1025-028X 1025-028X S1025-028X2001000200003 Cuba Cuba 00 06 2001 00 06 2001 10 2 13 18

ARTICULOS ORIGINALES

 

Estudio serológico y de protección en ratones utilizando diferentes esquemas y dosis de VA-MENGOC-BC®

 

Serological and Protection Study in Mice using different vaccination schemes and Doses of VA-MENGOC-BC® Vaccine.

 

Juan F. Infante1, Jorge E. Mayo1, Sergio Sifontes2, Eslie Pedroso1, Enrique Muñoz1, Mildrey Fariñas1, Mercedes Gutiérrez1, Rolando Ochoa1, Juan C. Martínez1, Aida Annet1, María A.Camaraza1.

1. Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba. ]]> E-mail:jinfante@finlay.edu.cu

2. Centro de Bioactivos Químicos Universidad Central de Las Villas, Santa Clara, Cuba.

RESUMEN

La alta incidencia mundial de meningitis meningocócica por Neisseria meningitidis serogrupo B (N. meningitidis) movilizó los recursos de la ciencia hacia su enfrentamiento en un período corto de tiempo. Para el estudio de esta enfermedad fue imprescindible desarrollar modelos experimentales que posibilitaran caracterizar no sólo la capacidad inmunogénica y protectora de los candidatos vacunales, sino también la toxigenicidad del producto. El estudio basado en el modelo ratón Balb/c con la utilización de factores estimulantes de la virulencia, posibilitó el desarrollo experimental de la enfermedad. Consistió en la aplicación de diferentes esquemas de dosis y diluciones de la vacuna (1/2, 1/4, 1/8, 1/16) en solución salina fisiológica 0,85%. Se conformaron 15 grupos de ocho animales cada uno que previamente recibieron Dextrana Férrica (IMEFA) y mucina gástrica de cerdo 8% en un volumen total de 0,4 mL, y un grupo control al que le fue administrada la vacuna pura. Se empleó para el reto la cepa 385 de N. meningitidis con una concentración del inóculo de 107 UFC/mL. El esquema de vacunación contempló grupos vacunados con 1, 2, y 3 dosis a los 0,15 y 30 días. Se administraron 0,2 mL del
inóculo de N. meningitidis por vía intraperitoneal. Se determinó la dosis letal media (DL50), anticuerpos bactericidas, respuesta serológica por el método de ELISA y se calculó la protección conferida. Se aplicó el método de Log rank para la comparación de los tiempos de sobrevivencia y para el ensayo de ELISA se aplicó el método de superficie ajustada por SPLINE. Hemos demostrado la utilidad del biomodelo ratón Balb/c para comprobar la eficacia de la vacuna VA-MENGOC-BC®. Quedó demostrada la correlación entre los niveles de anticuerpos y la protección conferida por la vacuna, comprobándose además por los ensayos de reto. Se logró obtener una aproximación con respecto a los límites de eficacia de VA-MENGOC-BC® mediante diluciones consecutivas del producto en la línea de ratones Balb/c.

Palabras claves: Neisseria meningitidis B, VA-MENGOC-BC®, ratón, protección.

ABSTRACT

]]> The elevated world incidence of meningococcal meningitis due to Neisseria meningitidis B (N. meningitidis) has mobilized scientists in the search for a speedy solution to this problem. In order to study this disease, it is indispensable to develop experimental models which will enable the characterization of, not only the immunogenic and protective capability of vaccine candidates, but also the possible toxicity of the preparation. Consequently, a Balb/c mouse model was used, together with virulence stimulating factors, in order to achieve the experimental development of the disease. Different vaccine dose schedules and dilutions were used (1/2,1/4,1/8,1/16) in 0,85% physiologic saline solution. Fifteen groups of 8 animals each, which had previously received Ferric Dextran (IMEFA) and swine gastric mucin (8%) in a total volume of 0,4 mL and a control group which received the pure vaccine were formed. N. meningitidis Strain 385, was used for the challenge, with an inoculum concentration of 107 UFC/mL. The following vaccination schedule was observed: the groups
of animals were vaccinated with 1, 2 and 3 doses on days: 0, 15 and 30. A total of 0,2 mL of the N. meningitidis
inoculum was administered intraperitoneally. The half lethal dose (LD 50), bactericidal antibodies and serological
response using an ELISA assay were determined and the protection conferred by the prepartions were calculated. The Log rank method was used for comparing survival time. The SPLINE surface adjustment method was used in the case of the ELISA assay. The usefulness of the Balb/c mouse biomodel for comparing the efficacy of the VA-MENGOC-BC® vaccine was demonstrated. The correlation between the different levels of antibodies and the protection conferred by the vaccine was demonstrated and verified by challenge assays. An approximation of the efficacy limit of VA-MENGOC-BC® was obtained by means of consecutive dilutions of the product in the Balb/c mouse line.

Keywords: Neisseria meningitidis B, VA-MENGOC-BC®, mouse, protection.

Texto completo en pdf

REFERENCIAS

1. Dlawer A, Ala`Aldeen A. Vacccines against Neisseria meningitidis: A post, present and future. Biotecnología Aplicada 1996; 13:1-7.

