Actividad antimicrobiana e irritabilidad vaginal y dérmica de extractos acuosos de hojas secas de Solanum americanum Mill.
Antimicrobial activity, vaginal and dermal irritability of aqueous extracts of dry leaves of Solanum americanun Mill.
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María Julia Martínez GuerraI; Marisol López BarreiroII; Zulema Morejón RodríguezIII; Elisa Boucourt RodríguezIV; Ana Ibis García HernándezV
I Licenciada en Biología. Investigadora Agregada. Laboratorio Central de Farmacologia (LCF). Facultad de Ciencias Médicas "Dr. Salvador Allende". Ciudad de La Habana, Cuba.
II Licenciada en Bioquímica. Investigadora Agregada. LCF. Ciudad de La Habana, Cuba.
III Licenciada en Química. Laboratorio Central de Farmacología (LCF). Ciudad de La Habana, Cuba.
IV Técnica en veterinaria. Laboratorio Central de Farmacología (LCF). Ciudad de La Habana, Cuba.
V Médico. Especialista de I grado en Farmacología. Aspirante a investigadora. Laboratorio Central de Farmacología (LCF). Ciudad de La Habana, Cuba.
INTRODUCCIÓN: Solanum americanum Mill. (yerba mora) es usada de forma tradicional para el tratamiento de las úlceras en la piel, se utiliza además como antiinflamatorio y antiséptico en enfermedades de la piel y en cérvico-vaginitis. Sin embargo, existen pocos estudios preclínicos que validen su uso. ]]>
OBJETIVO: evaluar la actividad antimicrobiana, la irritabilidad vaginal y dérmica de 2 decocciones de hojas secas de Solanum americanum Mill.
Palabras clave: Solanum americanum, antimicrobiana, irritabilidad dérmica, irritabilidad vaginal.
INTRODUCTION: Solanum americanum Mill (yerba mora) is used in a traditional way to treat skin ulcers, it is used also as antiinflammatory and antiseptic in skin diseases and in cervicovaginitis. However, there are few preclinical studies validating it.
OBJECTIVE: To assess antimicrobial activity, vaginal and skin irritability of 2 decoctions of dry leaves of Solanum americanun Mill.
METHODS: Two aqueous extracts were prepared from: a) dry leaves to 20% and antimicrobial activity was assessed by means of diffusion method in agar, versus microorganisms Candida albicans, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, and Salmonella thyphymurium; as well as irritability in rabbit vagina by Draize method. b) dry leaves to 30%, and skin irritability by Draize method in rabbits.
RESULTS: Using a decoction of dry leaves to 20%, we achieved a growing inhibition halo of 15.5 mm with Candida albicans; but not inhibition using other study drugs; there was a minimal vaginal irritability and not erythema and edema in skin of animals using a decoction of dry leaves to 30%. ]]>
CONCLUSIONS: Decoction of dry leaves of S. americanum showed antimicrobial activity versus C. albicans but not against other microorganism, with a minimal vaginal irritability, and was classified as non-irritant in skin; consequently, they may be used in affections provoked by C. albicans in skin and in vagina.
Key words: Solanum americanum, antimicrobial, skin irritability, vaginal irritability.
INTRODUCCIÓN
Solanum americanum Mill., conocido en Cuba como yerba mora, pertenece a la familia Solanaceae.1 Es una planta nativa de Centroamérica y crece en todo el trópico americano. Es una hierba anual o perenne de vida corta, de hasta 1 m de alto. Tallos jóvenes pubescentes, pelos recurvados. Hojas solitarias o en pares desiguales, ovaladas a lanceoladas. El fruto es una baya lampiña, globosa, glabra, negra-lustrosa al madurar, con semillas pequeñas.2,3 ]]>
En las encuestas TRAMIL se reporta su uso tradicional para el flujo vaginal y para la "culebrilla" (herpes zoster). También se conoce que es utilizada en el tratamiento de úlceras tópicas, como antiherpético, antiinflamatorio y antiséptico para enfermedades de la piel.2,3 Dentro de sus componentes químicos demostrados por tamizaje se encuentran alcaloides, esteroides policíclicos, saponinas y taninos.3,4 Además, contiene riboflavina, tiamina, ácido ascórbico y sales minerales.5A la yerba mora se le han realizado algunos estudios en los que la decocción de hoja mostró actividad antimicrobiana in vitro, frente a Staphylococcus aureus y la decocción de hoja seca, in vitro, mostró actividad fungicida frente a Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, M. gypseum, Trichophyton mentagrophytes y T. rubrum con concentración inhibitoria mínima (CIM) de 100-300 mg/mL.6
Por todo lo anterior, el objetivo propuesto era evaluar la actividad antimicrobiana, la irritabilidad vaginal y dérmica de 2 decocciones de hojas secas de S. americanum.
