Efecto de los extractos de achirantes aspera sobre E. Coli

Effects of extracts of Achirantes Aspera on Uropathogen E. Coli

Dr. Guillermo Barreto Argilagos, Dra. Karely Alonso, Dra. Mileydis Estévez Cuadrado, Lic. Omitza Jiménez Espiñeira.

Universidad de Camagüey, Cuba

RESUMEN

El trabajo evalúa la acción de tinturas (30% y 80%) y decocción de A. aspera sobre la viabilidad y expresión fenotípica de la fimbria P en una cepa de E. coli aislada de un caso de pielonefritis Mediante el método de dobles diluciones se comprobó una acción bactericida de los extractos no dependiente del alcohol. La decocción no afectó la sensibilidad de E. coli. Tanto las tinturas como la decocción provocaron la inhibición fenotípica "in vitro" de la fimbria P.

DeCS: MEDICAMENTOS HERBARIOS CHINOS; INFECCIONES POR ESCHERICHIA COLI.

ABSTRACT

This work assesses the action of tinctures (30% and 80%) and dicoction of A. aspera on the viability and phenotypic expression of the fimbria P. in a smear of E.coli isolated of a pielonephritis case. Through the method of double dilutions it was proved a bactericide action of the extracts, non depending on alcohol. Dicoction did not affect the sensibility of E.coli. Both, either tinctures or dicoction caused the phenotypic inhibition "in vitro" of the fimbria P.

DeCS: CHINESE HERBAL; ESCHERICHIA COLI INFECTIONS.

E. coli constituye el patógeno oportunista más frecuente en las infecciones del tracto urinario (ITU).^1-3 La adherencia de E. coli a las células uroepiteliales constituyen el evento más importante en la patogénesis de la ITU.⁴ La adhesión al uroepitelio protege a las bacterias del lavado urinario incrementando así su capacidad de multiplicación a los tejidos renales.² Las fimbrias P predominan en las cepas causantes de infecciones del tracto urinario superior en niños y adultos.^1,3 Se han efectuado algunas experiencias con el objetivo de inhibir la expresión de ésta mediante el empleo de concentraciones subletales de antibióticos^5,6 y extractos de Lepidium virginicum.⁷

En los último años se ha producido un verdadero renacimiento de la denominada medicina natural. Las plantas constituyen una de sus líneas fundamentales. Una de las plantas más utilizadas en diversas latitudes para las afecciones renales es A aspera.⁸ El presente trabajo evalúa la acción de extractos de esta planta sobre la viabilidad de E. Coli uropatógena y la expresión fenotípica de la fimbria P.

METODO

Cepa: Se utilizó una cepa de E Coli aislada de un paciente adulto afectado de pielonefritis.

Se designó como RH. Se trata de una cepa hemolítica (hly) y con presencia de fimbria P, aspecto establecido previamente mediante hemoaglutinación manosa-resistente (HAMR).

Hasta el momento de su utilización se conservó en caldo Müeller-Hinton (OXOID, Gran Bretaña con glicerina al 30% y a una temperatura de - 20° C.

Medios de cultivo: En todas las experiencias se utilizaron dos medios de cultivo: agar Müeller-Hinton y caldo Müeller-Hinton, ambos de la firma OXOID (Gran Bretaña). En los casos que se suplementaron con los extractos evaluados, los mismos se prepararon con un 50% y un 75% del agua requerida al momento de esterilizarse. Luego de efectuada ésta, se completó el volumen faltante con decocción y tinturas, respectivamente.

Extractos: En todos los casos se utilizó la planta completa, seca y molida. El material vegetal se secó primero al aire (5 días) y luego en estufa con circulación de aire a 40° C (3 días).

Las principales características de los extractos utilizados se recogen en el siguiente cuadro:

Características de los extractos estudiados.

Forma de extracción	Material vegetal (g)	Solvente (mL)
Percolación con mezcla hidroalcohólica (30%)	100	100
]]> Percolación con mezcla hidroalcohólica (80%)	100	100
Decocción	10	100

Efecto de los extractos sobre la viabilidad de E. coli uropatógena:

Se estableció mediante dos técnicas.

a) Por difusión en agar Müeller-Hinton, mediante la utilización de discos de papel de filtro Whatman 3 impregnados en 20m L del extracto correspondiente. El procedimiento seguido fue el sugerido para antibiogramas convencionales. Se realizaron 10 réplicas.

Efecto de los extractos de A aspera sobre la expresión fenotípica de la fimbria P:

Se realizó acorde a lo sugerido para extractos de plantas. La presencia de la fimbria, luego del tratamiento correspondiente, se estableció mediante HAMR con hematíes humanos A. Se efectuaron 10 réplicas de cada ensayo.

Análisis estadístico.

En los casos en que se entendió pertinente se aplicó el análisis de varianza.

RESULTADOS Y DISCUSION

La cepa utilizada en el presente trabajo reunía las características más frecuentes en E. Coli responsable de pielonefritis: provoca hemólisis total en agar sangre del carnero y brinda HAMR frente a hematíes humanos A.^1-3

La acción de los extractos evaluados sobre la viabilidad de E. coli resultó variable y no coincidente en las dos técnicas utilizadas. De acuerdo al método de difusión en gel de agar, el pobre efecto bactericida de una de las tinturas (80%) está influenciado en cierta medida, por el alcohol (Tabla 1). Según esta técnica, los restantes extractos no afectan en lo absoluto la viabilidad de la cepa estudiada.

