Lic. María Teresa Buznego Rodríguez,1 Téc. Alfredo Cuba Peña,2 MSc. Eneida Garriga Sarría,3 Dr. Armando Cuéllar Cuéllar4 y Dr. Héctor Pérez-Saad5
Se evaluó el efecto neurofarmacológico de las fracciones acuosa, etanólica, clorofórmica y toluénica a partir de hojas secas de Brunfelsia nitida Benth, mediante su administración aguda sobre modelos de la conducta exploratoria y pruebas de analgesia. La fracción acuosa produjo un efecto sedante en la conducta exploratoria en la dosis de 100 y 500 mg/kg y redujo significativamente la respuesta al dolor en forma dosis dependiente en la prueba inducida por ácido acético, sin producir cambios en el tiempo de reacción del método del plato caliente. La fracción etanólica provocó una disminución significativa de la conducta exploratoria en la dosis de 200 mg/kg sin afectar la latencia y el tiempo de permanencia en el círculo central, así como una disminución de las contorsiones inducidas por ácido acético en las dosis de 40 y 200 mg/kg y en el tiempo de reacción del plato caliente. La fracción clorofórmica produjo efecto sedante en la conducta exploratoria a la dosis de 40 y 200 mg/kg, sin modificar la latencia y el tiempo de permanencia en el círculo central. Estas dosis redujeron significativamente la respuesta al dolor inducida por ácido acético sin modificar el tiempo de reacción. La fracción toluénica no modificó ninguno de los modelos empleados. No se observó paralelismo entre las curvas dosis-efecto de la conducta exploratoria y analgesia de cada fracción, por tanto los resultados sugieren que no existe relación molecular entre ambos efectos farmacológicos. En conclusión, los efectos sedantes y analgésicos encontrados parece que se deben a distintos principios activos.
Palabras clave: Brunfelsia nitida Benth, conducta exploratoria, analgesia.
El género Brunfelsia pertenece a la familia de las Solanáceas, ricas en alcaloides, la cual posee 42 especies encontradas en el oeste de la India y en el Sur de América. A este género se le ha atribuido por la población acciones antidiurética, emética, anestésica, abortiva, antiinflamatoria, analgésicas, estimulante del peristaltismo, narcótica, vértigo, entre otras. En especial, la Brunfelsia nítida Benth se utiliza para baños medicinales y se ha encontrado que sus frutos son ricos en alcaloides.1
En este género, y específicamente en esta especie, no se han encontrado informaciones en la literatura en los que se haya comprobado científicamente los efectos farmacológicos popularmente descritos.
Dentro de la neurología experimental, es de interés encontrar compuestos que permitan el tratamiento de síndromes neurológicos. Es conocido que algunos de estos síndromes concomitan con dolor como en el caso del dolor neural crónico, en la neuralgia del trigémino, neuropatías, entre otras.2-6 y un tratamiento inadecuado puede conducir a consecuencias adversas y ser causa de complicaciones clínicas y/o desarrollo del dolor crónico incidiendo en la calidad de vida del individuo.7
Basado en estas consideraciones, se hace necesaria la búsqueda de principios activos que presenten efectos sedantes y analgésicos.
]]> El propósito del presente trabajo fue estudiar los posibles efectos sedantes y analgésicos de la planta mediante la administración aguda de las fracciones acuosa, etanólica, clorofórmica y toluénica, en modelos de analgesia y conducta exploratoria, y valorar si los mecanismos moleculares responsables de estos efectos se encuentran relacionados.La especie Brunfelsia nítida fue identificada por el Dr. Víctor Fuentes Fiallo y registrada con el número de herbario ROIG 4704. Fue recolectada en el mes enero de 2002.
Los experimentos se realizaron en ratones machos, de la línea OF1, de 18 a 22 g de peso corporal. Se utilizaron 4 grupos de animales a los cuales se les administraron correspondientemente 3 dosis de una fracción de la planta y salina (NaCl 0,9 %) al grupo control, con excepción de la fracción etanólica en donde el control recibió etanol al 6 % en solución salina.
El extracto etanólico se diluyó en polivinilpirrolidona al 1 % y después de secado al baño de maría se disolvió en etanol al 6 % en solución salina. La fracción acuosa se empleó en las dosis de 20,100, 500 y 1 000 mg/kg, en las restantes fracciones se emplearon las dosis de 8, 40 y 200 mg/kg.
Las fracciones y la solución se administraron por vía intraperitoneal, en volumen de 0,01 mL/g de peso corporal, 30 min antes de comenzar la observación.
