Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí”
Lic. Islay Rodríguez,1 Dra. Carmen Fernández,2 Lic. Celia Llerena,3 Lic. Berta Victoria,4 Téc. José E. Rodríguez5 y Lic. Ana M. Obregón6
Se estudiaron 41 sueros provenientes de pacientes en estado grave con sospechas de leptospirosis humana, mediante la prueba comercial Lepto dipstick y haciendo uso paralelamente de la microaglutinación de serogrupos con antígenos vivos (MAT). Se obtuvieron diferentes niveles de reactividad por el dipstick en 26 de las muestras investigadas. Este ensayo y la MAT coincidieron en 85,4 % de los resultados. Se comprobó que el Lepto dipstick reconoce anticuerpos contra diferentes serovares de leptospiras, y que el grado de intensidad de la tinción de las bandas se corresponde con el nivel de anticuerpos detectados por la MAT. La aplicación del Lepto dipstick al diagnóstico de la leptospirosis humana, permitió ofrecer una respuesta rápida al personal médico de asistencia de los casos estudiados. Esto demostró que se trata de un método rápido de realizar y de fácil lectura e interpretación.
DeCS: LEPTOSPIROSIS/diagnóstico; LEPTOSPIROSIS/microbiología; TESTS DE AGLUTINACIÓN; IBM/inmunología; TESTS SEROLOGICOS.
El diagnóstico de la leptospirosis humana es un hecho complejo, en el que debe considerarse la epidemiología, los factores de riesgo, los signos clínicos, las lesiones y los hallazgos de laboratorio. El diagnóstico microbiológico constituye un aspecto determinante en esta entidad, porque durante la infección se producen variadas formas clínicas.1,2
El diagnóstico de laboratorio de la leptospirosis humana se basa fundamentalmente en métodos bacteriológicos y serológicos; estos últimos son los de mayor aplicación al nivel internacional. La microaglutinación de serogrupos (MAT) es la técnica de referencia, la cual permite la detección de anticuerpos grupo-específicos con una alta sensibilidad. Tiene la desventaja de que está restringida a laboratorios que sean capaces de mantener cepas para la preparación de los antígenos vivos. Se describen otros métodos alternativos como: hemaglutinación indirecta, ensayos inmunoenzimáticos (ELISA) e inmunofluorescencia indirecta; pero estos requieren de personal calificado, son caros y requieren de tiempo, independientemente de que se hace necesario el uso de sueros pareados para el testaje.1,3
En el presente trabajo, el propósito fue mostrar los resultados obtenidos al aplicar este paquete comercial al diagnóstico rápido de la leptospirosis, en el Laboratorio Nacional de Referencia de Leptospiras del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí”.
Fueron estudiados 41 sueros procedentes de individuos con sospechas clínico-epidemiológicas de leptospirosis humana en estado de gravedad.
Lepto dipstick: fue usado un paquete comercial (Organon Teknika). El procedimiento técnico así como la interpretación de los resultados se realizó según las instrucciones del productor.
MAT: se realizó según se describe en los Lineamientos para el Control y Prevención de la Leptospirosis, editado por el Comité de Expertos de la OMS,2 a partir de la dilución 1:10 del suero problema como única modificación.
Al aplicar el Lepto dipstick a las muestras de suero en estudio se encontró que para todos los casos el sistema funcionó, porque se obtuvo la banda de control interno con una intensidad de 2+. ]]>
Tabla 1. Resultados de la aplicación del Lepto dipstick y la MAT a los sueros en estudio
| MAT | ||||
| + | - | Total | ||
| Lepto dipstick | ]]> + | 21 | 5 | 26 |
| - | 1 | 14 | 15 | |
| Total | 22 | ]]> 19 | 41 | |
Al analizar los patrones de intensidad de la tinción de las bandas obtenidas, se encontró la distribución que aparece reflejada en la tabla 2, donde se puede observar que las reactividades fueron mayormente moderadas y débiles en los sueros estudiados. También se comprobó la correlación que existía entre la intensidad de la tinción de las bandas con los títulos obtenidos por MAT, y se observó que a mayor intensidad, mayores eran los niveles de anticuerpos detectados por MAT (tabla 3).