Tabla 1

Extractos	X (0 en mm)
Tintura (30% etanol)	0.0a
Tintura (80% etanol)	10.9cd
Decocción	0.0a
Controles
Mezcla hidroalcohólica (30%)	0.0a
Mezcla hidroalcohólica (80%)	8.3bc
ES ± 0.86	P<0.05

Sin embargo, de acuerdo al método de dobles diluciones, las dos tinturas ejercen una acción bactericida en las dos primeras dobles diluciones que no está influida por la presencia del alcohol (Tabla 2). Esta aparente contradicción se ha constatado en experiencias realizadas con extractos de L. virginicum L. Al parecer, los grupos funcionales (o grupo funcional) que afectan la viabilidad bacteriana no difunden (o lo hacen con gran dificultad) en el gel de agar. Se trata de un efecto al que no escapan algunos antibióticos, como es el caso de las polimixinas.

Tabla 2

Efecto de los extractos sobre la viabilidad (método de dobles diluciones).

Extractos	Diluciones
	1/2	]]> 1/4	1/8	1/16
Tintura (30%)	-	-	+	+
Tintura (80%)	-	]]> -	+	+
Decocción	+	+	+	+
Controles
Mezcla hidroalcohólica (30%)	]]> +	+	+	+
Mezcla hidroalcohólica (80%)	+	+	+	+
Leyenda: +: Crecimiento bacteriano ]]> -: Ausencia de crecimiento

La decocción no mostró acción sobre la viabilidad bacteriana en ninguno de los métodos ensayados. Ello puede ser consecuencia de que los grupos funcionales (o grupo funcional) responsables de esta actividad sean termolábiles o insolubles en agua. Los resultados reportados en la literatura consultada también son variados.

A los extractos realizados con hexano a partir de hojas secas y semillas se les atribuye una débil acción bactericida, en tanto que a los extractos clorofórmicos de semilla se les atribuye una mayor actividad bactericida frente a E. coli. Resultan coincidentes, no obstante, en cuanto a que las decocciones de raíz y el jugo de la planta entera se le atribuyen propiedades diuréticas.

Los tres extractos mostraron un efecto inhibitorio en la expresión fenotípica de la Fimbria P (Tabla 3). Se trata de un factor de colonización con una gran estabilidad y que se expresa en diversos medios de cultivo de uso convencional para el diagnóstico de E. coli. Un efecto inhibitorio semejante se ha obtenido frente a extractos de L. virginicum L. También se ha inhibido la expresión fenotípica de los factores F4 y F5 de E. coli enterotoxigénicas mediante contactos sucesivos con extractos de corteza de Eucaliptus.

Tabla 3

Acción inhibitoria sobre la fimbria P.

Extracto	HAMR
]]> Tintura (30%)	-
Tintura (80%)	-
Decocción	-
Control	+
Leyenda: HAMR: Hemoaglutinación manosa-resistente -: Ausencia de fimbria P ]]> +: Presencia de fimbria P

El resultado inhibitorio de estos extractos sobre la expresión fimbrial de P, unido a la acción diurética ya reportada constituyen los elementos de interés para la eliminación de E. coli en ITU, fundamentalmente en casos de pielonefritis.

El presente trabajo, por limitaciones de tiempo abordó el comportamiento de la planta completa en los ensayos efectuados. La repetición de éstos utilizando la planta por partes, contribuirá a una mejor comprensión de su acción sobre esta entidad bacteriana tan común en los casos de ITU.

CONCLUSIONES

Los resultados obtenidos permiten concluir que:

La técnica de dobles diluciones resulta más adecuada que la difusión en gel de agar para evaluar el efecto bactericida de extractos de A. aspera.

Las tinturas de A. aspera en mezclas hidroalcohólicas (30% y 80%) mostraron un efecto bactericida sobre E. coli no influido por el alcohol. La decocción no afectó su viabilidad.

Los tres extractos investigados inhiben la expresión fenotípica de la fimbria P. Esta propiedad, asociada a la acción diurética de la planta, contribuye a la eliminación de E. coli de los ITU. Fundamentalmente en los casos de pielonefritis, en los que la fimbria P constituye el principal factor de colonización.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Orskov I, Orskov F. E coli in extra-intestinal infections. J Hyg Camb 1985;95:151-575.

2. Orskov F, Orskov IE. E coli serotyping and disease in man and animals. Can J Microbiol 1992;38:699-704.

3. Blanco J, Alonso MP, González EA. Mecanismos de patogénesis de E coli causantes de infecciones extraintestinales. Enf Infec Microbiol 1991;9:640-651.

4. Korhonen TK, Holtthofer H. Tissue interaction of E coli adhesions. Anthonie van Laeuwenhoek 1988;54:411-420.

5. Padilla C, Vázquez M, Faúndez O. Effects of minimun inhibitory concentrations of the three antimicrobians on the growth cells and fimbriation of uropathogenic E coli. Rev LA Microbiol 1991;33:705-108.

6. Barreto G. E Coli uropatógenas. Revista Ciencias Médicas 1990;3:70.

7. Barreto G. Efecto de extractos de L Virginicum L sobre E coli uropatógena. Boletín Oficina Sanitaria 1996;5:4.