Consistió en secado al aire del material vegetal, a temperatura ambiente. Luego, este material se trituró hasta quedar en pedazos muy pequeños y se colocó en un dedal de un equipo soxhlet de extracción continua (80 g de planta y 750 mL). Las extracciones se realizaron durante 8 a 16 h, de forma sucesiva sobre el mismo material vegetal con los siguientes disolventes: cloroformo, tolueno, etanol y agua. 8 Las fracciones de forma independiente se concentraron a extracto seco con la utilización de un rotoevaporador al vacío, calculándose su rendimiento por gravimetría y se guardaron en desecadora hasta el momento de realizar su evaluación biológica.
La conducta exploratoria se observó en ratones mediante un recipiente de campo abierto, con una pared de 15 cm de alto y un diámetro de 30 cm. En el piso se dibujó un círculo concéntrico de 10 cm de diámetro. 9 La observación comenzó con la colocación del animal en el círculo central y a partir de ese momento se midieron los indicadores siguientes: 1. latencia (tiempo inicial transcurrido en el círculo central), 2. número de empinamientos, 3. número de veces que el animal atraviesa el círculo central- conducta diagonal y 4. tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central durante el tiempo de observación. Se empleó un cronómetro manual-mecánico y el tiempo total de observación fue de 6 min.
Prueba del ácido acético. Se inyectó ácido acético al 0,6 % por vía intraperitoneal y se observaron inmediatamente las contorsiones y estiramientos producidos durante 20 min.10
Plato caliente. Los ratones se colocaron encima de una plancha metálica puesta en contacto directo con el agua de un ultratermostato mediante unas paletas soldadas en su superficie inferior.10 Los ratones fueron restringidos en su movimiento con el empleo de un cilindro de vidrio de 10 cm de diámetro y 15 cm de altura, la temperatura empleada fue de 54 ± 1° C. El tiempo de reacción se tomó como el tiempo de demora de lamido de una de las patas traseras o salto y el tiempo de observación total fue de 2 min.
Las dosis de 100 y 500 mg/kg de la fracción acuosa provocaron una disminución significativa del número de cruces más empinamientos (tabla 1), sin afectar la latencia, ni el tiempo de permanencia total en el círculo central.
]]> Tabla 1. Efectos de diferentes dosis de la fracción acuosa de B. nítida sobre la conducta exploratoria| | Dosis (mg/kg) | |||
| 20 | 100 | 500 | ||
| Latencia (s) | ]]> 1,1 | 1,2 | 1,2 | 1,4 |
| T-círculo (s) | 9,2 | 8,8 | 6,7 | 5,1 |
| No. Cruces ]]> más empinamientos | 50,4 | 38,8 | 25,0 * | 25,7 * |
n = 10. Los datos representan las medias.
T - círculo: tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central.
* (p < 0,05) respecto a solución salina según las pruebas de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.
El efecto de la dosis de 1 000 mg/kg del extracto acuoso sobre la conducta exploratoria no se muestra, ya que el tratamiento con este extracto provocó movimiento de sacudidas, cola de Straub, convulsiones mioclónicas y convulsiones tónico clónicas secundariamente generalizadas que condujeron a la muerte del animal de forma inmediata.
La fracción acuosa disminuyó significativamente el número de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético, en una forma dependiente de la dosis, pero no afectó el tiempo de reacción del plato caliente (tabla 2).
]]> Tabla 2. Efecto de diferentes dosis de la fracción acuosa de B. nítida sobre el método del plato caliente y la prueba de ácido acético| Dosis | Tiempo de reacción: | Número de estiramientos y contorsiones |
| Solución salina | 5,5 | 55,0 |
| ]]> 20 | 6,6 | 35,4* |
| 100 | 8,2 | 22,6 ** |
| 500 | 6,0 | 0,8** |
n = 10. Los datos representan las medias. ]]>
* (p < 0,05), ** (p< 0,01) respecto a solución salina según las pruebas de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.En la figura 1, se puede observar la ausencia de paralelismo entre las curvas dosis-efecto de la conducta exploratoria y de la prueba de analgesia.
Fig. 1. Curvas dosis-efecto del extracto acuoso de B. nítida de la conducta exploratoria y de la prueba de irritación peritoneal inducida por ácido acético.
La administración aguda de la fracción etanólica produjo una disminución significativa del número de cruces mas empinamientos con la dosis de 200 mg/kg (tabla 3), sin afectar la latencia y el tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central.
