Se realizó un estudio farmacognóstico y farmacológico del Nerium oleander L. con el objetivo de determinar la presencia de metabolitos activos en la planta y corroborar en un modelo de corazón aislado de cobayo (Langerdorff) el efecto que como cardiotónico se le atribuye. Se encontró la presencia de glicósidos cardiotónicos y se produjo un aumento (p < 0,05) de la contractilidad del músculo cardíaco con el uso de un extracto fluido con menstruo hidroalcohólico al 30 % a dosis de 0,71 mg/g y 1,39 mg/g de peso del corazón, sin embargo, la dosis de 5,13 mg/g provocó arritmias. El flujo coronario no varió.
Descriptores DeCS: OLEANDER/farmacología; CORAZON/efectos de drogas; GLICOSIDOS; COBAYOS.
Summary
Authors performed a pharmacological and pharmacognosical study of Nerium oleander L. to assess presence of active metabolites in the plant, and in a guinea pig isolated heart (langerdoff) and to corroborate its cardiotonic effect. We found presence of cardiotonic glycosides. There was an increase P < 0.05) cardiac muscle contractility using fluid extract with hydroalcoholic menstrum (30 %) in doses of 0,71 mg/g and 1,39 mg/g of heart weight. However, dose of 5,13 mg/g provoked arrthytmias. Coronary flux was unchangeable.
Las enfermedades cardiovasculares constituyen un problema de salud, ha sido la Insuficiencia Cardíaca una de las más frecuentes; lo que ha motivado la búsqueda de plantas que contribuyan a su tratamiento. Al Nerium oleander L. se le atribuyen propiedades como carditónico1-3 sin embargo, comparado con la Digital ha sido poco estudiado. En el trabajo se hace una caracterización de la droga cruda y del extracto fluido y se ensaya el efecto de este sobre un modelo de corazón aislado de mamífero.
Métodos
Material vegetal
La planta analizada Nerium oleander L. se colectó en los alrededores del ISMM "Dr. Luis Díaz Soto", de La Habana del Este en Ciudad de La Habana, durante los meses de noviembre a marzo.
La parte utilizada fueron las hojas del cultivar flores rosadas, las que se colectaron de forma manual. Las hojas fueron sometidas a secado en estufa con recirculación de aire a una temperatura de 37-40 °C durante 48 h. El material secado fue fragmentado con molino manual, y se obtuvo un producto de partículas gruesas. En la etapa de recolección de las hojas, la planta se encontraba en estadio vegetativo, y fue previamente identificada en el Herbario del Jardín Botánico Nacional con el número HAJB 72070.
Tamizaje fitoquímico
Se realizó siguiendo el método descrito por el Departamento de Farmacognosia de la Universidad Médica de Budapest, introducido en nuestro país por el Departamento de Farmacognosia del Instituto de Farmacia y Alimentos de la Universidad de La Habana.
Estudio farmacognóstico
Para realizar el estudio de la droga cruda se siguieron las determinaciones descritas en la NRSP 309.4
Estudio del extracto fluido
La preparación del producto fue elaborado con el material vegetal seco y molinado y se empleó el método de percolación en un solo paso, como se describe en la NRSP 311.5
Análisis del extracto fluido
El análisis del producto terminado se realizó según la NRSP 312.6
Estudio farmacológico
En los experimentos se utilizaron cobayos Hartley, machos con peso entre 300 y 400 g procedentes del CENPALAB, y fueron escogidos al azar mediante tabla de números aleatorios del vivario del ISMM "Dr. Luis Díaz Soto". Los animales se sacrificaron con un golpe en la región cervical. El corazón se extrajo, y se depositó en placa Petri con solución Krebs-Henseleit modificada, y burbujeada con carbógeno. Una vez terminado el proceso de extracción, el corazón se conectó con una cánula a un sistema de perfusión de Langerdorff con una columna de solución de 60 cm de altura. Todos los experimentos se realizaron a 37 °C. Se fijó un hilo de seda 6,0 al ápex del corazón; el órgano se dejó perfundir durante 60 min en solución para su estabilización.7 Para el registro de actividad contráctil se fijó el extremo libre del hilo a un transductor fuerza desplazamiento S8-IT (Nihon-Kohden), las señales fueron enviadas a un amplificador RP 3 (Nihon Kohden) y recogidas en un polígrafo (Nihon-Kohden) de 8 canales RM-150, y se recogió en papel mílimetrado. La actividad contráctil del miocardio se midió ajustando la tensión de reposo al máximo de la relación longitud/tensión. Después de estabilizado el órgano se tomó un registro control de los valores basales de contractilidad y se midió el flujo coronario, se recogió el goteo del órgano mediante una probeta graduada. Se realizó un registro y se utilizó el solvente hidroalcohólico (etanol -agua al 30 %) en un volumen de 100 mL. La droga a probar consistió en el extracto fluido con menstruo hidroalcohólico al 30 % de Nerium oleander L.
