Sistema de puntuación del daño múltiple de órganos en un modelo de quemadura tratado con Aloe b, ozono y factor de crecimiento epidérmico

Tte. Cor. Teresita Montero González,1 Tte. Cor. José Hurtado de Mendoza Amat,2 Ing. Patricio Moreno Quintana3 y Tte. Cor. Pablo Cabrera Rosell4

Resumen

La experiencia alcanzada en el estudio del daño múltiple de órganos (DMO) mostraba la necesidad de establecer una escala semicuantitativa que permitiera cuantificar el valor de las alteraciones observadas. El propósito del presente trabajo fue diseñar un método de estudio del DMO con el empleo de una escala de valores semicuantitativos que se identifique con los daños patomorfológicos y que permita evaluar el DMO en el modelo empleado. Se elaboró un modelo de quemadura seca de un área del 11 % en ratones hembras balb/c de 20 ± 2 g (n= 24) y se aplicó tratamiento con el empleo de inmunomoduladores y citoprotectores. Se estudiaron los órganos con evaluación cualitativa en grados de intensidad. La prueba G fue empleada para conocer la dependencia entre las variables y la prueba t fue usada al comparar porcentajes. La prueba de rango múltiple de Duncan se utilizó en el sistema de puntuación. Se siguieron las normas éticas en el trabajo con los animales. El sistema de puntuación propuesto y aplicado en los animales de los diferentes grupos de estudio permitió excluir el DMO en parte de los animales de los grupos que mejor comportamiento presentaron durante todo el estudio y clasificar el DMO con intensidad entre leve, moderada e intensa.

Palabras clave: daño múltiple de órganos, autopsia, calidad, sistema de puntuación.

El daño múltiple de órganos (DMO) es la morfología de la respuesta inflamatoria sistémica (RIS).1 La acción de múltiples mediadores desencadena la disfunción de órganos y sistemas,2 frecuente causa de muerte si no se asume un tratamiento enérgico y rápido. Se previene cuanto más temprano se piense en él y se prepare al organismo para asumirlo.3 En la terapéutica sobre el síndrome de disfunción múltiple de órganos (SDMO) se plantea la necesidad del uso de inmunomoduladores4 y oxigenación suplementaria5 para prevenir o atenuar la RIS que desencadenan los factores causales. ]]>

Entre los medicamentos de producción nacional con propiedades inmunomoduladoras se encuentran el Aloe b, producto obtenido de una planta (Aloe barbadensis) de reconocido uso terapéutico,6 y el ozono,7 variedad alotrópica del oxígeno que comparte varias propiedades con el Aloe b, entre ellas la de regulador de la respuesta inmunológica. Otra sustancia, un polipéptido biológicamente activo, el factor de crecimiento epidérmico (epidermal growth factor, EGF) humano obtenido en el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología por vía recombinante, administrado en concentraciones suprafisiológicas por vía sistémica, tiene importante efecto como citoprotector tisular.8

La enfermedad por quemadura es representante de la RIS que se expresa morfológicamente en el DMO.1 ¿Cómo discriminar entre las alteraciones histopatológicas observadas en este proceso, aquellas que correspondan al DMO y las que se encuentran en las autopsias como consecuencia de los cambios en la fase agónica de las enfermedades? Para ello, el propósito del presente trabajo fue diseñar un método de estudio del DMO con el empleo de una escala de valores semicuantitativos que se identifique con los daños patomorfológicos y que se use para evaluar el DMO en el modelo utilizado, y observar la variación de estos entre los diferentes grupos de estudio.

Métodos

Se realizó el estudio sobre la base de un modelo experimental de ratón quemado previamente elaborado.9 Los animales fueron ratones de la línea balb/c, hembras, de 20 ± 2 g y de 12 semanas. Se empleó un modelo de quemadura seca paravertebral total en una superficie corporal quemada 11 %, con temperatura de 100 °C y tiempo de exposición de 20". Las condiciones de vida se desarrollaron con ambiente controlado en un bioterio. Los animales se aclimataron durante 7 días y el control de la evolución se efectuó 2 veces al día. La selección de los animales se realizó por tablas de números aleatorios mediante el paquete estadístico "CSS for Window". Se utilizaron 5 grupos con una n = 24 animales en cada grupo. Inmediatamente posquemadura se aplicó hidratación y el tratamiento (tabla 1).

Tabla 1. Hidratación y tratamiento posquemadura

* Se empleó un equipo OZONOZAN PM 83K, con una presión de oxígeno de 0,10 mmHg.
SS: solución salina; S: semana; IP: intraperitoneal; TR: transrectal.

Se aplicó eutanasia a las 24 h, 72 h, 7 días y 14 días, y se estudiaron los órganos con evaluación cualitativa en grados de intensidad según criterios establecidos en trabajos anteriores.10 El estudio morfológico se realizó de forma cualitativa de acuerdo con criterios establecidos para cada lesión evaluada en los diferentes órganos. Se realizó a ciegas por el investigador y fue corroborado por 2 observadores. Los criterios de evaluación fueron: 0 negativo; 1 leve; 2 moderado y 3 intenso.

