Empleo de placas filtrantes cubanas en el proceso de producción de melagenina loción

RESUMEN

Descriptores DeCS: LIPOPROTEINAS; EXTRACTOS PLACENTARIOS; CALIDAD DE LOS MEDICAMENTOS; FILTRACION; INDUSTRIA FARMACEUTICA.

El vitiligo es una enfermedad en la cual se pierde progresivamente el color de la piel, se caracteriza por la aparición de manchas blancas en el rostro, las extremidades y la región genital.¹ Se conoce que en la melagenina loción existe un factor melanocitopoyético identificado como una lipoproteína de bajo peso molecular que ha demostrado su eficacia en la cura del vitiligo.¹

El presente trabajo tiene como objetivo la posibilidad de empleo de placas filtrantes de producción nacional, modelo Filtec 00, elaborada en la Unión Investigación Producción (UIP) Cuba 9, Quivicán, en la estación de filtración de la Planta de Histoterapia Placentaria para la producción de la melagenina loción.

MÉTODOS

Se emplearon placas de 34 x 34 cm de celulosa tipo Filtec 00 que según criterios del fabricante presentan las especificaciones técnicas siguientes:

Filtrabilidad: 1 300 L/m² min

Agua: 1 atm

Espesor: 2,5 mm

Peso básico: 950 g/m²

Trabajo preliminar de laboratorio: Se tomaron 100 mL de un extracto de melagenina loción y se filtraron a través de las placas filtrantes de referencia. Se realizó el análisis de residuos secos por evaporación antes y después de filtrado; la diferencia obtenida de los residuos secos da una medida de la cantidad de sólidos insolubles retenidos en la placa. La relación con respecto a los sólidos totales multiplicados por 100 permite calcular el porcentaje de remoción de sólidos insolubles empleando la placa filtrante cubana según la ecuación: ]]> % Remoción= (Rs(0)-Rs (1)*100/Rs(0)

donde: Rs(0) y Rs(1) son los residuos por evaporación de 5 mL de solución obtenidos antes y después de filtrado por la placa. Se tiene en cuenta el análisis mediante espec-troscopia de absorción UV a 2 longitudes de onda de 263 y 410 nm, característico del espectro de la melagenina, donde se midió la absorbancia antes y después de filtrar, haciendo el análisis por sextuplicado.

Proceso tecnológico. El proceso en cuestión constó de 3 etapas de extracción y 3 de filtración, en el que se emplearon alcohol etílico comercial como solvente y decalite como medio filtrante.

Las etapas de filtración se realizaron en un filtro prensa modelo Wolhfarth con 24 placas de celulosa de producción nacional fabricadas en la UIP Cuba 9.

Se midieron como parámetros de operación, la presión manométrica del equipo (bar), el tiempo de filtración (minutos), el volumen de fluido a filtrar y el extracto filtrado en litros.

El proceso descrito se realizó para 2 lotes de melagenina loción con el empleo del mismo tipo de placa.

Técnicas analíticas de control

Control químico. Este se realizó para cada producto extraído del filtro como es pH, densidad (g/mL), porcentaje de alcohol, residuos de evaporación (mg/100mL), L-do-pa (L-dihidroxifenilalanina) (mg/mL), nitrógeno total (mg/100mL).^2-4 Estos resultados se compararon con los rangos límites establecidos para el producto y una melagenina tomada como referencia.

Control biológico. Para corroborar la efectividad del medicamento se realizaron algunos ensayos biológicos, y con este fin se montaron y trataron 3 grupos de animales, donde se midió una media en el conteo de melanocitos/mm² para cada grupo. Estos datos se procesaron estadísticamente según la prueba de Kruskal-Wallis y la prueba complementaria de Student-Newman-Kesels (SNK)⁵ para un nivel de significación de 0,001.

Fraccionamiento proteico con el empleo de cromatografía líquida. Como medida de comparación entre las diferentes fracciones proteicas que forman parte del medicamento obtenido con el empleo de las placas cubanas, se realizó un fraccionamiento proteico mediante una técnica de filtración por gel, para lo cual se utilizó una columna rellena con Sephadex LH-20 preparada con un sistema de solventes etanol: agua (1,8:1). Este trabajo se realizó en un equipo de cromatografía líquida a bajas presiones conocido como FPLC de la firma Pharmacia-LKB con las condiciones experimentales siguientes:

• Forma de ejecución: manual.
]]> Forma de elución: isocrática.

