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<journal-title><![CDATA[Revista Cubana de Plantas Medicinales]]></journal-title>
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<article-id>S1028-47961997000200008</article-id>
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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[to de Aloe barbadensis inyectable en la atenuación de la mielosupresión por ciclofosfamida en ratones]]></article-title>
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<institution><![CDATA[,Instituto de Medicina Militar Dr. Luis Díaz Soto  ]]></institution>
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<kwd lng="es"><![CDATA[MEDULA OSEA]]></kwd>
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<kwd lng="es"><![CDATA[FACTORES DE CRECIMIENTO DE CELULA HEMATOPOYETICA]]></kwd>
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<kwd lng="es"><![CDATA[EXTRACTOS VEGETALES]]></kwd>
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</front><body><![CDATA[ INSTITUTO SUPERIOR DE MEDICINA MILITAR. "Dr. LUIS D&Iacute;AZ SOTO".  <H2>  Extracto de <I>Aloe barbadensis</I> inyectable en la atenuaci&oacute;n  de la mielosupresi&oacute;n por ciclofosfamida en ratones</H2>  <I><A HREF="#autores">Lic. Jos&eacute; De la Paz Naranjo,<SUP>1</SUP> Dra.  Mar&iacute;a C. Sotolongo Baro,<SUP>2</SUP> Dr. Alfredo C&eacute;spedes  Valc&aacute;rcel,<SUP>3</SUP> T&eacute;c. Mar&iacute;a Cur&iacute; Hern&aacute;ndez,<SUP>4</SUP>  T&eacute;c. Mar&iacute;a E. Perdomo Paiba<SUP>4</SUP> y T&eacute;c. Roberto  Miranda Flores<SUP>4</SUP></A></I>  <H4>  RESUMEN</H4>  Se evalu&oacute; el efecto del <I>A. barbadensis</I> en dosis de 0,03;  0,10 y 0,18 mg/kg, en la atenuaci&oacute;n de la mielosupresi&oacute;n  por quimioterapia en ratones tratados con 200 mg/kg de ciclofosfamida 24  h antes del comienzo del tratamiento. A los 9 d&iacute;as de la primera  dosis de <I>Aloe barbadensis</I>, un significativo incremento ocurri&oacute;  en el recuento total de leucocitos comparado con el grupo control, luego,  &eacute;ste fue disminuyendo hasta alcanzar el d&iacute;a 14 cifras similares.  No fue significativo el efecto producido por el tratamiento en la hemoglobina  y hemat&oacute;crito. El contraste fue significativo en el recuento de  plaquetas a los 14 d&iacute;as. Se encontraron diferencias, adem&aacute;s,  en el recuento de reticulocitos y en la celularidad de la m&eacute;dula  &oacute;sea. Los resultados indican que el <I>A. barbadensis</I> administrado  en animales tratados con una dosis subletal de ciclofosfamida, causa un  marcado incremento de las c&eacute;lulas sangu&iacute;neas derivadas de  la m&eacute;dula &oacute;sea.        <P>Descriptores DeCS: MEDULA OSEA/efecto de droga; CICLOFOSFAMIDA/farmacolog&iacute;a;  CICLOFOSFAMIDA/administraci&oacute;n &amp; dosificaci&oacute;n; FACTORES  DE CRECIMIENTO DE CELULA HEMATOPOYETICA; ALOE; EXTRACTOS VEGETALES.        <P>El per&iacute;odo de vida relativamente corto de las c&eacute;lulas  sangu&iacute;neas maduras requiere su continuo reemplazo, un proceso denominado  hematopoyesis, adem&aacute;s, la producci&oacute;n de nuevas c&eacute;lulas  debe responder tanto a necesidades basales y situaciones de emergencia.  La regulaci&oacute;n de este proceso es compleja, e incluye interacci&oacute;n  c&eacute;lula-c&eacute;lula dentro del microambiente de la m&eacute;dula  &oacute;sea y tambi&eacute;n de factores de crecimiento hematopoy&eacute;ticos  y linfopoy&eacute;ticos. Estos factores de crecimiento producidos por c&eacute;lulas  de la m&eacute;dula y tejido perif&eacute;rico act&uacute;an en concentraciones  muy bajas y casi siempre sobre m&aacute;s de una l&iacute;nea celular.