Descriptores DeCS: OMENTUM; EXTRACTOS DE TEJIDOS/análisis; FACTOR DE ANGIOGENESIS/análisis; PROTEINAS/análisis; COLESTEROL/análisis; TRIGLICERIDOS/análisis; ESTROMA DE LA CORNEA/ /irrigación sanguínea; NEOVASCULARIZACION FISIOLOGICA; CONEJOS.
La angiogénesis no es más que el desarrollo de la formación de nuevos vasos sanguíneos en un tejido como respuesta a un factor angiogénico.1 Este proceso resulta esencial en la cicatrización de las heridas y es activo en estados patológicos, incluyendo el crecimiento de tumores malignos.2 Variados son los tejidos normales que contienen una actividad angiogénica potente, donde muchos factores angiogénicos se liberan lentamente debido a su corto tiempo de vida y elevada difusión.1
Células no neoplásicas como los linfocitos y macrófagos liberan igualmente una sustancia con propiedades angiogénicas; lo mismo ocurre con el miocardio humano infartado.3
La aplicación del omentum en los pacientes diabéticos con enfermedades vasculares ha tenido muy buenos resultados4 que concuerdan con los obtenidos por otros investigadores.5 Estudios realizados en animales de experimentación han comprobado la efectividad de este material, cuya aplicación tópica en la superficie cerebral de perros ha favorecido la revascularización de las áreas afectadas.6,7
En los últimos años el omentum se ha venido utilizando como fuente de células mesoteliales en el recubrimiento del interior de las prótesis artificiales para aumentar su efectividad.8-10
A pesar de lo mucho que se ha trabajado con estos factores, son pocos los que han sido aislados y caracterizados, por lo que con el presente trabajo pretendemos comenzar el estudio bioquímico del omentum humano.
MÉTODOS
El omentum humano se obtuvo de cadáveres con menos de 6 horas de fallecidos, no diabéticos y cuya causa de muerte fuera conocida pero de origen no neoplásico, infeccioso, ni por enfermedades vasculares. El material se conserva a 4 °C en frascos limpios y tapados hasta su procesamiento, que no excedió a las 48 horas posteriores a su obtención.
Se utilizaron 4 g de cada uno de los 5 omentum, siguiendo la técnica descrita por Goldsmith y su grupo,1 previa preparación de un homogenato con todos ellos. El material se centrifugó y se obtuvieron 2 fracciones según se muestra en la figura 1. ]]>
La fracción líquida inferior se desecha y la superior, bien compacta, se homogeniza con una mezcla de cloroformo-metanol (2:1) durante 10 min a temperatura ambiente; se centrifuga durante 10 min a 4 °C y 200 g, para obtener 2 fases que se aíslan y se someten por separado a una corriente de nitrógeno en baño termostatado a 60 °C. Al extracto 1 que se evaporó completamente, lo denominamos no lipídico y al extracto 2, con una escasa evaporación de menos de 0,5 mL del volumen total, lo denominamos lipídico.Para probar la actividad angiogénica de los extractos obtenidos fueron utilizados 15 conejos Nueva Zelanda sanos y bajo régimen de luz, temperatura y alimentación normal, con un peso promedio de 2,5 kg, cumpliendo con los principios básicos establecidos por la Oficina Sanitaria Panamericana para la investigación con animales. Los conejos fueron divididos en 3 grupos de 5 animales cada uno donde al primero, considerado como control, se le inoculó buffer salina fosfato (PBS), al segundo el extracto 1 y al tercero el extracto 2. En todos los casos se hizo la inoculación de una dosis única de 15 mL del material de forma intraestromal en la córnea, con observaciones macroscópicas a los 2, 4, 6, 8 y 10 días posteriores a la inoculación. Al finalizar la experiencia se realizó la enucleación del ojo, el cual se colocó en un frasco que contenía formol al 10 %, para su posterior estudio histológico.
Paralelamente se determinó en los extractos en estudio, la concentración de proteínas por el método de Lowry,11 el colesterol por el conocido método del Abell12 y los triglicéridos por el método de Grafnetter.13 Estas técnicas resultan de un amplio uso en los laboratorios por su sencillez y valor diagnóstico.
ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS
El omentum es un material ampliamente utilizado en cirugía para la curación de las heridas por ser un material barato, asequible y que ha brindado buenos resultados en la clínica y al que se le ha sugerido una función inmunológica importante.14 Los valores de los parámetros bioquímicos estudiados pueden observarse en la tabla, donde encontramos niveles bajos de proteínas y muy elevados de lípidos fundamentalmente de los triglicéridos en el extracto 2, resultados éstos esperados por cuanto el omentum es un material muy rico en grasa.
TABLA. Valores de proteínas, colesterol y triglicéridos de los extractos estudiados. Valores de media y desviación estándar
| | ]]> Colesterol | | |
| Extracto 1 | | | |
| Extracto 2 | | | |
La córnea es la parte gruesa y transparente de la capa esclerocorneal que envuelve al ojo en su porción anterior y por ser totalmente avascular se utiliza mucho para demostrar la neovascularización. Aprovechando esta característica, es posible conocer las respuestas angiogénicas obtenidas por la inoculación de los extractos estudiados en relación con el control, observándose una vascularización mayor cuando se inoculó el extracto 2, resultado éste que concuerda con lo reportado por Goldsmith y su grupo1 pero trabajando con omentum de gato. ]]>
Los estudios histológicos con el uso de la coloración de hematoxilina-eosina confirman los resultados planteados anteriormente y se puede observar en la figura 2 la córnea que se mantiene avascular aun después de la inoculación del PBS, lo que confirma el valor de éste como sustancia control que no tiene efectos angiogénicos.
Subject headings: OMENTUM; TISSUE EXTRACTS/analysis; ANGIOGENESIS FACTOR/analysis; PROTEINS/analysis; CHOLESTEROL/analysis; TRIGLYCERIDES/analysis; CORNEAL STROMA/blood supply; NEOVASCULARIZATION, PHYSIOLOGIC; RABBITS.
Dra. Ana María Quintela. Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular. Calzada del Cerro #1551, Ciudad de La Habana, Cuba.