Lic. Alicia Lagarto Parra,1 Dra. Viviana Bueno Pavón,2 MSc. Raiza Vega Montalvo,3 Téc. Isbel Guerra Sardiñas4 y Téc Yamile Vega Hurtado4
El extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch ha mostrado, en ensayos preliminares, propiedades anestésicas, analgésicas y antiinflamatorias, características que lo hacen atractivo para su uso en estomatología, de ahí la importancia de conocer el potencial tóxico de este extracto en ensayos preclínicos. Se evaluó el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch en un ensayo de toxicidad aguda oral en ratas e irritación de mucosa oral en hámster a dosis repetidas. Se emplearon ratas Wistar hembras (200-300 g) a las cuales se les administró la dosis de 1 000 mg/kg de peso por vía oral en dosis única y hámster Sirios Dorados hembras (50- 60 g) los cuales fueron administrados con el extracto oleoso al 35 % en la bolsa gular derecha durante 14 días de tratamiento. No se encontró mortalidad para el ensayo de toxicidad aguda y se obtuvo un índice de irritación sobre mucosa oral de 10,25 por lo que el extracto oleoso se clasificó como moderadamente irritante.
DeCS: PLANTAS MEDICINALES; MATERIALES DENTALES; MUCOSA BUCAL; TEST DE TOXICIDAD AGUDA.
Melanthera deltoidea Mich es una planta medicinal conocida popularmente como botón de plata o cabecita de muerto. De esta se obtiene un extracto oleoso al que se le atribuyen propiedades anestésicas, analgésicas y antiinflamtorias y se espera, por tanto, que se pueda emplear en preparaciones dentales con buenos resultados.
Por todo lo anterior, tiene especial importancia conocer el potencial tóxico de este extracto, de ahí que los autores se propusieran evaluarlo en ensayos de toxicidad aguda oral y de irritación sobre la mucosa oral según lo exigen las normas internacionales.1
Se empleó el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch lote 990406 sublote-1, obtenido a partir de las raíces secas y molidas de la planta, en el departamento Productos Naturales del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) de La Habana, Cuba.
El ensayo se llevó a cabo según las normas de evaluación biológica a materiales dentales.1 Se emplearon ratas Wistar hembras de masa corporal comprendida entre 200-300 g, procedentes de la colonia del departamento Investigaciones Biológicas (CIDEM), los cuales permanecieron en condiciones de temperatura controlada de 22 ± 2 ºC y ciclo luz- oscuridad de 12/12 h. La alimentación consistió en pelotillas de ratonina proveniente del Centro para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB) y agua a voluntad.
]]> A un grupo de 10 animales, previa ayuna de 18 horas, se le administro la sustancia de ensayo a la dosis de 1 000 mg/kg ó 20 mL/kg (dosis que recomienda la norma empleada), para lo cual se disolvió el extracto al 5 % en aceite de oliva. La administración de la sustancia se realizó por vía oral mediante cánula intragástrica.Se registraron el peso de los animales y los síntomas mostrados tras la administración. Los primeros, semanalmente y los segundos, diariamente. Todos los animales permanecieron en observación durante 14 días, al cabo de los cuales se realizó la necropsia y la observación macroscópicas de órganos y tejidos fundamentales: corazón, riñón, hígado, bazo, ovarios, pulmón, timo, estómago y cerebro. Los órganos fueron fijados en formol al 10 % y procesados rutinariamente para el examen histopatológico.
La norma empleada para conducir el estudio establece que si al finalizar el período experimental muere menos del 50 % de los animales el material ensayado pasa satisfactoriamente la prueba de toxicidad aguda, de lo contrario (si muere el 50 % o más) el material ensayado no pasa la prueba.1
Se emplearon para este ensayo hámster Dorados Sirios hembras, con peso entre 50-60 g procedentes del CENPALAB, los cuales permanecieron en cuarentena durante 7 días antes de comenzar el estudio. Se mantuvieron en una sala con temperatura controlada de 22 ± 2ºC y ciclo luz- oscuridad 12/12 horas. La alimentación consistió en dieta standard para ratas y ratones proveniente de CENPALAB y agua a voluntad.
Se formaron 2 grupos de 5 animales cada uno, un grupo tratado con la sustancia de prueba y un grupo control. La sustancia de ensayo se administró al 35 % en aceite de oliva, el grupo control recibió el vehículo empleado para administrar la sustancia de prueba como tratamiento. Después de examinar macroscópicamente la bolsa gular de cada animal, se colocaron pelotillas de algodón en la bolsa derecha embebidos en 0,5 mL de la sustancia de ensayo o vehículo, después se colocó alrededor del cuello del animal un collar de 3,4 cm de ancho con el objetivo de evitar la expulsión de las pelotillas y garantizar la respiración y los movimientos normales del animal.
Transcurridas 24 h se retiró el collar a cada animal y se lavó la bolsa con NaCl al 0,9 %, se observaron los posibles daños y se registró cualquier anormalidad. Este procedimiento se repitió cada 24 h durante 14 días.
