Instituto de Hematología e Inmunología
Centro de Inmunología Molecular
Lic. Lilia E. Suárez Batista,1 Lic. René A. Rivero Jiménez,1 Lic. Antonio A. Bencomo Hernández,1 Lic. Marta N. Martínez Solís,1 Dra. Renée González Sampedro1 y Dra. Teresita Rodríguez Obaya2
Los estudios de estabilidad de los reactivos frabricados a partir de anticuerpos monoclonales de origen murino, permiten establecer adecuadamente la vida de estos productos, y su realización constituye un requisito indispensable en el cumplimiento de las buenas prácticas de producción. Se usaron los métodos de hemaglutinación para medir la actividad biológica del producto Hemo-CIM® Anti-B expresada en la potencia, la avidez y la intensidad, frente a un panel de eritrocitos del grupo B y A1B, para demostrar más efectivamente cualquier deterioro del reactivo. Se estableció que la vida útil del hemoclasificador producido en el Centro de Inmunología Molecular es de 2 años con una temperatura de almacenamiento entre 2 y 8 oC. La evaluación que simula las condiciones a la que los usuarios someten a estos reactivos, demostró que el reactivo mantiene las características de calidad que se requieren para su uso. La estabilidad lograda con el Hemo-CIM® Anti-B es similar a la informada con el producto hemoclasificador monoclonal murino Hemo-CIM® Anti-A.
DeCS: INDICADORES Y REACTIVOS; ANTICUERPOS MONOCLONALES.
La comercialización, distribución y uso diagnóstico de los reactivos hemoclasificadores monoclonales Hemo-CIM® Anti-A y Hemo-CIM® Anti-B en Cuba fue posible una vez que se realizó el registro de estos productos ante el Centro Estatal para el Control de la Calidad de los Medicamentos (CECMED), la agencia reguladora nacional.
Un conjunto de actividades se realizaron para lograr el registro de estos productos, entre ellas los estudios de estabilidad en anaquel, que constituyen un requisito indispensable en las buenas prácticas de produccción (BPP).
Los estudios de estabilidad sumunistran las evidencias de cómo la calidad del producto varía con el tiempo bajo la influencia de una variedad de factores ambientales, tales como la temperatura, la humedad y la luz y establece el tiempo de caducidad y las condiciones de almacenamiento adecuada del producto.1
]]> El objetivo de este estudio fue establecer el período de caducidad del Hemo-CIM® Anti-B, dentro del cual el producto cumple con los requisitos de calidad exigidos por las agencias reguladoras para este tipo de reactivo.En el estudio se incluyeron 3 lotes del reactivo, que se manufacturaron conse-cutivamente en el Centro de Inmunología Molecular (CIM) siguiendo los procedimientos normalizados de operación (PNO) y lo establecido en los registros de lotes para la formulación, llenado, envase y etiquetado. Se tuvo en cuenta que los frascos usados para este estudio fueran los mismos en que se envasaría el producto para su almacenamiento y distribución.2
La selección de los lotes se realizó de forma aleatoria, una vez que se evaluaron y liberaron en el Departamento de Calidad del CIM por cumplir con las especificaciones de calidad.
Para definir la calidad del producto se analizaron la potencia, la intensidad y la avidez del reactivo en las reacciones de aglutinación frente a un panel de eritrocitos, en el que se incluyeron células con expresión débil del antígeno B, con el fin de detectar con más efectividad cualquier deterioro que sufriera el reactivo durante el estudio, al estar controladas las caracte-rísticas susceptibles de cambiar durante el almacenamiento y que influyen en la calidad, seguridad y eficacia (tabla 1).1,3 Los frascos de cada lote se almacenaron entre 2 y 8 °C durante el tiempo del estudio; de ellos, un frasco de cada uno de los 3 lotes de Hemo-CIM® Anti-B se mantuvo 5 horas diarias a 21 °C durante 4 meses a partir del mes 0 y a los 8, 14, 22 meses de su producción, simulando las condiciones a las que se someten estos reactivos diagnosticadores en los centros donde se realiza tipaje sanguíneo, con esta estrategia se controló el almacenamiento y uso subsecuente de los productos una vez manufacturados.2 Las evaluaciones del producto almacenado a una temperatura entre 2 y 8 °C se realizaron con una periodicidad bimensual, y en los frascos mantenidos a 21 °C , una vez por semana durante los 4 meses de cada período, hasta que se agotó el reactivo.
Tabla 1. Células utilizadas en el estudio
| Reactivo evaluado | Células utilizadas en la evaluación | |
| Cantidad de donantes | Fenotipo celular | |
| Hemo-CIM® | 1 | B |
| Anti-B | 3 | A,B |
RESULTADOS
Los lotes del producto Hemo-CIM® Anti-B almacenados entre 2 y 8 °C mantuvieron las especificaciones que se requieren para su uso. En la tabla 2 se muestran los valores de potencia, avidez e intensidad de reacción al inicio, al año y a los 2 años de almacenamiento. También los frascos que se colocaron en la meseta de trabajo durante 5 horas a 21 °C, y que se chequearon durante 4 meses a partir del mes 0, 8, 14 y 22, mantuvieron las especificaciones de calidad requeridas, por lo que en la tabla 3 solo se muestran los resultados en la primera y última semana de este estudio en cada una de las etapas de evaluación.