RESULTADOS

No.	Rs(0)	Rs(1)	Ab263(0)	Ab410(0)	Ab263(1)	]]> Ab410(0)
1	0,0042	0,0008	2,675	1,050	2,421	0,690
2	0,0040	0,0008	2,717	]]> 1,038	2,542	0,742
3	0,0040	0,0008	2,712	1,015	2,414	0,663
4	0,0040	]]> 0,0008	2,879	1,046	2,238	0,697
5	0,0041	0,0008	2,876	1,059	2,275	]]> 0,742
6	0,0041	0,0008	2,869	1,065	2,657	0,799
	0,0041	0,00073	2,788	]]> 1,0455	2,4245	0,7155

En la tabla 2 se reportan los parámetros de operación del filtro para el primero y segundo lotes de melagenina con el empleo de placas filtrantes cubanas.

El análisis de control de proceso se comportó muy similar para ambos lotes con valores iguales a los obtenidos cuando se emplean otros sistemas de filtración con-vencionales (tabla 3).

El análisis de control químico permitió establecer criterios acerca de los productos filtrados a través de las placas cubanas. En la tabla 4 se presentan algunos análisis de control químico, así como sus rangos permisibles tanto para el lote 1 como para el 2.

Pb: placebo; GII M-Ind y M-Ind: melagenina industrial tomada como referencia interna.

En la tabla 5 se refleja el conteo de melanocitos/mm² y los rangos muestrales comparando el placebo (alcohol sin principio activo) GI, el primer lote experimental GII y la melagenina industrial tomada como referencia GIII.

DISCUSIÓN

Durante el control del proceso al comparar ambos lotes entre sí, se observa similitud en los tiempos de filtración a pesar de que los volúmenes a filtrar son ligeramente diferentes. Esto es una medida de la reproducibilidad en el nivel de compactación de la torta de decalite en las placas para cada lote.

De acuerdo con los análisis de control químico se observan resultados similares en los diferentes controles realizados entre ambos lotes.

La efectividad como medicamento se comprobó al realizarse el análisis biológico. Según éste no hay diferencias significativas entre este lote y el lote industrial tomado como referencia interna, lo que permite su empleo en el tratamiento del vitiligo.

En los cromatogramas obtenidos del lote industrial tomado como referencia y el primer lote obtenido con el empleo de placas cubanas (fig.), se observan diferentes fracciones de proteínas que se pueden superponer de un lote a otro. Hay 3 fracciones bien definidas y un hombro que coinciden en ambos lotes. Estas fracciones presentan similares tiempos de retención.

Se obtuvieron 2 lotes cuyos parámetros de control analítico coinciden con el medicamento obtenido al emplear las placas convencionales de importación.

Se logró realizar un fraccionamiento proteico en uno de los lotes obtenidos con el empleo de las placas filtrantes cubanas y se comparó con el patrón de referencia industrial interna mediante un sistema de filtración por gel; los resultados obtenidos fueron similares.

SUMMARY

Subject headings: LIPOPROTEINS; PLACENTAL EXTRACTS; DRUG QUALITY; FILTRATION; DRUG INDUSTRY.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Osa JA de la. Desafiando lo incurable. Revelaciones del Dr. Carlos Miyares Cao. Aporte cubano al tratamiento del vitiligo. Madrid:Editorial Sangura;1996:23-4.
2. Clark JM, Fremn WH. Determination a-aminos libres. Experimental Biochemistry 1964;20:563.
3. Boehringer Mannhein Gubh. Diagnostic Watson D. Test combination colesterol. Clin Chem Acta 1960;5:10.
4. The United State Pharmacopeia 23. Tautan: Rand Mc Nallv;1995:1745. Sigarroa A. Biometría y diseño experimental I parte. La Habana:Editorial Pueblo y Educación;1985:29.