Serum levels of interleukin-2 before and after blood donation
MSc. Maczy González Rincón, MSc. Ana Ruiz Medina, Lic. Yustin Gómez, Lic. Ruthmelania Villasmil, Lic. Jessica Villasmil Anselmi, Dra. Melvis Arteaga de Vizcaíno y MSc. Maribel Quintero de Troconis
1Cátedras de Hematología y Práctica Profesional de Hematología, Instituto de Investigaciones Clínicas. Facultad de Medicina. Universidad del Zulia. Auspiciado por el Consejo de Desarrollo Científico y Humanístico (CONDES) de La Universidad del Zulia, Maracaibo, Estado Zulia, Venezuela.
En los donantes de sangre se generan alteraciones de los componentes del sistema inmune; sin embargo, poco se conoce sobre los mediadores solubles como la interleucina 2 (IL-2), importante marcador de la respuesta inmunitaria. Se determinaron los niveles séricos de IL-2 a 34 donantes de sangre voluntarios antes, 24 horas y 12 días después de la donación empleando inmunoensayo enzimático. Se obtuvieron valores promedio de 7,46; 7,41 y 7,83 U/mL para IL-2, para los períodos descritos, respectivamente. A pesar de que se han señalado cambios importantes en la respuesta inmunitaria, la IL-2 no pareció afectarse en los donantes después de la donación, atribuible posiblemente a los bajos niveles de activación de los linfocitos T esperados en individuos sanos, cuyo sistema inmune se encuentra funcionando en forma óptima. Se necesitarían más estudios para esclarecer el comportamiento de esta citocina, y su influencia según el hemoderivado donado en la respuesta inmune del donante.
Palabras clave: interleucina 2, donantes de sangre.
Alterations of the components of the immune system are generated among blood donors; however, little is known about the soluble mediators as interleukin-2 (IL-2), an important marker of the immune response. The serum levels of IL-2 were determined in 324 volunteer blood donors before, 24 hours and 12 days after the donation by using enzymatic immunoassay. There were obtained average values of 7.46, 7.41, and 7.83 U/mL for IL-2 during the described periods, respectively. In spite of the significant changes described in the immunity response, IL-2 did not seem to be affected in the donors after donation, due maybe to the low levels of T lymphocytes expected in healthy individuals, whose immune system is in optimal conditions. Further studies would be necessary to clear-up the behaviour of this cytokine and its influence on the immune response of the donor, according to the donated hemoderivate.
Key words: Interleukin-2, blood donors.
Muchas evidencias se han acumulado sobre la inconveniencia de las transfusiones de sangre en pacientes quirúrgicos con enfermedades neoplásicas y en aquellos que ameritan trasplante de órganos, entre otros; esta inconveniencia se refiere al incremento en la aparición de complicaciones infecciosas, micrometastásicas y de la mortalidad.1-4
]]> En ese sentido, se observa un marcado interés sobre los efectos inmunomoduladores que las transfusiones ejercen en los pacientes que las ameritan. Así, se responsabiliza a la transfusión alogénica como un predictor independiente de mortalidad, aumentando con cada unidad de sangre transfundida los días de hospitalización y el riesgo de muerte.4 De igual forma, se señala que la transfusión autóloga disminuye la supresión del sistema inmunológico en pacientes con tumores malignos sometidos a procedimientos quirúrgicos.5En estudios de diversa índole que se han venido realizando desde hace poco más de 30 años, se documentan exhaustivamente los principales efectos fisiológicos y psicológicos que padece el donante después de la donación de sangre. Entre los efectos se encuentran las reacciones vasovagales (debilidad, palidez, náuseas, desvanecimiento, entre las más importantes), condicionadas, la mayor parte de las veces, por disminución de la volemia que conduce a falla en la compensación circulatoria por el sistema nervioso autónomo; 2,6,7 además de los factores psicológicos cuya participación parece contribuir en la aparición de estas reacciones.8
Sin embargo, a pesar de que la donación de sangre representa para el donante la pérdida de cierto volumen que contiene diversos componentes del sistema inmune, hace relativamente poco tiempo, algunos científicos se han dedicado a estudiar los posibles efectos inmunológicos de la donación de sangre,3-5,9-12 tales como alteraciones en el número y tipo de subpoblaciones linfocitarias, así como en las concentraciones de las inmunoglobulinas séricas.9,13 En la última década, los estudios se encaminan a conocer los valores séricos de mediadores solubles como las citocinas y sus receptores solubles, cuyo conocimiento ayudaría a entender mejor el comportamiento diferente que se observa en pacientes que reciben sangre autóloga o alogénica.3,4
Atendiendo a estos antecedentes, se decidió cuantificar las concentraciones de interleucina 2 (IL-2), en donantes que asisten al Banco de Sangre del Estado Zulia, antes, 24 horas y 12 días después de la donación de sangre.
La muestra de estudio comprendió 34 donantes voluntarios del Banco de Sangre del Estado Zulia, del sexo masculino, con edades comprendidas entre 20 y 45 años, a quienes se les determinaron las concentraciones de IL-2 antes, 24 horas y 12 días después de la donación de sangre. Todos los donantes cumplieron con los requisitos exigidos en el reglamento que rigen las actividades de los bancos de sangre, para ser considerados aptos para la donación.14
A cada uno de los donantes se les informó sobre los objetivos del presente estudio y se les solicitó su consentimiento por escrito para ser incluido en el mismo.
A cada donante se les extrajeron 6 mL de sangre (obtenida por venipunción), antes, 24 horas y 12 días después de la donación, y se depositaron en tubos de vidrio secos y estériles sin anticoagulante. Posteriormente se separó el suero por centrifugación a 1 000 g durante 10 minutos. El suero extraido se repartió en alícuotas que se colocaron en tubos plásticos (Eppendorf), y se almacenaron a -70 ºC hasta su procesamiento.