Tabla 2. Resultados de la potencia, avidez e intensidad de los 3 lotes del Hemo-CIM® Anti-B que se mantuvieron a una temperatura entre 2 y 8 °C
| ]]> | Hemo-CIM® | ||||
| Panel | Anti-B | ||||
| Fecha del estudio | Técnica | celular | Lotes 1, 2 y 3 | ||
| Tubo | ]]> B | 7a | |||
| (potencia) | A,B | 5 | |||
| Inicio: marzo de 1996 | 2n | ]]> A,B | 5 | ||
| A,B | 6 | ||||
| Lámina | ]]> B | 2´b | 4+c | ||
| (avidez e | A,B | 2´ | 3+ | ||
| intensidad) | ]]> A,B | 2´ | 4+ | ||
| Tubo | B | 7 | |||
| ]]> A,B | 5 | ||||
| Al año: marzo de 1997 | A,B | 5 | |||
| ]]> A,B | 6 | ||||
| Lámina | B | 2´ | 4+ | ||
| ]]> A,B | 2´ | 3+ | |||
| A,B | 2´ | 3+ | |||
| ]]> A,B | 2´ | 4+ | |||
| Tubo | B | 7 | |||
| ]]> A,B | 5 | ||||
| Fin: marzo de 1998 | A,B | 5 | |||
| ]]> A,B | 6 | ||||
| Lámina | B | 2´ | 4+ | ||
| ]]> A,B | 2´ | 3+ | |||
| A,B | 2´ | 3+ | |||
| ]]> A,B | 2´ | 4+ | |||
a) Recíproco de la mayor dilución en la que se observa aglutinación (7 equivale a ½7 =1/128). b) Avidez en segundos. c) Intensidad en cruces de la fuerza de la reacción de aglutinación, escala de 4+ (máximo) a 0 (no aglutina).
Tabla 3. Potencia, avidez e intensidad de los 3 lotes del Hemo-CIM® Anti-B. Temperatura entre 21 y 25 °C
| Hemo-CIM® | ||||||
| Tiempo de | ]]> Fecha del | Anti-B | ||||
| producción | estudio | Técnica | Panel celular | Lotes 1, 2 y 3 | ||
| Tubo | ]]> B | 7a | ||||
| (potencia) | A1B | 5 | ||||
| ]]> | 2n | A1B | 5 | |||
| Semana 1: | A1B | ]]> 6 | ||||
| marzo de 1996 | Lámina | B | 2´"b | 4 +c | ||
| (avidez e | ]]> A1B | 2´ | 3+ | |||
| intensidad) | A1B | 2´ | 4+ | |||
| Mes 0 | ]]> | v | 2´ | 4+ | ||
| Tubo | B | ]]> 7 | ||||
| A1B | 5 | |||||
| ]]> A1B | 5 | |||||
| Semana 16: | A1B | 6 | ||||
| ]]> julio 1996 | Lámina | B | 2´ | 4+ | ||
| A1B | 2´ | ]]> | 3+ | |||
| A1B | 2´ | 3+ | ||||
| ]]> A1B | 2´ | 4+ | ||||
| Tubo | B | 7 | ||||
| ]]> | A1B | 5 | ||||
| A1B | ]]> 5 | |||||
| Semana 1: | A1B | 6 | ||||
| noviembre de 1996 | Lámina | ]]> B | 2´ | 4+ | ||
| A1B | 2´ | 3+ | ||||
| Mes 8 | ]]> | A1B | 2´ | 3+ | ||
| A1B | 2´ | ]]> | 4+ | |||
| Tubo | B | 7 | ||||
| ]]> A1B | 4 | |||||
| A1B | 4 | |||||
| ]]> Semana 16: | A1B | 4 | ||||
| abril de 1996 | Lámina | B | 2´ | ]]> | 4+ | |
| A1B | 3´ | 3+ | ||||
| ]]> A1B | 2´ | 3+ | ||||
| A1B | 2´ | 4+ | ||||
| ]]> | Tubo | B | 7 | |||
| A1B | ]]> 5 | |||||
| A1B | 5 | |||||
| Semana 1: | ]]> A1B | 6 | ||||
| junio de 1997 | Lámina | B | 2´ | 4+ | ||
| ]]> | A1B | 2´ | 3+ | |||
| A1B | 2´ | ]]> | 3+ | |||
| A,B | 2´ | 4+ | ||||
| Mes 14 | Tubo | ]]> B | 7 | |||
| A1B | 4 | |||||
| ]]> | A1B | 4 | ||||
| Semana 16: | A1B | ]]> 5 | ||||
| noviembre | Lámina | B | 2´ | 4+ | ||
| de 1997 | ]]> A1B | 3´ | 3+ | |||
| A1B | 2´ | 3+ | ||||
| ]]> | A1B | 2´ | 4+ | |||
| Tubo | B | ]]> 7 | ||||
| A1B | 5 | |||||
| ]]> A1B | 5 | |||||
| Semana 1: | A1B | 6 | ||||
| ]]> enero de 1998 | Lámina | B | 2´ | 4+ | ||
| A1B | 2´ | ]]> | 3 + | |||
| A1B | 2´ | 4+ | ||||
| Mes 22 | ]]> A1B | 2´ | 4 + | |||
| Tubo | B | 7 | ||||
| ]]> | A1B | 4 | ||||
| A1B | ]]> 4 | |||||
| Semana 16: | A1B | 5 | ||||
| mayo de 1998 | Lámina | ]]> B | 2´ | 4+ | ||
| A1B | 3´ | 3+ | ||||
| ]]> | A1B | 2´ | 3+ | |||
| A1B | 2´ | ]]> | 4+ | |||
a) Recíproco de la mayor dilución en la que se observa aglutinación (7 equivale a ½7 = 1/128). b) Avidez en segundos. c) Intensidad en cruces de la fuerza de la reacción de aglutinación, escala de 4+ (máximo) a 0 (no aglutina).
