Lic. Yanier Núñez Figueredo,1 Lic. Pedro Barzaga Fernández,1 Téc. Carmen Carrillo Domínguez,2 Lic. Humberto Lastra Valdés,3 Lic. Ismael Chávez Hernández,4 Lic. Dianelis Fernández Mena1 y Téc. María Lidia González Sanabria5
Para demostrar las propiedades antialérgicas conferidas a Ocimum tenuiflorum L., se estudió su posible influencia sobre los mediadores anafilácticos y el espasmo bronquial inducido por histamina, así como su posible efecto broncodilatador. En la prueba de anafilaxia pasiva cutánea se emplearon ratas Wistar machos a las cuales se les administró el extracto en dosis de 250, 500 y 1000 mg/kg por vía oral durante 10 días. Se empleó como control positivo ketotifeno 3 mg/kg, la intensidad de la anafilaxia se determinó cuantificando la cantidad de azul de Evans extravasado. El efecto broncodilatador y protector del espasmo bronquial se determinó en cobayos Hartley machos, induciendo brococonstricción por administración intravenosa de histamina y determinando la presión bronquial. Como resultado de este trabajo se encontró que el extracto acuoso liofilizado de Ocimum tenuiflorum L. inhibió la anafilaxia pasiva cutánea y no presentó efecto protector del espasmo bronquial inducido por histamina, tampoco demostró propiedades broncodilatadoras en el modelo farmacológico empleado.
Palabras clave: Ocimum tenuiflorum L., anafilaxia pasiva cutánea, actividad broncodilatadora, espasmo bronquial.
La búsqueda de nuevos principios activos obtenidos a partir de productos naturales, es de vital importancia con vistas a incorporar los mismos en el tratamiento de diversas enfermedades muy frecuentes en la población entre de las que se encuentran el edema, prurito, broncoconstricción e hipotensión que se observan clínicamente como fiebre de heno, urticaria, asma, shock anafiláctico, entre otros.1Las reacciones de hipersensibilidad tipo I contra los antígenos ambientales (alergenos) en individuos genéticamente sensibles producen anticuerpos IgE contra alergenos tales como: polen, mohos, polvo, caspa de la piel de los animales y ciertos alimentos. La exposición al alergeno agresivo da por resultado la liberación de mediadores como histamina, sustancias de reacción lenta (SRS-A), y el factor quimiotáctico de los eosinófilos (ECF-A) en el órgano que sirve de blanco. La acción de estos mediadores sobre los vasos sanguíneos, músculo liso y glándulas secretoras con su reacción inflamatoria asociada, es responsable de las manifestaciones sintomáticas y de las características del padecimiento, entre ellas, una hipereactividad bronquial, es decir una respuesta exagerada en forma de broncoconstricción. 1
Ocimum tenuiflorum L. es una planta de la familia Lamiaceae conocida popularmente como albahaca morada. Se considera nativa de Cuba, siendo muy común su empleo en la medicina tradicional cubana como hipoglicemiante, antiasmático, y antiinflamatorio. En estudios de tamizaje fitoquímico se ha identificado la presencia de aminas, flavonoides, leuco-antocianinas, esteroles y triterpenos.2
Extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum obtenido a partir de la suspensión acuosa del follaje de la planta.
El material vegetal fue colectado en la Estación Experimental de Plantas Medicinales "Juan Tomás Roig" (EEPM) del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM) en primavera, con No. de herbario 0019, lote 16-17 y secado a 40 ºC en estufa de recirculación de aire. La suspensión acuosa fue preparada por reflujo de 100 g de material vegetal con 1L de agua destilada durante 15 min y preservada con metilparabeno 0,2 % y propilparabeno 0,02 %. El perfil cromatográfico de la suspensión fue caracterizado por cromatografía de capa delgada. Posteriormente la suspensión acuosa fue sometida a un proceso de liofilización empleando para ello una liofilizadora Edward.