El análisis de las muestras séricas para IL-2, se realizó mediante la técnica de inmunoensayo enzimático de captura (ELISA) (BIOSOURCE), Catálogo # KAC1241, lote # 034404.15
Los valores obtenidos se expresaron como promedio +/- desviación estándar. Los datos se analizaron a través de la prueba t de Student para datos pareados. Se utilizó el 95 % como índice de confianza, considerando toda probabilidad menor de 0,05 como significativa (p< 0,05).
Los valores promedio y desviaciones estándar de IL-2 obtenidos en los 3 períodos de estudio analizados, fueron los siguientes:
Nótese que se observó una discreta disminución 24 horas después de la donación, para elevarse ligeramente 12 días después. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas entre los valores.
Los diferentes reportes sobre las alteraciones de los componentes del sistema inmune en donantes de sangre son controvertidos. Varios autores 9,11 encontraron disminución de la cifra absoluta de linfocitos totales, TCD4, TCD8 y linfocitos B en donantes de sangre ordinarios, 12 días después de realizarse la donación, lo cual según Abraham y colaboradores, 11 no parece condicionar las posibles alteraciones de activación y proliferación celular observadas en pacientes que han sufrido pérdida sanguínea. 16 Estos resultados se rebaten en otros trabajos, en los cuales no se observaron estos hallazgos.11,17
En este trabajo, se observa que los valores promedio de IL-2 obtenidos en los donantes antes de la donación fue de 7,46 U/mL; al comparar estos valores con los referidos por el kit utilizado (control bajo y alto 6,59 U/mL y 18,9 U/mL), se puede observar que nuestros valores se situaron alrededor del valor bajo, este resultado solo es el reflejo de las características que tenían los sujetos de estudio seleccionados quienes conforman un grupo de personas sanas con parámetros hematológicos normales para su edad y sexo, y por lo tanto, con una activación inmunitaria bajo estímulo fisiológico.18,19
A pesar de que en algunos de los donantes se encontraron niveles no detectables de IL-2, en la mayoría de ellos (n = 25) se determinó IL-2 sérica, situación que podría explicarse si tenemos en cuenta que los individuos objeto de estudio eran donantes por primera vez, y el estrés generado por esta experiencia pudo haber condicionado el desencadenamiento de los mecanismos de activación transitoria de las células T y subsecuentemente, la síntesis y secreción de IL-2 (eje hipotálamo-hipofisiario-sistema neuroendocrino).2,7,8,20
Se destaca que el empleo de kits comerciales de ELISA para la determinación de citocinas séricas o plasmáticas, muestran una baja reproducibilidad de laboratorio a laboratorio, a pesar de aplicarse en cada caso el mismo principio de reacción; sin embargo, la no disponibilidad de estándares y reactivos internacionales para las citocinas que provengan de la misma fuente, dificulta la homogenización y correlación de los resultados obtenidos por diversos investigadores al nivel mundial. Estas limitaciones metodológicas pueden haber condicionado en cierta forma los resultados obtenidos en esta investigación en donantes voluntarios.21
Como señalamos anteriormente, las concentraciones de IL-2 en los diferentes períodos estudiados, experimentaron un aumento con respecto al valor basal, a los 12 días, pero sin significación estadística. Estos resultados coinciden con los obtenidos por Lange y colaboradores, quienes midieron, entre otros parámetros, niveles séricos de citocinas (IL-2, RsIL-2, entre otras) en donantes de sangre a repetición y en donantes ocasionales, y encontraron disminución de células TCD8 y NK, pero sin cambios significativos en las concentraciones de las citocinas. 10 Por el contrario, Abraham y colaboradores encontraron en donantes habituales, en especial de concentrados leucocitarios, disminución de la proliferación de linfocitos periféricos con depresión de los niveles séricos de IL-2, que se mantuvo aproximadamente por 24 horas.16
]]> Asimismo, resulta de gran importancia tener en cuenta estudios recientes que han determinado que ciertos polimorfismos genéticos al nivel de algunas citocinas pueden causar alteraciones en la síntesis y secreción de las mismas. Mac Millan y colaboradores, en 2003, describieron un polimorfismo de la IL-2 al nivel de su región promotora (alelo G), que causa un incremento en la producción de esta citocina en receptores de trasplante de médula ósea. La determinación de la frecuencia de este polimorfismo en la población de donantes, podría explicar la detección de niveles séricos de IL-2 circulantes en los individuos objeto de estudio, antes y después de la donación de sangre y sus posibles efectos en los receptores.22En resumen, los resultados encontrados en los donantes de sangre objeto de nuestro estudio, quienes se encontraban donando sangre por primera vez (500 mL), no mostraron cambios significativos durante los períodos estudiados, atribuible presumiblemente, a los bajos niveles de activación de los linfocitos T esperados en individuos sanos cuyo sistema inmune se encuentra funcionando en forma óptima.18,23
Esta investigación fue financiada por el Consejo de Desarrollo Científico y Humanístico de la Universidad del Zulia (CONDES). Los autores agradecen la dotación de materiales reactivos y equipamiento necesario para la ejecución de este trabajo de investigación. Asimismo, se contó con la colaboración del Laboratorio de Referencia Virológica, en cuyos laboratorios se llevó a cabo el análisis de las muestras recolectadas.
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Recicbido: 10 de mayo del 22007. Aprobado: 4 de junio del 2007.
MSc. Maczy González Rincón. Cátedras de Hematología y Práctica Profesional de Hematología. Instituto de Investigaciones Clínicas. Facultad de Medicina. Universidad de Zulia. Estado de Zulia, Venezuela. e-mail: maczy@cantv.net