<SUP>1-4</SUP>        <P>En la actualidad, su utilizaci&oacute;n ha dado acceso a un nuevo campo  de investigaci&oacute;n, pues &eacute;stos permiten aumentar la frecuencia  y "escalado" de dosis de agentes quimioterap&eacute;uticos, que son conocidos  para conseguir mayor actividad antineopl&aacute;sica y un efecto t&oacute;xico  menor. Estos &uacute;ltimos acortan el nivel leucop&eacute;nico droga-inducido,  reducen as&iacute; el peligro de infecciones bacterianas y f&uacute;ngicas  a que est&aacute;n sometidos sus pacientes.<SUP>5-8</SUP>        <P>El <I>A. barbadensis</I> inyectable cubano ha sido estudiado por varios  investigadores y se le atribuye entre otras, acciones cicatrizantes, antiinflamatoria,  inhibidor del crecimiento tumoral, protector de las heridas contra las  infecciones y recientemente acci&oacute;n sobre la consolidaci&oacute;n  de fracturas. Es nuestro prop&oacute;sito evaluar su efecto farmacol&oacute;gico  en la atenuaci&oacute;n de la mielosupresi&oacute;n por quimioterapia.<SUP>9,10</SUP>  <H4>  M&Eacute;TODOS</H4>  Como animal de experimentaci&oacute;n fue utilizado el rat&oacute;n Balb/c,  hembra con 18 g de peso, procedente del CENPALAB. Los ratones fueron mantenidos  en una habitaci&oacute;n con temperatura, iluminaci&oacute;n, humedad y  alimentaci&oacute;n seg&uacute;n las normas establecidas para el mantenimiento  y utilizaci&oacute;n de los animales de laboratorio.<SUP>11</SUP>        <P>Los ratones fueron inyectados por v&iacute;a intraperitoneal con una  dosis subletal de 200 mg/kg de ciclofosfamida (genoxal. Laboratorios Funk,  s.a. Barcelona) en soluci&oacute;n salina fisiol&oacute;gica libre de pir&oacute;geno.  Trascurridas 24 h los ratones fueron divididos en 4 grupos de 20 animales  cada uno (n = 20), de forma aleatoria.<SUP>12</SUP>        <P>Grupo 1 (control). Se le administr&oacute; soluci&oacute;n salina fisiol&oacute;gica  en un volumen de 0,1 mL por v&iacute;a intramuscular.        <P>Grupos 2, 3 y 4 (<I>A. barbadensis</I>). Dosis 0,03; 0,10 y 0,18 mg/kg,  respectivamente en igual volumen y v&iacute;a de administraci&oacute;n.        <P>Comenzando este mismo d&iacute;a 1 el tratamiento con <I>A. barbadensis</I>  o soluci&oacute;n salina fisiol&oacute;gica seg&uacute;n el grupo de estudio,  una vez al d&iacute;a y durante 7 d&iacute;as.  <H4>  PAR&Aacute;METROS HEMATOL&Oacute;GICOS Y AN&Aacute;LISIS HISTOL&Oacute;GICO</H4>  Cuatro animales por grupos fueron sacrificados por dislocaci&oacute;n cervical  los d&iacute;as 2; 4; 7; 9 y 14, posterior a la administraci&oacute;n de  ciclofosfamida y comienzo del tratamiento, previa extracci&oacute;n de  sangre por el plexo orbitario para la determinaci&oacute;n de: hemoglobina,  hemat&oacute;crito, recuento total de leucocitos, recuento de plaquetas,  reticulocitos, absoluto de neutr&oacute;filos, monocitos, linfocitos y  eosin&oacute;filos, seg&uacute;n los m&eacute;todos convensionales.        <P>Inmediatamente despu&eacute;s del sacrificio se realiz&oacute; la disecci&oacute;n  del f&eacute;mur derecho y el bazo para el an&aacute;lisis histol&oacute;gico.  Las piezas se fijaron en formol neutro al 10 % y el f&eacute;mur, despu&eacute;s  de un per&iacute;odo de fijaci&oacute;n, fue decalcificado en &aacute;cido  n&iacute;trico al 5 %.        ]]></body>
<body><![CDATA[<P>La coloraci&oacute;n realizada fue la hematoxilina-eosina para ambas  piezas, las que fueron observadas en un microscopio Cals-Zeis con aumento  40 x.        <P>Para el diagn&oacute;stico histol&oacute;gico se tuvieron en cuenta  los par&aacute;metros siguientes:  <H6>  M&eacute;dula &oacute;sea</H6>  1. Celularidad  <UL>      <LI>  acelular</LI>        <LI>  hipocelular</LI>        <LI>  normocelular</LI>        <LI>  hipercelular.</LI>      </UL>  2. Relaci&oacute;n mieloide-eritroide        <P>3. Otros elementos  <UL>      <LI>  megacariocitos</LI>        <LI>  grasa</LI>        ]]></body>
