ARTÍCULO ORIGINAL
Actividad de extractos de orégano y tomillo frente a microorganismos asociados con otitis externa
Extracts from oregano and thyme against external otitis-associated microorganisms
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Luciana de Souza PrestesI, Ricardo FrascollaII, Rosema SantinIII, Marco Aurelio Ziemann dos SantosIV; Renata Costa SchramV, Maria Regina Alves RodriguesVI, Luiz Filipe Damé SchuchVII, Mario Carlos Araújo MeirelesVIII Máster en Ciencias. Departamento de Veterinaria Preventiva, Facultad de Veterinaria, Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Pelotas, RS, Brasil.
II Practicante del Laboratorio de Bacteriología. Departamento de Veterinaria Preventiva, Facultad de Veterinaria, Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Pelotas, RS, Brasil.
III Practicante del Laboratorio de Micología. Departamento de Veterinaria Preventiva, Facultad de Veterinaria. UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
IV Técnico en Cromatografía. Departamento de Química Orgánica, Instituto de Química e Geociencias. UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
V Médica Veterinaria. Departamento de Veterinaria Preventiva. Facultad de Veterinaria. UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
VI Departamento de Química Orgánica, Instituto de Química y Geociencias. UFPel. Pelotas, RS, Brasil, responsable por los análisis de los resultados de la cromatografía.
VII Departamento de Veterinaria Preventiva. Facultad de Veterinaria, UFPel. Pelotas, RS, Brasil.
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RESUMEN
INTRODUCCIÓN: la utilización de plantas con fines medicinales para el tratamiento de enfermedades ha ocurrido a lo largo de la historia de la humanidad. La enfermedad más comúnmente diagnosticada en perros es la otitis externa y, por lo tanto, es grande su importancia clínica.
OBJETIVO: evaluar la actividad antimicrobiana in vitro de 3 tipos de extractos de las plantas Origanum vulgare L. (orégano) y Thymus vulgaris L. (tomillo), un aceite, una tintura y una decocción, frente a microorganismos asociados con esa enfermedad.
MÉTODOS: la evaluación de los extractos fue realizada a través de microdiluciones en caldo frente a aislados de Malassezia pachydermatis, Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) y Staphylococcus aureus (ATCC 12600). Se realizó un análisis por cromatografía de los aceites para comparación de sus constituyentes.
RESULTADOS: los aceites presentaron concentración inhibitoria mínima menor frente a los microorganismos, pero los extractos que presentaron mejor rendimiento fueron las tinturas.
CONCLUSIONES: los 2 tipos de extractos pueden ser una alternativa para el tratamiento de la otitis externa de los perros. ]]>
Palabras clave: Origanum vulgare L., Thymus vulgaris L., aceite esencial, tintura, otitis externa.
ABSTRACT
INTRODUCTION: the use of plants for medicinal purposes to treat diseases has been seen throughout the history of mankind. The most common diagnosed disease in dogs is external otitis, and therefore, the clinical importance of this illness is great.
OBJETIVE: to evaluate the in vitro antimicrobial activity of 3 types of extracts from Origanum vulgare L. (oregano) and Thymus vulgaris L. (thyme) in the form of an oil, a tincture and a decoction against otitis-associated microorganisms.
METHODS: the evaluation of these extracts was performed through microditulion in broth against Malassezia pachydermatis, Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) y Staphylococcus aureus (ATCC 12600) isolates. The oil components were compared by chromatography technique.
RESULTS: the oils presented with a lower minimum inhibitory concentration against microorganisms, but the best performance extracts were tinctures. CONCLUSIONS: these two types of extracts may be an alternative for the treatment of external otitis in dogs. ]]>
Key words: Origanum vulgare L., Thymus vulgaris, essential oil, tincture, external otitis
INTRODUCCIÓN
Origanum vulgare L. y Thymus vulgaris L. son plantas distribuidas en áreas del mediterráneo y Asia, ambas pertenecen a la familia Lamiaceae.1,2 Presentan diversas actividades biológicas con acción antiséptica, expectorante, carminativa y antiespasmódica relacionadas con el contenido en timol y carvacrol, que constituyen 40 a 50 % del aceite esencial utilizado como antiséptico, saborizante y antioxidante.3-5 Comparados con el fenol, el timol y el carvacrol presentan mayor actividad antibacteriana y fungicida, pero menos toxicidad.6 La otitis externa en animales de compañía es la enfermedad más comúnmente diagnosticada en perros y por lo tanto, es de gran importancia en clínica.7,8 Malassezia pachydermatis se encuentra en otitis externa como agente que se perpetúa, facilitada por la utilización excesiva de antibacterianos que eliminan bacterias comensales competidoras.9
El objetivo de este trabajo fue evaluar in vitro la actividad antimicrobiana del orégano frente a los microorganismos Malassezia pachydermatis, Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa y determinar la concentración inhibitoria mínima (CIM).
MÉTODOS ]]>
Origen de las plantas: O. vulgare fue obtenido de fuente comercial (Quimer Comercial Ltda., lote nº 001, año 2001), previamente seco y con respectivo laudo agronómico y botánico. T. vulgaris fue colectado de huerta de plantas medicinales, en un asentamiento de reforma agraria (Cooperativa de Producción Agropecuaria Vista Alegre-COPAVA), municipio de Piratini (4587E, 6070N). Las hojas fueron secadas al aire libre, protegidas del sol y de la lluvia. Un espécimen fue identificado por la doctora Leila Macías del Herbario Pel del Instituto de Biología de la Universidad Federal de Pelotas (Voucher PEL 24.586).