La apariencia de los buches se describió determinando el grado de irritación para eritema de acuerdo a la siguiente escala: no eritema: 0, muy ligero eritema:,1 moderado eritema: 2, eritema bien definido: 3 y severo eritema: 4.2
Transcurridas 24 h de la última administración se examinaron los buches macroscópicamente y se sacrificaron los animales bajo atmósfera de éter. Las bolsas fueron extraídas y fijadas en formaldehído 10 %, procesadas rutinariamente para posteriormente realizar el examen histológico. La evaluación microscópica se realizó teniendo en cuenta los parámetros establecidos por la norma ISO/DIS 10993-102 y se determinó el índice de irritación. La sustancia de prueba se clasificó de acuerdo a la siguiente escala: no irritante 0, irritante mínimo 1-4, irritante medio 5-8, irritante moderado 9-11 e irritante severo 12-16.2
Tras la dosis administrada (1 000 mg/kg) se observó sedación y somnolencia, lo cual desapareció a las 6 horas aproximadamente después de la administración, no se presentó mortalidad, ni decremento en el peso corporal durante el período de observación, cuyo comportamiento se puede apreciar en la figura.
Fig. Comportamiento del peso corporal durante el ensayo de toxicidad aguda.
En la necropsia realizada no se encontraron alteraciones patológicas en el análisis macroscópico de los órganos. Según el análisis histopatológico se apreciaron ligeras alteraciones vasculares del tipo congestión/hemorragia las cuales generalmente se deben a la manipulación durante el sacrificio. Se observaron 2 casos de hiperqueratosis en la región no glandular del estómago.
Se produjo la muerte de 2 animales durante el ensayo, uno correspondiente al grupo tratado con el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch el día 11 y el otro al grupo control el día 7, ambos debido a accidentes en la manipulación.
Las observaciones macroscópicas de mucosa oral no reflejaron presencia de eritema, pero sí de inflamación en la zona de la bolsa tratada con el extracto. El comportamiento del peso corporal aparece reflejado en la tabla, donde se puede apreciar el menor incremento de peso en el grupo tratado con el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch. Esta diferencia fue significativa al compararla con el incremento de peso mostrado por el grupo control.
Tabla . Comportamiento del peso corporal durante el ensayo de irritación de mucosa oral
| Grupo | ]]> Inicio (g) | 7mo. día (g) | Final (g) | Incremento (g) |
| Tratados | 58,60 ± 4,83 | 59,40 ± 5,13 | 65,25 ± 3,8 | 6,25 ± 3,0* |
| Control | 57,40 ± 5,32 | 72,00 ± 7,5 | ]]> 79,50 ± 7,59 | 24,0 ± 10,49 |
* Diferencias significativas respecto al grupo control p < 0,05.
De acuerdo con el análisis histopatológico realizado a la mucosa oral se observó marcado engrosamiento epitelial, incremento leucocitario, congestión, edema, metaplasia a nivel del tejido cartilaginoso y necrosis extensa en todos los animales del grupo tratado con el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch. Los animales del grupo control no presentaron alteraciones.
El índice de irritación obtenido para el grupo tratado con el extracto fue de 10,25 y de 0,25 para el grupo control, clasificándose el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch como moderadamente tóxico para el ensayo de mucosa oral en hámsters.
El ensayo de toxicidad aguda no provocó mortalidad a la dosis de 1 000 mg/kg, pero durante la primera semana del período experimental no se observó incremento del peso corporal, lo cual pudiera ser indicativo de un efecto tóxico, aunque durante la segunda mitad del período experimental si se produjo incremento de dicho indicador. Los hallazgos histopatológicos encontrados en la zona no glandular del estómago pueden deberse a una ligera irritación gástrica. Esto carece de significación ya que la incidencia fue baja (20 %) y el extracto no va a ser administrado por vía oral en su uso propuesto.
La administración del extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch sobre la mucosa oral de hámster produjo un efecto tóxico demostrado por la inferior ganancia de peso respecto al grupo control durante los 14 días del período experimental. Además de las alteraciones histopatológicas encontradas en la mucosa oral las cuales fueron marcadas en el grupo tratado con el extracto, lo cual resultó en un índice de irritación superior a 9 clasificándose el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch como moderadamente irritante.
El índice de irritación sobre mucosa oral obtenido para el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch se encuentra cercano a 9 (10,25), siendo este el límite entre los productos considerados aptos para el empleo en humanos.2 Por tanto de acuerdo a los efectos farmacológicos que se encuentren en los estudios preclínicos se debe considerar disminuir la concentración del extracto oleoso en aras de disminuir la toxicidad encontrada a este nivel.
Publicaciones anteriores indican que la planta completa de Melanthera deltoidea Mitch produjo efectos tóxicos sobre el ganado al ingerir la planta. La prueba biológica realizada en ratones por inoculación del extracto acuoso del forraje y de los contenidos rumiantes produjo la muerte rápida. En la necropsia practicada se encontró congestión generalizada y repleción de la vejiga urinaria.4 Esto sugiere que esta planta es capaz de producir toxicidad como la encontrada en este estudio. Aunque es válido aclarar que el uso propuesto es tópico de aplicación única y no oral.
De acuerdo a estos resultados se puede afirmar que el extracto oleoso de Melanthera deltoidea Mitch tras la administración aguda de 1 000 mg/kg en ratas no provocó mortalidad para el ensayo de toxicidad aguda oral y resultó moderadamente irritante en el ensayo de irritación de mucosa oral a dosis repetidas en hámster.1 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
2 Médico Veterinario.
3 Máster en Toxicología. Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Aspirante a Investigadora.
4 Técnico Medio en Química.