<body><![CDATA[<LI>  edema</LI>        <LI>  hemorragia.</LI>      </UL>    <H6>  Bazo</H6>  1. Esplenomegalia  <UL>      <LI>  ligera</LI>        <LI>  moderada</LI>        <LI>  severa.</LI>      </UL>  2. Congesti&oacute;n  <UL>      <LI>  ligera</LI>        <LI>  moderada</LI>        <LI>  severa.</LI>      ]]></body>
<body><![CDATA[</UL>  3. N&oacute;dulos linf&aacute;ticos  <UL>      <LI>  peque&ntilde;os</LI>        <LI>  medianos</LI>        <LI>  gigantes.</LI>      </UL>    <H4>  AN&Aacute;LISIS DE LOS DATOS</H4>  Los datos obtenidos fueron introducidos en un ordenador y ranqueados. Para  comprobar la hip&oacute;tesis de las diferencias entre los grupos se realiz&oacute;  un <I>test</I> no param&eacute;trico de Kruskal-Wallis y para determinar  entre qu&eacute; grupos eran las diferencias, fue aplicada una compraci&oacute;n  m&uacute;ltiple no param&eacute;trica de rangos. El nivel de significaci&oacute;n  se estableci&oacute; en <FONT FACE="Symbol,Times">a</FONT> &lt; = 0,05.  <H4>  RESULTADOS</H4>  La administraci&oacute;n del extracto de <I>A. barbadensis</I> en dosis  de 0,03; 0,10 y 0,18 mg/kg de peso, una vez al d&iacute;a y durante 7 d&iacute;as,  no produjo cambios significativos en el recuento total de leucocitos los  d&iacute;as 2-4. Aun m&aacute;s, el extracto en estos ratones no alter&oacute;  la leucopenia inducida por quimioterapia, la cual ocurri&oacute; en los  4 grupos de estudio el d&iacute;a 4.        <P>Sin embargo, el "efecto rebote" en el recuento de leucocitos de estos  espec&iacute;menes ocurri&oacute; entre los d&iacute;as 6 y 9; siendo considerablemente  m&aacute;s pronunciado y de dosis dependiente en los animales que recibieron  el <I>Aloe barbadensis</I>, con un m&aacute;ximo de estimulaci&oacute;n  el d&iacute;a 9, luego de volver a cifras similares a los 14 d&iacute;as,  con ligera eosinofilia en los grupos que recibieron las dosis de 0,10 y  0,18 (grupos 3 y 4) de <I>Aloe barbadensis</I> (figuras 1 y 2).      <CENTER><A HREF="/img/revistas/pla/v2n2/f0108297.gif"><IMG SRC="/img/revistas/pla/v2n2/f0108297.gif" ALT="Figura 1" VSPACE=10 BORDER=1 HEIGHT=85 WIDTH=169></A></CENTER>        
<CENTER><B>FIGURA 1</B>. Total de leucocitos en los 4 grupos de estudio.</CENTER>        <CENTER><A HREF="/img/revistas/pla/v2n2/f0208297.gif"><IMG SRC="/img/revistas/pla/v2n2/f0208297.gif" ALT="Figura 2" VSPACE=10 BORDER=1 HEIGHT=126 WIDTH=209></A></CENTER>        
<CENTER><B>FIGURA 2.</B> Total de Eosin&oacute;filos en los 4 grupos de  estudio a los 14 d&iacute;as.</CENTER>          ]]></body>
<body><![CDATA[<P>En contraste con lo anterior, la hemoglobina y el hemat&oacute;crito  no sufrieron diferencias significativas entre los 4 grupos durante el experimento.        <P>En cuanto al recuento de reticulocitos no existieron diferencias entre  los grupos el d&iacute;a 2, pero s&iacute; a partir del d&iacute;a 4, las  que se mantuvieron durante el experimento con valores 4 veces mayores cuando  se compararon los 3 grupos, tratamiento (<I>A. barbadensis</I>) con el  control el d&iacute;a 9 (figura 3).      <CENTER><A HREF="/img/revistas/pla/v2n2/f0308297.gif"><IMG SRC="/img/revistas/pla/v2n2/f0308297.gif" ALT="Figura 3" VSPACE=10 BORDER=1 HEIGHT=99 WIDTH=195></A></CENTER>        