Los 3 lotes de Hemo-CIM® Anti-B reaccionaron frente al panel de eritrocitos dentro de los límites de aceptación recomendados por las agencias reguladoras internacionales y nacional3,4 para este tipo de reactivos con:
El producto Hemo-CIM® Anti-B es estable por un período de 2 años a una temperatura entre 2 y 8 °C, lo que permite su uso en los centros donde se realiza la determinación de grupo sanguíneo ABO.
Los eritrocitos A1B tienen una baja expresión del antígeno B y se utilizaron durante la evaluación del reactivo Hemo-CIM® Anti-B para demostrar más efectivamente el deterioro del reactivo durante el estudio. Esta estrategia nos permitió demostrar que estamos en presencia de un producto que mantiene sus características de calidad, aún simulando las condiciones a la que los usuarios someten a estos reactivos, avalado por los valores mínimos de potencia obtenidos (16 y 32) frente a 3 muestras diferentes de eritrocitos A1B durante todo el estudio.
]]> Se demostró la consistencia entre los lotes del producto, lo que avala el proceso productivo establecido en el CIM para la manufactura de dicho reactivo, por lo que el registro se otorgó con un período de validez de 16 meses como reactivo diagnosticador.La estabilidad lograda con el Hemo-CIM® Anti-B es similar a la informada con el producto hemoclasificador monoclonal murino Hemo-CIM® Anti-A,5 por lo que el país cuenta ya con 2 reactivos hemoclasificadores eficaces para el sistema ABO.
The stability studies of the reagents made from monoclonal antibodies of murine origin allow to establish the life of these products adequately and are an indispensable requisite for the fulfillment of the good practices of production. The hemagglutination methods were used to measure the biological activity of the Anti-B Hemo-CIMâ product expressed in the potency, avidity and intensity against a panel of erythrocytes of the group B and A1B in order to show in a more effective way any deterioration of the reagent. It was established that the useful life of the hemoclassifier produced at the Center of Mollecular Biology is of 2 years at a storage temperature between 2 and 8ºC. The evaluation that simulates the conditions to which the users subject these reagents showed that the reagent maintains the quality characteristics required for its use. The stability attained with the Anti-B Hemo-CIMâ is similiar to that reported with the murine monoclonal Anti-A Hemo-CIMâ hemoclassifier product.
Subject headings: INDICATORS AND REAGENTS; ANTIBODIES, MONOCLONAL.
1. International Conference on Harmonisation (ICH). Stability testing of new substances and products ICH Harmonised Tripartite Guideline. Octuber 27th, 1993:1-4.
2. International Conference on Harmonisation (ICH). Guidance for industry. Stability testing of drug substances and drug products. Draft Guidance, june, 1998:3-21.
3. Centro Estatal para el Control de la Calidad de los Medicamentos (CECMED). Guía para la evaluación de los diagnosticadores. Anexo. Diagnosticadores en inmunohematología República de Cuba, 1996;3-17.
4. US Food and Drug Administration. Recomended methods for blood grouping reagents evaluation. Docket No. 845-0181, March, 1992:1-53.
5. Suárez L, Rivero R, Pérez N, Bencomo A, Torres F, Martínez M, et al. Reactivo monoclonal cubano Hemo-CIM Anti A: Estudio de estabilidad. Rev Cubana Hematol Immunol Hemoter 1998 (en prensa).
Recibido: 28 de septiembre de 1999. Aprobado: 26 de noviembre de 1999. ]]>
Lic. Lilia E. Suárez Batista. Instituto de Hematología e Inmunología. Apartado 8070, CP 10800, Ciudad de La Habana, Cuba. Teléf.: (537)578268. Fax: (537)338979. e-mail: ihidir@hemato.sld.cu ]]>