Se utilizaron las siguientes dosis: 0,52 mg, 1,04 mg y 4,15 mg que equivalen a 0,71 mg/g, 1,30 mg/g y 5,13 mg/g de peso del corazón7 las que fueron administradas directamente a través de un catéter a la cánula de perfusión. Para la selección de las dosis se tuvo en cuenta experimentos previos realizados con el extracto. Al administrar cada dosis de la droga en un volumen de 100 m L se midieron los valores de contractilidad y flujo coronario durante 5 min. Los registros se efectuaron siguiendo el siguiente orden:
]]>
Basal.
Control (etanol 30 %).
Estabilización.
Primera dosis del extracto. 3 lavados sucesivos.
Estabilización.
Basal.
Segunda dosis del extracto, 3 lavados sucesivos.
Estabilización.
Basal.
Tercera dosis del extracto.
]]>
Los datos fueron introducidos en un ordenador, almacenados en una base de datos y procesados mediante un paquete estadístico SPSS.
Después de rechazada la normalidad de los datos y no ser homogéneas sus varianzas se realizó un test de Kurskal-Wallis y un test a posteriori (Bonferroni). Se utilizó como criterio de significación un a = 0,05. En todas las series experimentales la muestra fue igual a 8 (n= 8).
Resultados
Tamizaje fitoquímico
Los resultados se muestran en la tabla 1.
Tabla 1. Resultados del tamizaje fitoquímico del Nerium oleander (adelfa) cultivar flores rosadas
Extracto Etéreo
Ensayos
Metabolitos
T
H
F
Dragendorff
Alcaloides
+++
]]>
++
++
Baljet
Lactonas
++
++
++
Borntrager
Quinonas
-
-
-
Liebermann Burchard
Triterpenos y esteroides
+++
+++
]]>
+++
Sudan III
Aceites/Grasas
-
-
-
Extracto etanólico directo
Ninhidrina
Aminas
++
++
++
Fehling
Azúcares reductores
+++
+++
+++
Baljet
Lactonas
]]>
+
+
+
FeC13/SALINA
Fenoles y Taninos
-
-
+/-
Flavonoides
-
+
Selivoflo
Saponinas
-
-
]]>
-
Rosenheim
Leucoantocianinas
+/-
-
+
Extracto etanólico indirecto
+/-
Dragendorff
Alcaloides
++
++
+
Liebermann-Burchard
Triterpenos y esteroides
++
++
]]>
++
Borntrager
Quinonas
-
-
-
Shinoda
Flavonoides
-
-
+/-
Kedde
Glicósidos cardiotónicos
++
++
++
Extracto acuoso
Dragendorff
Alcaloides
]]>
-
-
-
Fehling
Azúcares reductores
++
+
+++
FeC13/SALINA
Fenoles y taninos
-
-
-
Prueba del frío
Mucílagos
-
]]>
-
-
Estudio farmacognóstico
El estudio de la droga cruda no mostró variaciones cualitativas entre las diferentes colectas. Los resultados se observan en la tabla 2.
Tabla 2. Resultados del análisis de la droga cruda Nerium oleander L.
Requisitos
Requisitos
Cenizas %
Cenizas %
Cenizas %
Contenido
Determinac. %
Cosechas
Macromorf.
Micromorf.
Totales
S/Agua
I/Ácido
Humedad %
ST. SOL.