La evaluación del espasmo bronquial inducido por la administración de histamina se realizó en cobayos Hartley machos (400-450 g de peso corporal) procedentes del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorios (CENPALAB). En el ensayo de anafilaxia pasiva cutánea se utilizaron ratas Wistar machos de 300 a 350 g de peso corporal y ratones albinos Suizos machos de 18 a 22 g de peso corporal para la obtención del antisuero de ovoalbúmina, procedentes de la colonia de la UCTB control Biológico (CIDEM).
Aminofilina 20 mg inyectable. Laboratorios Eron S.A, La Habana, Cuba
Difenhidramina 25 mg tabletas. Laboratorios ERON S.A, La Habana, Cuba
Fosfato ácido de histamina. BDH, Inglaterra
Ketotifeno 1 mg tableta. Laboratorios Eron S.A, La Habana, Cuba
Albúmina de huevo. Fluka Chemie AG, CH-9740 Buchs, Suiza
El resto de los reactivos empleados provienen de la casa comercial SIGMA, EE.UU.
Se confeccionaron 5 grupos de ensayo con 4 animales cada uno, 3 de los grupos fueron tratados con extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum a las dosis de 200, 400 y 800 mg/kg respectivamente por vía oral durante 7 días, otro con difenhidramina 60 mg/kg en dosis única por la misma vía 1 h antes del desafío y un ultimo grupo control sin tratamiento.
Posteriormente todos los animales fueron anestesiados con 40 mg/kg de pentobarbital sódico para realizar la traqueotomía y ventilarlos con una bomba de respiración con 100 pulsaciones/min/ kg de peso, se canalizó la vena yugular y se administraron 15 mg/kg de pentobarbital sódico para producir el paro respiratorio. A continuación se realizaron 3 administraciones por vía intravenosa de 15 mg/kg de histamina tanto a los grupos tratados como al grupo control y se determinó la presión intratraqueal después de cada administración mediante un transductor de presión TP-101T acoplado a un polígrafo NIHON KOHDEN.4
Para el ensayo de APC se formaron 4 grupos de trabajo de 4 ratas cada uno: 2 grupos recibieron extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum a las dosis de 250, 500 y 1 000 mg/kg respectivamente, un grupo control positivo administrado con ketotifeno 3 mg/kg y un grupo control sin tratamiento. El extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum se administró por vía oral durante un período de 10 días. La última administración de la sustancia de ensayo y la administración del ketotifeno fue realizada 1 h antes del desafío.
Las ratas fueron rasuradas en el área dorsal 1 h antes de la administración intradérmica de 0,1 mL de antisuero de albúmina de huevo (obtenido previamente de ratones) diluido en cloruro de sodio 0,9 % (1:20) en 6 sitios del lomo. Pasadas 24 h se provocó la reacción anafiláctica mediante la administración por vía intravenosa de 1 mL de una solución al 0,1% de albúmina de huevo en el colorante azul de Evans al 1 %. Los animales fueron sacrificados 1 h después de provocada la reacción de anafilaxia para la extracción de porciones de piel que fueron colocadas en tubos de ensayo que contenían 4 mL de formamida e incubados a 37 °C durante 48 h. Se midió la densidad óptica del colorante extravasado a una l= 623 nm.4,6 Los valores de densidad óptica obtenidos fueron expresados mediante una curva de calibración en mg de azul de Evans extravasado/sitio.
Los resultados obtenidos se expresaron a través de la media ± desviación estándar. Los mismos se procesaron mediante un análisis de varianza de una vía y posteriormente se realizó una prueba de Duncan con un nivel de significación de p<0,05.7
En el ensayo donde se provocó espasmo bronquial por administración intravenosa de histamina 15 mg/kg en cobayos, se pudo comprobar que los animales tratados con las diferentes dosis de extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum no tuvieron efecto protector al mismo pues se obtuvieron valores de presión intratraqueal similares a los obtenidos en el grupo control negativo (figura 1).
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Fig. 1. Efecto del extracto acuoso liofilizado O. tenuiflorum sobre el espasmo bronquial inducido por histamina 15 mg/kg, animales controles (A), tratados con difenhidramina 60 mg/kg (B), tratados con extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum a las dosis de 200, 400 y 800 mg/kg (C, D y E respectivamente).