Tabla 3. Efectos de diferentes dosis de la fracción etanólica de B. nítida sobre la conducta exploratoria
| Diluente | Dosis (mg/kg) | |||
| ]]> | 8 | 40 | 200 | |
| Latencia (s) | 1,0 | 1,2 | 1,0 | 1,1 |
| T-círculo (s) | ]]> 12,3 | 9,2 | 8,8 | 7,1 |
| No. cruces más | 41,6 | 30,4 | 30,0 | 18,78 * |
La fracción etanólica disminuyó significativamente el número de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético a las dosis de 40 y 200 mg/kg, así como en las dosis de 8 y 200 mg/kg el extracto disminuyó significativamente el tiempo de reacción del plato caliente (tabla 4).
| Dosis | ]]>
Tiempo de reacción: lamidos de patas traseras o salto (s) | Número de estiramientos y contorsiones |
| Diluente | 9,6 | 29,8 |
| 8 | 5,0* | 19,8 |
| ]]> 40 | 8,7 | 5,3 ** |
| 200 | 4,1* | 3,8** |
n = 10. Los datos representan las medias.
Diluente: etanol al 6 % en solución salina.
* (p < 0,05),** (p < 0,01) respecto al diluente según las pruebas de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney.
La figura 2 muestra 2 curvas dosis-efecto de la fracción etanólica, una de la conducta exploratoria y otra, de la prueba de analgesia plantar, las cuales no son coincidentes.
]]>
Fig. 2. Curvas dosis-efecto del extracto etanólico de B. nítida de la conducta exploratoria y de la prueba de irritación peritoneal inducido por ácido acético.
La fracción clorofórmica provocó una disminución significativa del número de cruces más empinamientos con la administración de las dosis 40 y 200 mg/kg (tabla 5). Sin embargo no afectó la latencia, ni el tiempo de permanencia total en el círculo central.
| | Dosis (mg/kg) | |||
| 8 | ]]> 40 | 200 | ||
| Latencia (s) | 1,7 | 1,2 | 1,1 | 1,1 |
| T-círculo (s) | 20,2 | 24,0 | ]]> 23,5 | 13,8 |
| No. cruces más | 42,3 | 32,4 | 11,1* | 10,8 * |
n = 10. Los datos representan las medias.
T - círculo: tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central. ]]>
La fracción de cloroformo disminuyó significativamente el número de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético en las dosis de 40 y 200 mg/kg. El tiempo de reacción del plato caliente no fue modificado por la fracción de cloroformo (tabla 6).
Tabla 6. Efecto de diferentes dosis de la fracción clorofórmica de B. nítida sobre el método del plato caliente y la prueba de ácido acético
| Dosis | Tiempo de reacción: | |
| ]]> Solución salina | 9,7 ± 1,4 | 37,0 ± 3,1 |
| 8 | 13,7 ± 1,9 | 26,8 ± 5,7 |
| 40 | 8,2 ± 1,7 | 17,5 ± 3,1 * |
| 200 | ]]> 11,9 ± 2,0 | 12,4 ± 3,0 * |
n = 10. Los datos representan las medias ± errores estándares.
* (p < 0,001), respecto a solución salina según las pruebas de ANOVA y Duncan.
En la figura 3, se puede observar la ausencia de paralelismo entre las curvas dosis-efecto de la conducta exploratoria y de la prueba de analgesia con la fracción de cloroformo.
Fig. 3. Curvas dosis-efecto del extracto clorofórmico de B. nítida de la conducta exploratoria y de la prueba de irritación peritoneal inducida por ácido acético. Se realizó un ajuste en las curvas dosis-efecto y en la comparación de las pendientes de las rectas se encontraron diferencias significativas (p<0,05) según la prueba de regresión (rectas no paralelas). n=10.
La administración aguda de la fracción toluénica no ejerció efecto alguno sobre los indicadores de la conducta exploratoria (tabla 7).
Tabla 7. Diferentes dosis de la fracción toluénica de B. nítida sobre la conducta exploratoria
| ]]> Solución salina | Dosis (mg/kg) | ||||
| 8 | 40 | 200 | |||
| Latencia (s) | 1,1 | 1,1 | 1,1 | 1,1 | |
| ]]> T-círculo (s) | 5,3 | 13,4 | 11,1 | 13,5 | |
| No. cruces más | 31,9 | 32,7 | 31,5 | ]]> 43,4 | |
n = 10. Los datos representan las medias.
T - círculo: tiempo de permanencia total transcurrido en el círculo central.
La fracción de tolueno no modificó el número de contorsiones y estiramientos inducidos por ácido acético, ni sobre el tiempo de reacción del plato caliente (tabla 8).
Tabla 8. Diferentes dosis de la fracción toluénica de B. nítida sobre el método del plato caliente y la prueba de ácido acético
| Dosis | Tiempo de reacción: | ]]> Número de estiramientos y contorsiones |
| Solución salina | 8,8 ± 0,8 | 29,1 ± 6,1 |
| 8 | 8,1 ± 2,5 | 39,7 ± 7,4 |
| 40 | 6,8 ± 3,0 | 30,6 ± 4,9 |
| ]]> 200 | 8,4 ± 3,7 | 24,2 ± 5,6 |
n = 10. Los datos representan las medias ± errores estándares.
