Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos
Alfredo Fernández Serret,1 Reynaldo García Pereira,2 Maricela Lara Castro,3 Rafael León Rodríguez 4 y Esther Alonso Jiménez5
Se desarrolló y validó un método por espectrofotometría ultravioleta para evaluar los perfiles de disolución de las tabletas de pentoxifilina de liberación controlada. Se comprobó la condición de insaturación de la pentoxifilina en el medio de disolución empleado y se evaluaron los parámetros de especificidad, linealidad y precisión, así como la influencia de la filtración y la estabilidad del principio activo. Los resultados alcanzados demuestran la fiabilidad del método y su posibilidad de empleo en el control de la calidad del medicamento.
Palabras clave: Pentoxifilina, validación, ensayo de disolución, liberación controlada.
El ensayo de disolución constituye quizás el método más importante en el desarrollo de una forma sólida oral. Es empleado desde el comienzo del desarrollo de la formulación y utilizado en fases posteriores a este. Permite el estudio de los mecanismos de liberación de la droga en las formulaciones de liberación controlada y la obtención de un perfil de disolución predeterminado y reproducible. Es también utilizado para evaluar los procesos de fabricación e identificación de las variables críticas de este, permite el estudio de la calidad intralotes e interlotes, el estudio de estabilidad del preparado farmacéutico y en algunos casos predice la biodisponibilidad y bioequivalencia de productos sólidos orales.1, 2
Diferentes compañías farmacéuticas reportan métodos para evaluar la liberación in vitro de pentoxifilina en tabletas de liberación controlada. Las condiciones establecidas consisten en emplear agua destilada desgasificada como medio de disolución y un volumen equivalente a 900 mL. Utilizan indistintamente el aparato I (cesta rotatoria) o el aparato II (paleta) con velocidades de agitación de 100 y 75 min-1 respectivamente. La cuantificación del principio activo la realizan por espectrofotometría UV o por cromatografía líquida de alta eficiencia.3-6
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Como sustancia de referencia se empleó materia prima de pentoxifilina de la firma japonesa SHIRATORI Pharmaceutical Co., Ltd, perteneciente al lote 3000503 y valorada previamente en el Departamento de Patrones de los Laboratorios del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos (CIDEM).
Para la realización de este estudio se emplearon placebos revestidos y muestras correspondientes a los lotes 99001 y 99002 de tabletas de pentoxifilina. El agua destilada empleada responde a la calidad requerida para este tipo de análisis.
Las condiciones del ensayo de disolución utilizadas para la evaluación de los perfiles fueron:
Las mediciones se realizaron en un espectrofotómetro UV-Vis de la marca Spectronic Genesys 2 PC.
Se comprobó la condición de insaturación tomando en consideración la solubilidad de la pentoxifilina en agua a 37 °C reportada en la literatura.11 Debe cumplirse que Cs £ 0,15 S, donde Cs representa la concentración máxima de pentoxifilina disuelta en las condiciones de ensayo y S es la solubilidad de la pentoxifilina en agua a 37 °C.
Este estudio se realizó con el empleo de 6 unidades del placebo revestido y según el procedimiento descrito para el ensayo de disolución.
En este estudio se emplearon muestras de 6 unidades de los lotes 99001 y 99002, y se evaluaron en 2 días diferentes.
Con el objetivo de probar la posible interferencia del sistema de filtración empleado, se analizaron 6 unidades del lote 99002 y se compararon entre sí los resultados de las muestras filtradas con papel de filtración medio-rápida con las muestras centrifugadas a 3 000 min-1 por espacio de 10 min.
Para este estudio se analizó la estabilidad de la curva de calibración de la pentoxifilina, con concentraciones de 5, 10 y 15 mg/mL, las mediciones se realizaron antes y después del tratamiento (24 h a 37 °C).
Todos los resultados obtenidos fueron evaluados estadísticamente con la ayuda del programa Origin Version 5.0 para Windows.