En el ensayo de actividad broncodilatadora el extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum no presentó efecto positivo sobre este indicador en ninguna de las dosis ensayadas (figura 2), los animales tratados con aminofilina 25 mg/kg disminuyeron significativamente los valores de presión intratraqueal con respecto al grupo control negativo según el criterio de positividad empleado.
Fig.2. Efecto broncodilatador del extracto acuoso liofilizado O. tenuiflorum, animales controles (A), tratados con aminofilina 25 mg/kg (B), tratados con extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum. a las dosis de 25, 50 y 100 mg/kg (C, D y E respectivamente).
Los resultados de la administración de extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum a las dosis de 250, 500 y 1 000 mg/kg, por un período de 10 días sobre la APC, mostraron una disminución de la intensidad de la reacción anafiláctica en ratas (figura 3), la que fue diferente con respecto al grupo control negativo para p<0,01. Los grupos tratados con la dosis de 250 y 500 mg/kg de O. tenuiflorum mostraron resultados estadísticamente similares.
Fig. 3. Medias de la cantidad de colorante extravasado /sitio en cada uno de los grupos de ensayo.
En el ensayo donde se provocó la APC mediante un mecanismo inmunológico se observó el efecto inhibitorio de la intensidad de la misma por parte del extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum a las dosis ensayadas, probablemente debido a que este impida de alguna manera la reacción antígeno-anticuerpo, impida la síntesis y/o liberación de los mediadores alérgicos por parte de los mastocitos especialmente de la serotonina, bradiquinina, factor activador de plaquetas, prostaglandinas y/o leucotrienos o antagonicen sus receptores que evitaría la fragilidad capilar provocada por ellos y por lo tanto que haya una disminución de la cantidad de colorante extravasado/sitio, ya que los productos antagonistas de estos mediadores inhiben el aumento de la permeabilidad capilar producida por los mismos. 15
También se pudo apreciar que el extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum a las dosis de 200, 400 y 800 mg/kg después de haber sido administrado por vía oral durante un período de 7 días, no presentó efectividad en el tratamiento profiláctico de la broncoconstricción inducida por histamina, ya que los valores de presión bronquial entre el grupo control y los grupos tratados no fueron significativamente diferente según el criterio estadístico analizado. Tampoco se observó efecto broncodilatador por parte del extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum administrado por vía endovenosa en cobayos, por lo que parece que el extracto de acuoso liofilizado de O. tenuiflorum no inhibe los efectos de la histamina a nivel bronquial, la cual al interactuar con los receptores H1 provoca broncoconstricción 4,16 y por consiguiente se convierte en uno de los mediadores de las enfermedades alérgicas.1,16
Finalmente se puede concluir que el extracto acuoso liofilizado de O. tenuiflorum inhibió la anafilaxia pasiva cutánea en ratas a las dosis ensayadas, no inhibió el espasmo bronquial inducido por la administración intravenosa de 15 mg/kg de histamina y por vía endovenosa no presentó efecto broncodilatador en el modelo farmacológico empleado.Key words: Ocimum tenuiflorum L.; passive cutaneous anaphylaxis, bronchodilator activity; bronchial spasm.
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3. Disponible en URL: [en línea] http://www.niam.com/corp-web/ocimum.htm. Abril 2002.
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Recibido: 25 de mayo de 2004. Aprobado: 2 de agosto de 2004.
Lic. Yanier Nuñez Figuredo. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM). Departamento de Investigaciones Biológicas. Calle 17 No. 6208 e/ 62 y 64 Playa, La Habana, Cuba. e-mail: cinfa@infomed.sld.cu
1 Licenciado en Farmacia. Aspirante a Investigador.
2 Técnico Medio en Farmacia.
3 Licenciado en Química. Investigador Auxiliar. ]]>
4 Licenciado en Bioquímica. Investigador Agregado.
5 Técnico Medio en Química Analista. ]]>