2. Frasch C E, Tsai C M. Mocca L F. Outer membrane proteins of Neisseria Meningitidis: Structure and importance in meningococcal disease: Clin Invest Med 1986; (9):101-107.

3. Infante JF, Sierra GV, Campa HC, Acosta A, Azahares E, Pérez V, Muñoz E, et al. Las Ratas SPF como modelo experimental para la enfermedad meningocócica y la evaluación de la efectividad de VA-MENGOC-BC . II. Estudio microbiológico e inmunológico. VacciMonitor 1997; 6 (7):2-6.

4. Sifontes, R,S, Infante,BJ F, Capó V, Marrero O, Azahares E, Muñoz E, Sierra G, Campa C: Experimental infection by Haemophilus influenzae type b in inbred mice. Arch Med Res. 1996; 27(2):133-8.

5. Sotolongo P.F. Aspectos teórico-Prácticos sobre el diagnóstico, clasificación y valoración de la respuesta inmune. Ciudad de la Habana: Ediones Finlay; 1995.

6. Sifontes RS, Infante BJF, Pérez RP, Caro AE, Sierra GG, Campa HC. The hyperferremic mouse model for the evaluation of the effectiveness of VA-MENGOC-BC® against Neisseria meningitidis B clinical isolates. Arch Med Res 1997; 28(1):55-60.

7. Aleksakhnina N, Basnak`ian IA, Kolenko VM, Borovkova VM, Saraeva LV, Stukalova NV, et al. The antibody response of animals to a corpuscular meningococcal group B preparation with different methods of immunization. Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol 1992; (7-8):30-4.

8. Abbas AK, Lichtman AH, Pober JS. Inmunidad frente a los microorganismos. En: Inmunología Celular y Molecular. 2da ed. España, Madrid: Interamericana Mc Graw Hill; 1995; 369-376.

9. Devi Sj, Zollinger WD, Snoy PJ, Tsai JY Costantini P, Norelli F, Rappuoli R, Frasch CE. Preclinical evaluation of group B Neisseria meningitidis and Escherichia coli K92 capsular polysaccharide- protein conjugate vaccines in juvenile rhesus monkey. Infect Immun 1997; 65(3):1045-52.

10. Gu XX, Tsai CM. Preparation, characterization, and immunogenicity of meningococcal lipooligosaccharidederived oligosaccharide-protein conjugate. Infect Immun. 1993;61(5):1873-80.

11. Vella PP, Marburg S, Staub JM, Kniskern PJ, Miller W, Hagopian A et al. Immunogenicity of conjugate vaccines consisting of pneumococcal capsular polysaccharide types 6B, 14, 19F, and 23F and a meningococcal outer membrane protein complex Infect Immun 1992; 60(12):4977-83.

12. Lastre M, Batista A, Sierra G, Pérez O. Cuantificación de células formadoras de IgG totales y específicas por ELISPOT en Balb/c durante la respuesta primaria a VAMENGOC-BC. VaccciMonitor. 1995; 4(7):2-3.

13. Pérez O, Lastre M, Lapinet J, Pérez S, A Díaz O, M. Zayas VC. Batista A, Quintero P, Aguiar R F, Sánchez AJ. Sierra G. Inducement and duration of cellular response to VAMENGOC-BC® in babies and children. IV Latin American Congress of Immunology XII Mexican Congress of Immunology, 1996 March 3-7; Zacatecas, México.

14. Goldschneider I, Gotschlich E C. and Artenstein M S: Human Immunity to the meningococcus II. Developmen of natural immunity. J Exp Med 1969; 129:1327-1348.

15. Lissolo L, Maitre Wilmotte C, Dumas P, Mignon M, Danve B, Quentin Millet MJ: Evaluation of Transferrin-binding protein 2 within the transferrin-binding protein complex as a potential antigen for future meningococcal vaccines. Infect Immun 1995; 63(3):884-90.

16. Devi SJ, Karpas AB, Frasch CE: Binding diversity of monoclonal antibodies to alpha (2—8) polysialic acid conjugated to outer membrane vesicle via adipic acid dihydrazide: FEMS. Immunol Med Microbiol 1996;14(4):211-20.

17. Zollinger WD, Moran EE, Devi SJ, Frasch CE. Bactericidal antibody responses of juvenile rherus monkeys immunized with group B Neisseria meningitidis capsular polysaccharide-protein conjugate Vaccines. Infect Immun 1997;65(3):1053-60.

 

]]> 1996 13 1-7 1986 9 9 101-107 1997 6 7 7 2-6 1996 27 2 2 133-8 1995 1997 28 1 1 55-60 1992 7-8 7-8 30-4 1995 2da 369-376 1997 65 3 3 1045-52 1993 61 5 5 1873-80 1992 60 12 12 4977-83 1995 4 7 7 2-3 1996 March 3-7 Zacatecas 1969 129 1327-1348 1995 63 3 3 884-90 1996 14 4 4 211-20 1997 65 3 3 1053-60