El DMO se evaluó por la presencia de lesión en 3 o más órganos. La esplenitis y hepatitis reactiva se consideraron como respuesta del sistema monocítico fagocitario (SMF). Para cada caso se valoró el promedio de las intensidades afectadas (leve, moderada e intensa) y se clasificó el DMO en estos grados. El análisis cuantitativo realizado fue el siguiente:

El análisis cualitativo realizado fue el siguiente: ]]>

Análisis estadístico: Se aplicó la prueba G de tablas de contingencia para analizar la dependencia entre los grupos de estudio y el comportamiento del DMO. Se empleó la prueba de la t de Students (ts) para comparar los porcentajes en la evaluación del DMO en grados de intensidad. Se comparó la normalidad por la prueba de Kolmogorov Smirnov y la homogeniedad de varianza por la prueba de Bartlett. La puntuación alcanzada en cada grupo de estudio se realizó con un análisis de varianza de clasificación simple y para comparar las medias se empleó la prueba de rangos múltiples de Duncan.11

Resultados

Los animales estudiados en cada subgrupo de eutanasia fueron los que se encontraban vivos en ese momento, se observó muy favorable respuesta en los tratados con ozono y EGF.
El DMO en general fue clasificado en grado leve a moderado en los animales del estudio. Existió un comportamiento variable entre la intensidad del DMO y los diferentes grupos de tratamiento (G= 45,11***, p < 0,001). Cuando se realizó el análisis de los porcentajes (ts), se observó que los animales de los grupos que recibieron tratamiento presentaron mayor porcentajes del DMO en el grado leve, siendo significativas las cifras en forma favorable en los animales del grupo tratado con ozono y tratado con EGF (ts= 5,74*** y 7,08*** respectivamente), (tabla 2).

Tabla 2. Presencia del DMO en los diferentes grupos de estudio

G = 45,11***, p < 0,001. ]]> NS: no significativo.

El sistema de puntuación propuesto indica significación estadística según prueba de rango múltiple de Duncan para p < 0,05 (Sx= 2.54***, p < 0,001). En el grupo no tratado y el placebo, los valores no muestran diferencias, tienen igual nivel de significación (a) (letras diferentes indican significación diferente). En el grupo tratado con Aloe b la puntuación fue de 14,45 (b). El grupo tratado con EGF mostró una puntuación de 11,5 y el tratado con ozono de 11,06, lo cual los ubica en otro nivel de significación (c), (figura).

Nota: Letras diferentes indican significación estadística diferente. (Sx = 2,54; p < 0,001). Los números significan los puntos alcanzados por cada grupo.
Fig. 1. Sistema de puntuación del DMO en los diferentes grupos de estudio.

Tabla 3. Reevaluación del DMO con la aplicación del sistema de puntuación y su comparación entre los grupos de estudio

G= 87,27***, p < 0,001
t= 4,25***

El DMO alcanzó intensidad moderada en los animales del grupo no tratado y el placebo con respecto a los tratados, lo cual representa una diferencia en cuanto a la presencia del DMO en estos grupos (ts= 2,27*, p < 0,05). El grado leve alcanzó mayores procentajes en los animales tratados, con una evolución más favorable del DMO (ts= 4,25***, p < 0,001). La ausencia de DMO solo se presentó en los grupos de mejor evolución (tratado con ozono y EGF), mientras que el grado intenso estuvo solo en los de peor comportamiento (no tratado y placebo).

Discusión

La rapidez de los procesos bioquímicos relacionados con el daño celular,12 provoca que en los períodos premortem se presenten alteraciones estructurales que no difieren de las ya descritas en el DMO.10,13 En el estudio experimental realizado se propone un sistema de puntuación que permite que las alteraciones observadas de forma casi permanente en los órganos al fallecer por diferentes causas, se excluyan del diagnóstico del DMO cuando se presentan en grado leve. Muestra una relación estrecha entre la evolución de la vitalidad de los animales, la intensidad del DMO y la respuesta de los valores del estrés oxidativo expuestos en trabajos precedentes.14

Los animales del grupo tratado con Aloe b, del grupo tratado con ozono y tratado con EGF muestran resultados favorables en la evolución de la vitalidad, manifestación de buena respuesta a la terapéutica empleada desde los primeros momentos de ocurrida la quemadura. En el extremo opuesto está el grupo no tratado, solo con reanimación tras la quemadura y el grupo placebo. El número de órganos afectado fue superior, las lesiones se presentaron en grados entre moderado a intenso y entre las alteraciones de menor reversibilidad.

El valor de aplicar el método de estudio y el sistema de puntuación propuesto para el diagnóstico del DMO en las autopsias en humanos posibilitaría:

• Pensar en el diagnóstico del DMO cuando existan el o los factores causales y la reactividad del sistema inmunológico.
  
• Analizar las alteraciones acorde con el sistema de puntuación propuesto, excluyendo los cambios que se producen en el proceso agónico.
  
• Excluir órganos con lesiones directas por la acción del factor causal.
  
]]> Realizar un análisis integral clínico-patológico del fallecido estudiado.

• Ayudar al pensamiento clínico sobre los aspectos patogénicos que pueden provocar un desenlace fatal en los pacientes en busca de la prevención de su acción.
  

La realización del presente estudio, aún con una evaluación cualitativa en grados de intensidad, permite su generalización.

El sistema de puntuación propuesto y aplicado en los animales de los diferentes grupos de estudio permitió excluir el DMO en parte de los animales de los grupos que mejor comportamiento presentaron durante todo el estudio y ubicar el papel del DMO en los otros grupos con intensidad entre moderada e intensa, existiendo relación adecuada con la vitalidad, la intensidad del DMO y comportamiento del estrés oxidativo en estos grupos.

Summary

Key words: multiple organ damage, autopsy, quality, scoring system.

Referencias Bibliográficas

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1 Doctora en Ciencias Médicas. Profesora Auxiliar.
2 Doctor en Ciencias Médicas. Profesor Titular.
3 Ingeniero Mecánico. Investigador Auxiliar.
4 Especialista I Grado Anatomía Patológica.