1
Responde
Responde
]]>
6,37
1,85
0,05
14,0
22,16
2
Responde
Responde
8,55
2,90
0,08
12,0
25,11
3
Responde
Responde
]]>
6,99
2,45
0,04
13,0
23,23
4
Responde
Responde
7,25
1,91
0,04
13,0
29,93
5
Responde
Responde
]]>
6,94
1,86
0,40
9,4
20,86
La Descripción Macromorfológica responde a la siguiente descripción:
Hojas cartáceas, lampiñas estrechamente oblongas, de 7 a estas o verticilidas en grupos de 3, al ápice acuminado o agudo.En el caso de la Descripción Micromorfológica se pudo observar las estructuras aquí descritas: Cutícula gruesa, 2 capas de células epidérmicas en la haz, 2 capas de parénquima en empalizada que abarcan 1/3 del mesófilo. Parénquima esponjoso laxo. Estomas incluidos en criptas con abundantes pelos adaxialmente. Abundantes cristales de oxalato de calcio en forma de drusas en todo el mesófilo. Haces vasculares colaterales alargados que abarcan todo el mesófilo. Nervio medio prominente en el envés.
Estudio del extracto fluido
Se muestran los valores de los ensayos realizados a los diferentes lotes analizados en la tabla 3.
Tabla 3. Resultados de los extractos fluidos
Requisitos
Índice
Densidad
Análisis
Sólidos o
Contenid
Identific.
Lotes .
Organolept
]]>
pH
Refracc.
Relativa
Capilar
Totales
Alcohólico
Glic. Card.
1
Responde
5,9
1,383
1,026
]]>
Responde
16,50 %
19,5 %
Responde
2
Responde
6,7
1,362
1,022
Responde
11,70 %
19,5 %
]]>
Responde
3
Responde
6,0
1,358
1,007
Responde
9,14 %
27,0 %
Responde
4
Responde
6,0
1,362
]]>
1,006
Responde
10,15 %
21,3 %
Responde
5
Responde
6,1
1,358
1,005
Responde
7,87 %
]]>
23,7 %
Responde
Referente a las Características Organolépticas, estas responden a:
Líquido transparente de color pardo verdoso y olor característico.Mientras que el análisis Capilar responde a: Imagen capilar vivamente coloreada, con un corrimiento alto, presentando una franja irregularmente dentada, la subfranja, banda y subbanda no se definen. Al exponer la imagen capilar a los vapores de amoníaco se observó una intensificación del color amarillo, a la luz ultravioleta no se observaron diferencias en el capilarograma.Responde para la prueba de identificación de glicósidos cardiotónicos al ensayo de Kedde.
Estudio farmacológico
El extracto fluido de Nerium oleander L. aumentó de forma significativa (p < 0,05) la contractilidad del corazón aislado de cobayo con las dosis de 0,71 mg/g y 1,30 mg/g; y se incrementó en 1,12 g y 0,96 g respectivamente cuando se comparó con el valor basal y menstruo, sin embargo, la dosis de 5,13 mg/g provocó arritmias en todos los experimentos. El menstruo utilizado como control no modificó significativamente la variable con respecto al valor basal. Los valores medios, desviación estándar y la magnitud de las diferencias se exponen en la tabla 4.
Tabla 4. Valores de contractilidad en el corazón aislado de cobayo
Contractilidad
(g)
Media desviación
Variación de la
Significación (mg/g)
Dosis
]]>
n
standard
contractilidad (g)
Estadística
Basal
8
2,36
1,05
- -
Etanol
30 %
8
2,21
]]>
0,90
-0,153 n/s
0,71
8
3,48
1,26
0,21 *
1,30
8
3,33
1,38
0,96 **
5,13
]]>
8
-
Arritmias
n/s No significativo. * Significativo con respecto al control y al valor basal. ** Significativo con respecto al control, valor basal, y dosis anterior.
El flujo coronario no varió de forma significativa con el uso de las dosis más bajas utilizadas (p > 0,05), ni cuando se administró etanol al 30 %, con la dosis mayor no fue posible medirlo, debido a la arritmia (tabla 5).
Tabla 5. Valores del flujo coronario en el corazón aislado de cobayo
]]>
Dosis
Flujo coronario mL/min.
Signf.
(mg/g)
n
Media
Desviación
Estad.