Tabla 2. Distribución del número de sueros respecto a los patrones de intensidad de la tinción de las bandas
antígeno en el dipstick
| Sueros analizados | ]]> Intensidad de la tinción de las bandas antígeno* | ||||
| 0 | 1+ | 2+ | 3+ | 4+ | |
| 41 | 15 | 8 | 14 | 4 | ]]> 0 |
* 0: no reactivo, 1+: débil reactivo, 2+ reactividad moderada, 3+ y 4+: reactividad fuerte.
Tabla 3. Relación de la intensidad de la tinción en el dipstick con los niveles de anticuerpos detectados por MAT
| Lepto dipstick Intensidad de la tinción | MAT Rango de títulos de anticuerpos |
| 0 | 0 |
| ]]> 1+ | 160 - 640 |
| 2+ | 320 - 640 |
| 3+ | 320 - 640 |
El diagnóstico microbiológico de la leptospirosis humana requiere de métodos rápidos y sencillos de realizar, que ofrezcan resultados en un breve tiempo, pues en ocasiones la vida de muchas personas depende de estos ensayos, dada la gran variedad de formas clínicas en que se puede manifestar esta entidad, la cual puede llegar a confundirse con otras patologías de origen viral, que no necesitan de un tratamiento con antibióticos.
El ensayo de Lepto dipstick utilizado, según el patrón de su banda de control interno, permitió realizar el diagnóstico serológico a los sueros en estudio, pues demostró la funcionalidad del sistema y se correspondió con lo reportado en la literatura.4,5 Además, permitió valorar el grado de intensidad del resto de las bandas, o sea, de las que indicaron la presencia de una reacción antígeno-anticuerpo específico para Leptospira.
Se reporta que el dipstick comienza a detectar anticuerpos usualmente entre los 5-10 d del comienzo de la enfermedad, lo que pudiese justificar las muestras no reactivas encontradas, las cuales procedían de pacientes ingresados con poco tiempo de evolución. Cuando se obtiene reactividad en sueros colectados en esta etapa, generalmente la intensidad de la reacción es débil (1+).4 En estos casos se hace necesario el estudio de una segunda muestra. ]]>
Forty one serum specimens from critical patients who were suspected of having human leptospirosis were studied by using simultaneously convencional test Lepto-dipstick and serogroup microagglutination test (MAT) with live antigens. Different reactivity levels were reached in 26 tested samples by Lepto-dipstick. This assay and MAT coincided in 85,4% of results. It was confirmed that Lepto-dipstick detects antibodies to various leptospiral serovars and that the degree of intensity of the band staining corresponded with the level of detected antibodies by MAT. The implementation of Lepto-dipstick in the diagnosis of human leptospirosis allows providing a rapid response to the medical staff in charge of the studied cases. This proved that Lepto-dipstick is a rapid method that is easy-to-read and interpret.
Subject headings: LEPTOSPIROSIS/diagnosis; LEPTOS-PIROSIS/microbiology; AGGLUTINATION TESTS; IGM//immunology; SEROLOGIC TESTS. ]]>
Recibido: 17 de septiembre de 2001. Aprobado: 15 de noviembre de 2001.
Lic. Islay Rodríguez. Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” Apartado Postal 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana, Cuba. Correo electrónico: islay@ipk.sld.cu ]]>
1 Máster en Bacteriología-Micología. Licenciada en Microbiología. Aspirante a Investigadora. Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” (IPK).
2 Máster en Ciencias. Doctora en Medicina Veterinaria. Investigadora Auxiliar. IPK.
3 Licenciada en Microbiología. Centro Municipal de Higiene, Epidemiología y Microbiología de 10 de octubre. Ciudad de La Habana.
4 Licenciada en Bioquímica. Aspirante a Investigadora. IPK.
5 Técnico en Microbiología. IPK.
6 Máster en Bacteriología-Micología. Licenciada en Microbiología. Investigador Auxiliar. IPK.