MÉTODOS
Material vegetal
La planta fue colectada en la Estación Nacional de Frutales en Alquízar y depositada en la Estación Experimental de Plantas Medicinales «Dr. Juan Tomás Roig» con número de voucher ROIG-4653. Se prepararon 2 decocciones, una a 20 % y otra a 30 % de hojas secas. ]]>
Modelo biológico
Los animales empleados en el estudio fueron conejos albinos, 3 machos y 6 hembras de la línea New Zealand, con un peso promedio de 2 kg, procedentes del Centro Nacional de Producción de Animales de Laboratorios (CENPALAB). Se mantuvieron en salas a temperatura de 23 °C, humedad 60 % y ciclos luz/oscuridad de 12/12 h. Recibieron como alimento dieta comercial pelletizada EMO (Alyco®, CENPALAB) con su correspondiente certificado de calidad. El agua era de calidad apta para consumo humano. El acceso a los alimentos y al agua fue ad libitum. Los animales fueron sometidos a cuarentena y observación clínica diaria durante 7 d antes del inicio de experimento.
El estudio se realizó cumpliendo las guías de buenas prácticas7 y para el cuidado y uso de animales de laboratorio.8
Métodos experimentales
Difusión en agar para evaluar actividad antimicrobiana
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Se prepararon los medios de cultivo necesarios. Para la cepa de bacteria se utilizó Medio Antibiótico No. 1 (Oxoid) y para la especie de levadura se empleó Medio Sabouroud-Dextrosa (Oxoid), ambos se prepararon según las instrucciones del fabricante y se esterilizaron en autoclave a 120 °C por 20 min.Las cepas de microorganismos empleadas fueron: Candida albicans ATCC 10231, Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 10278 y Salmonella thyphimurum ATCC 14028.
Se prepararon los precultivos de las cepas de bacterias y de Candida albicans en medio antibiótico y medio Sabouroud líquido (sin agar), respectivamente, y se dejaron crecer por 14 h en agitación a 37 °C. A partir de estos se inocularon los microorganismos en los medios con agar antes fundido y mantenido a 45 °C. La cantidad de inóculo añadido a estos medios de cultivo permitió obtener un crecimiento en césped a una concentración aproximada de 108 células/mL.
Una vez solidificado el medio de cultivo previamente inoculado con los microorganismos, se realizaron 5 perforaciones por placa de 1 cm de diámetro y se añadieron 100 µL del extracto acuoso de hojas secas a 20 % de S. americanum y agua como control negativo. Se utilizaron un total de 10 réplicas por tratamiento.
Las placas se incubaron a 37 °C por 24 h, al cabo de este tiempo se evaluaron los resultados mediante la lectura en milímetros del diámetro del halo de inhibición del crecimiento de los microorganismos.9
Irritabilidad vaginal
Se utilizaron 6 conejos adultos jóvenes, albinos de la línea New Zealand (hembras) con un peso promedio de 2 kg, procedentes de CENPALAB. Los animales fueron distribuidos en 2 grupos de 3 cada uno, un grupo control (agua destilada) y un grupo tratado (extracto acuoso de hojas secas a 20 %).
Se colocó un catéter flexible de 6 cm de largo a una jeringuilla con capacidad para 2 mL del material de ensayo que va a ser administrado. El animal se colocó en el cepo de forma tal que permitiera el acceso a la vagina. El catéter fue lubricado antes de la introducción, se colocó en la vagina y se depositaron 2 mL de extracto acuoso de hojas secas a 20 %. Este procedimiento se repitió cada 24 h por 5 d. Se registró y anotó la apariencia de la apertura vaginal y el perineo para signos de descarga, eritema y edema, 24 h antes de la aplicación inicial e inmediatamente antes de cada tratamiento. ]]>
Los animales fueron sacrificados por inhalación de una atmósfera saturada de éter, después de 24 h de la última dosificación.Se limpió la vagina y se abrió longitudinalmente para observar signos de algún daño, se colocó en un fijador para su posterior procesamiento histopatológico y hallar el índice de irritación vaginal (IIV), mediante la fórmula: IIV = Grupo tratado Grupo control.
Las escalas de evaluación de irritabilidad se muestran en las tablas 1 y 2.
Irritabilidad dérmica primaria
Se utilizaron 3 conejos albinos (machos) de la línea New Zealand con un peso promedio de 2 kg procedentes del CENPALAB.