Los resultados demuestran la presencia en la Brunfelsia nítida de principios activos con acciones analgésica y sedante. La falta de paralelismos entre las curvas de ambos efectos pudiera indicar que los mecanismos moleculares correspondientes a estas acciones son diferentes. Esto se corresponde con el hecho de que el efecto analgésico se manifiesta sólo en el modelo de irritación peritoneal por ácido acético, particularmente sensible a los analgésicos de acción periférica.11,12
Con la excepción del extracto etanólico, el cual produjo una disminución significativa del tiempo de reacción en el plato caliente, el resto de los extractos no tuvieron efecto en este modelo, por lo que la planta no parece tener principios activos con acción analgésica central. El efecto hiperalgésico de dicho extracto pudiera corresponderse con las características y los mecanismos moleculares de los barbitúricos, los que suelen ser hiperalgésicos cuando se administran a dosis subanetésicas, particularmente en individuos con presencia de dolor.13
El efecto sedante de los extractos en la conducta exploratoria debe estudiarse en otros modelos que permitan tipificar este efecto dentro de la clasificación de los psicofármacos de referencia, tales como ansiolíticos, antidepresivos, neurolépticos, entre otros.
Los efectos aquí descritos de la planta están en correspondencia con algunos de los usos informados para el género de las Solanáceas dentro de la medicina tradicional, al cual se le atribuye acciones antiinflamatoria, analgésica, anestésica, y narcótica.1
En conclusión, los efectos sedantes y analgésicos encontrados parece que se deben a distintos principios activos.
Key words: Brunfelsia nitida Benth, exploring behavior, analgesia.
1. Plowman T. Brunfelsia in ethnomedicine. Bot Mus Leaft Harvard Univ. 1977;25:298-320.
2. Sweet WH. The treatment of trigeminal neuralgia. N Engl J Med. 1981;315:174 -7.
3. Taylor J, Brower S, Spir ML. Long term treatment of trigeminal neuralgia with carbamazepine. Rev Postgrad Med J. 1981;57:16-8.
4. Alexander J, Black A. Pain mechanisms and the management of neuropathic pain. Curr Opin Neurol Neurosurg. 1992;5:228-34.
5. Backonja MM. Painful Neuropathies. In: Loeser JD, Butler SH, Chapman CR, Turk DC, editors. Bonica’s Management of Pain. 3rd ed. Baltimore, MD: Lippincott Williams & Wilkins; 2001. p. 371-87.
6. Merskey H, Bugduk N. Classification of Chronic Pain. Descriptions of Chronic Pain Syndromes and Definitions of Pain Terms. 2nd ed. Seattle, WA: IASP Press; 1994.
7. Becker N, Bondegaard Thomsen A, Olsen AK. Pain epidemiology and health related quality of life in chronic non-malignant pain patients referred to a Danish multidisciplinary pain center. Pain. 1997;73:393-400.
8. Hostettmann K, Hostettmann M, Marston A. Sample preparation and purification. In: Preparative chromatographic techniques: applications in natural products isolation and purification. Berlin: Springer Verlag;1986.
9. Voghel HG, Voghel WH, editors. Drugs discovery and evaluation: pharmacological assays. Berlin: Springer;1997.p.204-315.
10. Turner RA, editor. Screening methods in pharmacology. New York: Academic Press; 1965. p.100-17.
11. Collier HO, Dinnen LC, Johnson CA, Schneider C. The abdominal constriction response and its suppression by analgesic drugs in the mouse. Br J Pharmacol. 1968;32:295-310.
12. de Farias SM, da Silva JA, Lapa AJ, Souccar C, Brandao LM. Analgesic and antiinflammatory properties of Scoparia dulcis L. extracts and glutinol in rodents. Phytother Res. 1993;7:408-14.
]]>13. Hobb WR, Rall TW, Verdoorn TA. Hipnóticos y sedantes; etanol. In: Hardman JG, Limbird LE, Molonoff PB, Ruddon RW, Goodman Gilman A, editors. Las bases farmacológicas de la terapéutica. México: McGrasw-Hill Interamericana; 1996. p. 385-422.
1Licenciada en Ciencias Biológicas. Investigadora Auxiliar.
2Técnico en Investigación Científica.
3Máster en Informática en Salud. Licenciada en Matemática. Profesora Auxiliar.
4Doctor en Ciencias Químicas. Máster en Ciencias. Profesor Titular.
5Doctor en Ciencias Médicas. Investigador Titular.