: Inc at Montuale; 2003. p. 332, 2193, 2905, 3270.

3. Dressman JB, Lennernas H. Oral drug absorption: Prediction and assessment. New York: Marcel Dekker Inc; 2000. p. 197-8.

4. Farmacopea Británica (BP 2007). Copyright. Inc. Versión Electrónica (CD). 2007.

5. Farmacopea de los Estados Unidos (USP 30). 30 ed. Rockville: Mack Printing; 2007. p. 2883-5.

6. Fortunado D. Dissolution Technologies: Dissolution Method Development for Inmediate Release Solid Oral Dosage Forms. London: Dissolution Technologies Magazine; 2005. p. 12-4.

7. Hanson WA. Handbook of Dissolution Testing. 2^nd ed. Aster Publishing Corporation, Eugene, Oregon; 2002. p. 27-43; 91-113.

8. Skoug JW. Estrategia para el desarrollo y validación de pruebas de disolución para formas sólidas orales. New York: Pharmaceutical Technology Magazine; 1996. p. 8-15.

9. Dressman J. Drugs and the pharmaceutical sciences. Oral Drugs Absorption. Aster Publishing Corporation, Eugene, Oregon. Vol 106. 2002. p. 12-425.

10. Cox DC. Journal Technology: Guidelines for Dissolution Testing. Aster Publishing Corporation, Eugene, Oregon. Vol. 2; 2001. p. 41-58. ]]>  

Recibido: 5 de octubre de 2008.
Aprobado: 6 de noviembre de 2008.

M. C. Caridad M. García Peña. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). Ave 26, No. 1 605 entre Boyeros y Calzada de Puentes Grandes, CP 10 600, municipio Plaza de la Revolución, La Habana, Cuba. Correo electrónico: caridad@cidem.sld.cu

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