Se removieron los pelos del tronco de los animales, 24 h antes del ensayo, con cuidado de no erosionar la piel. Se utilizaron 0,6 mL del extracto acuoso de hojas secas a 30 % para cada animal, se aplicó en un área de aproximadamente 6 cm2 de la piel y se cubrió con un parche de gasa, sostenido en el lugar mediante un esparadrapo no irritante, que fue separado en cajas de retención, para evitar que estuviera en contacto con el parche. Al final del período de exposición de 4 h, se removió la sustancia remanente con agua destilada, para evitar el daño a la epidermis.
Las lesiones se evaluaron de acuerdo con las escalas establecidas (tablas 3 y 4) para eritema y edema.
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Las lecturas para eritema y edema se hicieron a las 24, 48 y 72 h.
El eritema se estableció por visualización y el edema por palpación ligera.10
Si se necesita clarificar alguna duda, es posible hacer histopatología
Se obtuvo el índice de irritación primaria (IIP).
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donde:
n= animales, t= tiempo
RESULTADOS
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El extracto acuoso a 20 % de hojas secas de yerba mora mostró actividad antimicrobiana y formó un halo de inhibición del crecimiento frente al microorganismo C. albicans de 14 a 16 mm de diámetro con una media de 15,5 mm (tabla 5). No mostró actividad antimicrobiana frente a los microorganismos Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Salmonella thyphimurum, demostrado por la ausencia de halo de inhibición de crecimiento.
El resultado de la irritabilidad vaginal del extracto acuoso 20 % de hojas secas de S. americanum, fue mínimo, los datos se muestran en la tabla 6, donde los animales tratados muestran valores de mínimo a medio, de infiltración leucocitaria, congestión vascular y edema, con un índice de irritación vaginal de 3,6.
En la evaluación de la irritabilidad dérmica con el extracto acuoso 30 % de hojas secas del S. americanum, los animales en estudio no presentaron eritema ni edema en la piel. Se obtuvo un índice de irritación primaria de cero.
DISCUSIÓN
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En otros estudios realizados, la decocción de hojas secas presentó in vitro, actividad fungicida con CIM de 100-300 mg/mL frente a E. floccosum, M. canis, M. gypseum, T. mentagrophytes y T. rubrum,6 lo que coincide con nuestros resultados al evaluar el extracto acuoso de hojas secas 20 % de yerba mora, que mostró actividad antimicótica frente a la levadura Candida albicans y pudiera actuar por un mecanismo de acción al nivel celular.11 Otros autores han establecido relación entre la presencia de flavonoides y su acción sobre los tubos germinativos de C. albicans.12En relación con la ausencia de actividad antibacteriana del extracto frente a las bacterias gramnegativas: E. coli, K. pneumoniae y S. thyphimurium, pudiese estar dado porque estas bacterias presentan una compleja estructura de su pared celular, constituida solo por 5 a 10 % de muranilpéptidos, lo que llevaría a obtener una menor sensibilidad al extracto, esta membrana externa que actúa como barrera para muchas sustancias13, incluidos los antibióticos.14-16
El resultado de irritabilidad vaginal mínima con el extracto acuoso a 20 % de hojas secas de S. americanum y la evaluación de la irritabilidad dérmica con el extracto acuoso a 30 % de hojas secas con irritación primaria de cero está en correspondencia con otros estudios realizados,2 lo que se pudiera explicar en parte por la presencia de taninos entre otros compuestos químicos, demostrada por tamizaje,2,3 estos son polifenoles con acción astringente, antimicrobiana, antifúngica e inhibitoria enzimática. Además de conocerse la utilización tradicional de esta planta medicinal para el tratamiento de úlceras tópicas, como antiherpético, antiinflamatorio y antiséptico en enfermedades de la piel.3
Se concluye que la decocción de hojas secas de S. americanum mostró actividad antimicrobiana frente a Candida albicans y no frente a los otros microorganismos, presentó irritabilidad mínima en vagina y clasificó como no irritante en piel, por lo que pueden ser empleadas en afecciones provocadas por C. albicans tanto en piel como en vagina.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
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Recibido: 25 de noviembre de 2008.
Aprobado: 12 de enero de 2009. ]]>
Lic. María Julia Martínez. Laboratorio Central de Farmacologia (LCF). Facultad de Ciencias Médicas «Dr. Salvador Allende» Carvajal entre Agua Dulce y A, Cerro. Ciudad de La Habana, CP 12000, Cuba. Teléf.: (53-7) 877-6661 Ext. 1049. Correo electrónico: juliamg@infomed.sld.cu ]]>