<CENTER><B>FIGURA 3.</B> Total de reticulositos en los 4 grupos de estudio.</CENTER>          <P>Los recuentos de plaquetas perif&eacute;ricas tambi&eacute;n sufrieron  cambios al realizar las comparaciones entre grupos, pero &eacute;stos s&oacute;lo  fueron significativos el d&iacute;a 14 donde se observ&oacute; un incremento  positivo en favor de <I>Aloe barbadensis</I> (figura 4).      <CENTER><A HREF="/img/revistas/pla/v2n2/f0408297.gif"><IMG SRC="/img/revistas/pla/v2n2/0408297.gif" ALT="Figura 4" VSPACE=10 BORDER=1 HEIGHT=120 WIDTH=194></A></CENTER>        
<CENTER><B>FIGURA 4.</B> Total de plaquetas en los 4 grupos de estudio  a los 14 d&iacute;as.</CENTER>          <P>En relaci&oacute;n con el an&aacute;lisis histol&oacute;gico de la m&eacute;dula  &oacute;sea y la influencia del <I>Aloe barbadensis</I> en &eacute;sta,  la tabla muestra no s&oacute;lo la r&aacute;pida recuperaci&oacute;n de  la celularidad en los grupos tratados con <I>Aloe barbadensis</I>, sino  adem&aacute;s el comportamiento de &eacute;sta el d&iacute;a 2 en el grupo  4 m&aacute;xima dosis (0,18 mg/kg) donde nunca fue acelular como en el  resto de los grupos.      <CENTER></CENTER>        <CENTER><B>TABLA.</B> <I>Histolog&iacute;a de la m&eacute;dula &oacute;sea  en los 4 grupos de estudio</I></CENTER>        ]]></body>
<body><![CDATA[<CENTER><I></I>&nbsp;</CENTER>        <CENTER><TABLE CELLPADDING=4 >  <TR>  <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">&nbsp;</TD>    <TD VALIGN=TOP COLSPAN="5" WIDTH="83%">      <CENTER>D&iacute;a del sacrificio</CENTER>  </TD>  </TR>    <TR>  <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Grupo&nbsp;</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>2</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>4</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>7</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>9</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>14</CENTER>  </TD>  </TR>    <TR>  <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">1</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Acelular con sangre sinosoidal</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Sangre sinosoidal y algunas c&eacute;lulas mieloides</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Hipocelular a normocelular</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>  </TR>    <TR>  <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">2</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Acelular con sangre sinosoidal</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      ]]></body>
<body><![CDATA[<CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>  </TR>    <TR>  <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">3</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Sangre sinosoidal y algunas c&eacute;lula mieloides</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>  </TR>    <TR>  <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">4</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">Hipocelular con sangre sinosoidal</TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      ]]></body>
<body><![CDATA[<CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>    <TD VALIGN=TOP WIDTH="17%">      <CENTER>Hipercelular PE</CENTER>  </TD>  </TR>  </TABLE></CENTER>        <CENTER>PE: Predominio eritroide.</CENTER>          <P>El bazo como &oacute;rgano hematopoy&eacute;tico importante, que produce  fundamentalmente linfocitos y monocitos, tambi&eacute;n fue estudiado por  nosotros. Los resultados revelan una esplenomegalia entre los d&iacute;as  7 y al 14, con un m&aacute;ximo el d&iacute;a 9.        <P>La histolog&iacute;a reporta tambi&eacute;n congesti&oacute;n moderada  en todos los casos, no as&iacute; sucedi&oacute; con la presencia de n&oacute;dulos  linf&aacute;ticos gigantes, importantes puntos de actividad linfoproliferativa,  donde el grupo 4 m&aacute;xima dosis de <I>A. barbadensis</I> mostr&oacute;  signos de estimulaci&oacute;n al ser comparado con el resto de los grupos.  <H4>  DISCUSI&Oacute;N</H4>  En la revisi&oacute;n de la literatura cient&iacute;fica realizada encontramos  el trabajo de O'rriely y Gamelli<SUP>13</SUP> sobre el uso de un factor  recombinante hematopoy&eacute;tico, administrado a ratones que hab&iacute;an  recibido una dosis alta de 5-fluoruracilo. En este trabajo ellos reportan  tambi&eacute;n incrementos significativos en el n&uacute;mero total de  leucocitos, pero con un m&aacute;ximo de estimulaci&oacute;n 2 d&iacute;as  antes que nosotros: no as&iacute; sucedi&oacute; en los estudios de <I>Melcaff</I>,<SUP>14</SUP>  donde s&oacute;lo encontr&oacute; un incremento de los neutrofilios sin  cambios en el total de leucocitos. Tambi&eacute;n se reportan trabajos  donde la administraci&oacute;n de estos factores provocan eosinofilia ligera,<SUP>1</SUP>  lo que coincide con nuestros resultados.        <P>El hecho de no existir diferencias en las variables hemoglobina y hemat&oacute;crito  entre los grupos durante el experimento es perfectamente explicable, si  tenemos en cuenta que nuestro ensayo s&oacute;lo dur&oacute; 14 d&iacute;as;  el tiempo de vida media de los hemat&iacute;es es de 120 d&iacute;as y  la ciclofosfamida s&oacute;lo lesiona preferentemente el comportamiento  de c&eacute;lulas progenitoras y precursores hematopoy&eacute;ticos, respetando  en teor&iacute;a las c&eacute;lulas sangu&iacute;neas maduras.<SUP>15</SUP>  Resultados similares a los de <I>Gamba-Vitalo</I> en un estudio donde fue  utilizada la ciclofosfamida como mielosupresor y un factor de crecimiento  hematopoy&eacute;tico.<SUP>12</SUP>        <P>En relaci&oacute;n con los recuentos de reticulocitos los resultados  nos hace pensar en un efecto favorable del <I>A. barbadensis</I> en la  eritropoyesis, teniendo en cuenta que el aumento de &eacute;stos en la  periferia se considera en cl&iacute;nica como una respuesta reforzada de  la m&eacute;dula sobre la producci&oacute;n de hemat&iacute;es.<SUP>16</SUP>        <P>En general se observa que el <I>A. barbadensis</I> es capaz de influir  sobre la proliferaci&oacute;n de leucocitos, eritrocitos y plaquetas. Parece  ser que este producto act&uacute;a sobre c&eacute;lulas progenitoras en  estadios tempranos directa o indirectamente, y contribuye al crecimiento  de colonias formadoras de todas estas estirpes celulares; aunque este estudio  no permite determinar exactamente el mecanismo de acci&oacute;n del <I>A.  barbadensis</I> sobre la hematopoyesis. Es necesario por lo tanto continuar  las investigaciones en este sentido.  <H4>  CONCLUSIONES</H4>  El <I>A. barbadensis</I> en dosis de 0,03; 0,10 y 0,18 mg/kg, administrado  una vez al d&iacute;a durante 7 d&iacute;as, a ratones tratados con ciclofosfamida  provoca un incremento en las c&eacute;lulas sangu&iacute;neas derivadas  de la m&eacute;dula &oacute;sea.  <H4>  REFERENCIAS BIBLIOGR&Aacute;FICAS</H4>    <OL>      <!-- ref --><LI>  Hillman RS. Agentes hematopoy&eacute;ticos: factores de crecimiento, minerales  y vitaminas. En: Las bases farmacol&oacute;gicas de la terap&eacute;utica.  8 ed. 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Avenida Monumental y Carretera de Asilo, Habana  del Este, cp. 11700, Ciudad de La Habana, Cuba.        <P><SUP>1</SUP>&nbsp;<A NAME="autores"></A>Licenciado en Bioqu&iacute;mica.  Aspirante a Investigador.      <BR><SUP>2</SUP> Especialista de I Grado en Anatom&iacute;a Patol&oacute;gica.  Aspirante a Investigador.      <BR><SUP>3</SUP> Especialista de I Grado en Farmacolog&iacute;a. Instructor.      <BR><SUP>4</SUP> T&eacute;cnica(o) en Investigaciones.          ]]></body><back>
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