Extracción del aceite esencial: la extracción fue realizada por arrastre de vapor utilizando un clevenger modificado de acuerdo con la farmacopea brasilera.10 Rápidamente, 100 g de cada planta fueron colocados en un balón de vidrio con 500 mL de agua destilada estéril y sometidas al aparato durante aproximadamente 4 h. Los aceites esenciales fueron extraídos de una única vez, guardados en frasco ámbar estéril hasta la realización de los análisis por cromatografía y los análisis in vitro.
Cromatografía: los análisis por cromatografía de los aceites fueron realizados por cromatografía gaseosa acoplada a espectrometría de masa (CG/EM) en el Laboratorio de Fitoquímica del Instituto de Química Orgánica de la Universidad Federal de Pelotas. Se utilizó un cromatógrafo (GC/FID Shimadzu Mod. 17 A columna capilar con 5 % difenil/95 % dimethylsiloxano) con el objetivo de comparar los constituyentes principales, timol y carvacrol, de las 2 plantas.
Preparación de las tinturas: las tinturas de las plantas fueron preparadas utilizando 100 g de planta seca para 1 L de alcohol de cereales a 70 gl. Las plantas permanecieron en maceración durante 15 d en frasco ámbar con agitación diaria.10 Después, las tinturas fueron filtradas, el volumen de alcohol restituido y conservadas en frasco ámbar hasta su utilización. Para la evaluación antimicrobiana el alcohol fue extraído utilizándose un evaporador rotatorio a 55 oC bajo 600 nm/hg de presión negativa. El volumen inicial fue repuesto con agua destilada estéril y se utilizó antes de transcurrir 24 h.
Preparación de las decocciones: fueron preparadas momentos antes de su utilización por causa de la posibilidad de degradación del extracto, se utilizó 1 parte de planta para 10 de agua destilada estéril mantenida en ebullición durante 10 min.6,10
Microorganismos: las cepas de referencia de Pseudomonas aeruginosa (ATCC 10145) y Staphylococcus aureus (ATCC 12600) fueron cedidas por la Fundación Oswaldo Cruz-FIOCRUZ). Los aislados de Malassezia pachydermatis fueron obtenidos, en el Laboratorio de Micología de la Facultad de Veterinaria-UFPel, a través de colecta de material del meato acústico externo de perros con otitis externa clínica.
La determinación de la susceptibilidad de microorganismos frente a los extractos fue realizada por microdilución en caldo, modificado por Nascente11 para las levaduras, en microtécnica. El crecimiento microbiano fue evaluado por turbación y la concentración inhibitoria mínima (CIM) era la mayor dilución donde no hubo turbación visible expresa en porcentaje de extracto.12,13
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RESULTADOS
Los análisis de la cromatografía mostraron diferencias entre los constituyentes de las plantas. El aceite de T. vulgaris presentó 7 picos compatibles con los patrones utilizados (mirceno, p-cimeno, 1,8 cineol, linalol, 4-terpineol, a-terpineol y timol). Fueron observados, por lo menos, otros 17 constituyentes no caracterizados, muchos de los cuales en cantidades mayores que el contenido de timol. En relación a O. vulgare, se identificaron 10 constituyentes relacionados a los padrones (a-terpineno, p-cimeno, limoneno, g-terpineno, terpinoleno, linalol, 4-terpineol, a-terpineol, timol y carvacrol), la relación timol:carvacrol resultó próxima a 1:1. El pico de 4-terpineol se presentó muy semejante al de los constituyentes principales.
Los resultados de CIM para los extractos de las plantas evaluados aparecen en la tabla 1. A pesar de que los constituyentes de las 2 plantas son diferentes, la CIM del orégano y del tomillo fue semejante para las 4 muestras de M. pachydermatis (0,5 %).
En relación con las tinturas, la planta que mostró mejor resultado fue el orégano con CIM media de 25 %. La CIM de la decocción de orégano fue de 50 %, la decocción de tomillo no presentó inhibición de los aislados de M. pachydermatis. Frente a las bacterias el mejor resultado fue el de los aceites y frente a P. aeruginosa la CIM del aceite de orégano fue 12 % y frente a S. aureus fue 1,56 %; la CIM del aceite de tomillo fue 5 % para P. aeruginosa y de 1,25 % para S. aureus (tabla 2).
DISCUSIÓN
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La variación en la constitución del aceite esencial ha llevado a la tentativa de clasificar esas plantas en diferentes quimiotipos de acuerdo con el constituyente principal.14 Esta variación depende de la variedad de orégano, de la altitud, sazonalidad y otras características agronómicas.15,16Hammer y otros17 utilizaron aceites comerciales y obtuvieron una CIM de 2,0 % para P. aeruginosa y para S. aureus 0,12 %; para el aceite de tomillo la CIM fue > 2,0 % para P. aeruginosa y para S. aureus 0,25 %. Sin embargo, no se encontraron otros trabajos que utilizaron la misma metodología para mejor compararlos.
Todos los extractos y tinturas inhibieron el crecimiento de los hongos y de las bacterias, el extracto de aceite mostró el mejor resultado, pero el rendimiento obtenido con esta forma farmacéutica es mucho menor por gramo de planta en relación con las otras formas de extracción.
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Recibido: 8 de agosto de 2008.
Aprobado: 10 de octubre de 2008.
M. C. Luciana de Souza. Departamento de Veterinaria Preventiva, Faculdad de Veterinaria, Universidad Federal de Pelotas (UFPel). Campus universitario s/n, CEP 96010900, Pelotas,RS, Brasil. Correo electrónico: lprestes.mv@hotmail.com ]]>
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