Figura 1. Curvas de calibración utilizando los medios mantenimiento comercial y CITRUFOL-IHI.
MsC. Mariela Forrellat Barrios,1 Dra. Norma Fernández Delgado,1 Dra. Hortensia Gautier du Défaix Gómez 1 y Lic. Daniel Benítez Zequeira 2
Para la determinación de folatos se emplea una técnica microbiológica que requiere la utilización de medios de cultivo de difícil adquisición por ser importados. En los últimos años se confrontaron dificultades para la obtención del medio de mantenimiento líquido que obligaron a desarrollar un medio que permitiera mantener la realización de estas importantes determinaciones, que se obtuvo a partir de la modificación de un medio de cultivo comercial empleando jugo de naranja proveniente de cualquier variedad, al que nombramos CITRUFOL-IHI. Los resultados de la comparación con el medio de cultivo comercial evidenciaron la validez de la sustitución, lo que posibilita mantener las determinaciones de folatos imprescindibles como apoyo de los programas de prevención de malformaciones congénitas y para el estudio de las anemias megaloblásticas y las neuropatías. La producción del CITRUFOL-IHI puede realizarse fácilmente y en pequeñas cantidades de acuerdo con las necesidades, evitando las pérdidas por deterioro, lo que hace de este un reactivo con posibilidades de generalización.
Palabras clave: ácido fólico, medios de cultivo, deficiencia de ácido fólico.
El folato, una de las vitaminas del complejo B, se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza y forma parte de suplementos vitamínicos y minerales como ácido fólico, que es la forma sintética. La deficiencia de esta vitamina, que constituye una de las principales causas de anemia nutricional, afecta a las personas que consumen dietas pobres en frutas y vegetales, y a un tercio de las embarazadas, entre las cuales constituye causa de trastornos obstétricos.
Se conoce que los gastos médicos y quirúrgicos provocados por estas malformaciones son superiores a 200 000 millones de dólares y que la deficiencia de folatos está relacionada además con el parto pretérmino, la toxemia gravídica y el retardo del crecimiento intrauterino. Es por ello que en la prevención de estos trastornos se recomienda, además de la suplementación periconcepcional con folatos, el estudio de marcadores bioquímicos como el folato sérico y eritrocitario.8
Para la determinación de folatos, la OMS recomienda el método microbiológico que emplea el Lactobacillus casei, en cuya realización son necesarios 3 medios de cultivo usualmente importados con las consecuentes dificultades para su adquisición, especialmente de tipo económico. Estos inconvenientes conllevaron a que en la década de los 80, se desarrollara en nuestro laboratorio el medio de cultivo de ensayo Z3.9
A finales de los años 90, con el recrudecimiento del bloqueo y sus implicaciones negativas para la compra de reactivos, nos vimos imposibilitados de obtener el medio de mantenimiento líquido necesario para continuar realizando las determinaciones de folato. Por estos motivos, desarrollamos un medio de mantenimiento líquido que nos permitiera sustituir el medio comercial importado para poder mantener la realización de estas importantes determinaciones, lo cual constituyó el objetivo de este trabajo.
Se analizó la composición del medio de cultivo comercial, que se muestra a continuación, y se valoraron las posibles variaciones de acuerdo con los reactivos disponibles. ]]>
Composición del Lactobacilli broth AOAC, Difco (1L):
| Leche peptonizada | 15 g |
| Extracto de levadura | 5 g |
| Dextrosa | 10 g |
| Jugo de tomate (100 mL) | 5 g |
| Fosfato monobásico de potasio | 2 g |
| Tween 80 | 1 g |
pH final 6,8 ± 0,2.
Se realizó la sustitución del jugo de tomate por jugo de frutas cítricas más frecuentes y asequibles en nuestro medio durante todo el año. Para ello se realizaron pruebas con jugo de piña, limón y naranja; este último fue el de mejores resultados y más fácil obtención.
Una vez seleccionado el jugo de frutas a utilizar, se preparó el medio modificado al que nombramos CITRUFOL-IHI y se realizaron curvas de calibración con inóculos preparados a partir del mismo, para su comparación con las obtenidas con el medio comercial. Para ello se utilizó la prueba t Student para muestras independientes a partir de una base de datos procesada por el sistema SPSS.
Finalmente se calculó el costo de los componentes para producir 1L de medio de mantenimiento CITRUFOL-IHI y el ahorro que ha significado su empleo en la sustitución del importado.
Composición del CITRUFOL-IHI (200mL):
| Leche peptonizada | 3 g |
| Extracto de levadura | 1 g |
| Dextrosa | 2 g |
| Jugo de Naranja | 20 mL |
| Fosfato monobásico de potasio | 400 mg |
| Tween 80 | 200 µL |
Los reactivos se pesaron por separado y se mezclaron en el orden que se enuncian. El jugo de naranja se preparó mediante extracción del zumo de la fruta de cualquier variedad disponible, que fue filtrado 2 veces por papel de filtro Whatman, para obtener un jugo transparente y sin partículas. El pH final de la mezcla fue de 5,0 y se ajustó a 6,8 ± 0,2 con hidróxido de sodio 1 mol/L.
Como se observa en la figura, las curvas de calibración obtenidas a partir de inóculos preparados con el CITRUFOL-IHI no difieren de las obtenidas utilizando el medio comercial. Esto se corroboró estadísticamente al comparar ambas curvas mediante la t Student (tabla 1), lo que nos permite plantear que el medio modificado puede utilizarse en sustitución del medio comercial.
Tabla 1. Comparación de las curvas de calibración utilizando los medios de mantenimiento comercial y CITRUFOL-IHI
| Medio de mantenimiento | n | `X | DS |
| Comercial | 189 | 504,74 | 182,16 |
| CITRUFOL-IHI | 189 | 492,88 | 195,24 |
p = 0,542.
Tabla 2. Ahorro en la producción de 1L de medio CITRUFOL-IHI
| Medio de mantenimiento | ]]> Costo (USD) |
| Comercial | 27,66 |
| CITRUFOL-IHI | 2, 00 |
| Ahorro | 25,66 |
Figura 1. Curvas de calibración utilizando los medios mantenimiento comercial y CITRUFOL-IHI.
La exactitud de los resultados obtenidos con el CITRUFOL-IHI, independientemente de la variedad de naranja empleada, evidencia la factibilidad de su utilización en sustitución del medio comercial.
For the determination of folates it is used a microbiological technique requiring the use of culture media that are difficult to be acquired, since they are imported. During the last years, there have been difficulties to obtain the liquid maintenance medium that led to the development of a medium that allow to keep on making these important determinations. It was attained by modifying a commercial culture medium by using orange juice from any variety that was called CITRUFOL-IHI. The results of the comparison with the commercial culture medium showed the validity of the substitution, making possible to continue the determinations of folates as a support of the prevention programs of congenital malformations and for studying megasloblastic anemias and neuropathies. CITRUFOL-IHI may be easily produced in small quantities according to the needs, avoiding the losses by deterioration, and turning it into a reagent with generalization possibilities.
Key words: folic acid, culture media, folic acid deficiency.
Recibido : 10 de diciembre del 2003. Aprobado:
MsC. Mariela Forrellat Barrios. Instituto de Hematología e Inmunología. Apartado 8070, CP 10800, Ciudad de La Habana, Cuba. Tel (537) 578268, 544214. Fax (537) 442334. e-mail: ihidir@hemato.sld.cu
1 Instituto de Hematología e Inmunología.
2 Facultad de Ciencias Médicas "Julio Trigo".