Basal
8
]]>
3,96
3,58
n/s
Etanol
Al 30 %
8
3,58
3,28
n/s
0,71
8
3,12
2,22
]]>
n/s
1,30
8
3,28
2,26
n/s
5,13
8
Arritmias
n/s No significativo
Discusión
Tamizaje fitoquímico
Según los resultados obtenidos del tamizaje fitoquímico se pudo comprobar la presencia de glicósidos cardiotónicos, que tienen especial interés para el trabajo pues se le atribuye la acción encontrada en el Nerium oleander L.8 Es importante señalar que la planta posee una cantidad de alcaloides que pudieran contribuir a su toxicidad.9
No se encontraron diferencias cualitativas entre los resultados del tamizaje de las diferentes partes de la planta, lo que constituye una ventaja para su uso pues aumenta el rendimiento y facilita su recolección. ]]>
El tamizaje, coincidió con el de Robaina y colaboradores10 excepto en que estos investigadores no refirieron haber encontrado alcaloides ni aminas y sí la existencia de saponinas, lo que pudiera estar determinado porque el fraccionamiento utilizado en el presente estudio, explora la presencia de éstas en el extracto alcohólico y no en el acuoso, donde pudiera también encontrarse.
Droga cruda
Por los resultados obtenidos de los lotes analizados se proponen los rangos de valores siguientes: Cenizas totales Máximo 9,0 %
Cenizas solubles en agua Máximo 3,0 %
Cenizas insolubles en ácido Máximo 1,0 %
Contenido de humedad (Gravimétrico) Máximo 15,0 %
Determinación sustancias solubles Mínimo 15,0 %
Las descripciones macro y micromorfológicas responden a las características descritas en los resultados.
Extracto fluido
Si se tiene en cuenta los lotes de extracto fluido estudiados se infieren los siguientes rangos de valores:
pH De 5,9 - 6,9
Índice de refracción De 1,358 - 1,383
Densidad relativa De 1,001 - 1,030
Sólidos totales Mínimo 7 %
Contenido alcohólico Mínimo 15 % ]]>
Las características organolépticas, análisis capilar e identificación de los glicósidos cardiotónicos cumplen en cada caso con lo descrito en el acápite anterior.
Estudio farmacológico
El Nerium oleander L. es una planta muy estudiada desde el punto de vista toxicológico.11-21 Su composición y estructura química se ha informado en numerosos trabajos,8,22,23 aunque en relación a la Digital sus propiedades farmacológicas (incluso sobre el corazón) están poco investigadas.
En el trabajo se observó que el extracto fluido de Nerium oleander L. con menstruo hidroalcohólico al 30 %, incrementó de forma significativa la contractilidad del corazón aislado de cobayo, lo que corrobora la acción que como cardiotónico se le atribuye a la planta y los resultados obtenidos en el tamizaje fitoquímico del extracto.
Las dosis menores incrementaron la respuesta contráctil y la mayor provocó arritmias. El menstruo etanólico al 30 % utilizado como control, no modificó significativamente la contractilidad en el modelo estudiado cuando se comparó con el valor basal, por lo tanto, la acción puede atribuirse a los metabolitos activos del vegetal presentes en el extracto y no al menstruo. El flujo coronario no fue modificado en las dosis empleadas, hecho, que ocurrió de manera similar con el etanol al 30 %. Aunque no se encontraron informes en la literatura revisada donde se evalúa experimentalmente de forma similar la acción cardiotónica de esta especie, sin embargo, Carvajal y colaboradores informaron un aumento significativo de la contractilidad en la aurícula aislada de cobayo cuando utilizaron una decocción de las hojas de la especie.24
La planta posee en su composición glicósidos cardiotónicos lo que hace atribuir el efecto inotropo positivo a éstos. Algunos autores25 han estudiado el efecto de la ouabaína sobre el corazón aislado de cobayo y conejo, y han utilizado la técnica de Langerdorff, y han encontrado un aumento de la contractilidad del órgano sin incrementos del flujo coronario lo que coincide con los resultados obtenidos en esta investigación.
Conclusiones
El tamizaje realizado al Nerium oleander L. demostró la presencia de glicósidos cardiotónicos y de alcaloides, que pudieran ser los responsables de la acción farmacológica y la toxicidad de la especie.
El extracto fluido de Nerium oleander L. elaborado con un menstruo hidroalcohólico al 30 % en dosis de 0,71 mg/g y 1,30 mg/g de peso de corazón aumentó de forma significativa la contractilidad del corazón aislado de cobayo, y no modificaron el flujo coronario, la dosis de 5,13 mg/g provocó arritmias.
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1 Especialista de I Grado en Farmacología. 2 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. ]]>4 ed19722 ed843-8461988693-69419921992199219881-1291993841111627-321983253-961985597-102198935295-7199144347-501990120596-7199436114719938244121-219923466549199515519192121-51996109111-13199612625251085-981995411160-2199575161992253-51983315-2219913699729-34