Según reporta la literatura,11 la solubilidad (S) de la pentoxifilina es de 191 mg/mL a 37 °C. Teniendo en cuenta la dosis de la tableta (400 mg) y el volumen empleado del medio de disolución (900 mL), se calculó la condición de insaturación. La concentración máxima que alcanza la pentoxifilina en el ensayo de disolución es de 0,4444 mg/mL, mientras que el valor de 0,15 S es equivalente a 28,65 mg/mL.
En la tabla 1 se presentan los resultados del estudio de especificidad donde se muestra la absorbancia de los placebos a diferentes tiempos.
TABLA 1. Resultados del estudio de especificidad
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Tiempo (h) | Absorbancia de los placebos | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | ]]> 6 | |
| 1 | 0,004 | 0,002 | 0,001 | 0,003 | 0,003 | 0,001 |
| 2 | 0,003 | ]]> 0,003 | 0,003 | 0,004 | 0,003 | 0,003 |
| 4 | 0,002 | 0,003 | 0,001 | 0,003 | ]]> 0,003 | 0,003 |
| 6 | 0,003 | 0,002 | 0,001 | 0,000 | 0,001 | 0,000 |
| 8 | ]]> 0,000 | 0,002 | 0,000 | 0,000 | 0,000 | 0,000 |
| 10 | 0,003 | 0,003 | 0,002 | ]]> 0,004 | 0,002 | 0,000 |
| 12 | 0,002 | 0,002 | 0,000 | 0,002 | 0,002 | 0,002 |
En la tabla 2 y 3 se exponen los resultados de este estudio al analizar los lotes 99001 y 99002 en 2 días diferentes. Se reportan además los valores de la prueba de la t de Student calculada para cada hora.
TABLA 2. Resultados del estudio de la precisión. Lote 99001
| Tiempo (h) | 1er día Concentración en %* | 2do día Concentración en % * | t cal |
| 1 | 17,95 | 18,12 | ]]> 0,5789 |
| 2 | 28,35 | 28,32 | 0,0523 |
| 3 | 36,48 | 36,70 | 0,4174 |
| 4 | ]]> 46,15 | 46,94 | 1,1742 |
| 5 | 52,77 | 53,74 | 1,0787 |
| 6 | 59,89 | 60,80 | ]]> 0,9287 |
| 7 | 66,08 | 67,02 | 0,9037 |
| 8 | 71,57 | 72,44 | 0,7696 |
| 9 | ]]> 76,89 | 77,64 | 0,6547 |
| 10 | 80,93 | 81,50 | 0,5830 |
| 11 | 85,17 | 85,29 | ]]> 0,1153 |
| 12 | 88,77 | 88,94 | 0,1686 |
| t tab (0,05; 10) = 2,23 |
* Valor promedio de 6 determinaciones.
]]> TABLA 3. Resultados del estudio de la precisión. Lote 99002| Tiempo (h) | 1er día Concentración en % * | 2do día Concentración en % * | t cal |
| 1 | 16,62 | 16,56 | 0,2451 |
| ]]> 2 | 26,18 | 26,53 | 0,8165 |
| 3 | 34,25 | 34,70 | 0,9573 |
| 4 | 43,94 | ]]> 44,57 | 0,9570 |
| 5 | 51,23 | 51,92 | 0,9679 |
| 6 | 57,74 | 58,53 | 1,1474 |
| ]]> 7 | 65,87 | 65,93 | 0,0712 |
| 8 | 70,82 | 71,35 | 0,6098 |
| 9 | 75,82 | ]]> 76,30 | 0,6051 |
| 10 | 80,48 | 81,22 | 1,1328 |
| 11 | 85,58 | 85,02 | 0,7126 |
| ]]> 12 | 88,60 | 88,80 | 0,1696 |
| ttab (0,05; 10) = 2,23 |
* Valor promedio de 6 determinaciones.
En la tabla 4 se presentan los resultados de las medias de los perfiles obtenidos al analizar el lote 99002 con el empleo de muestras filtradas y muestras centrifugadas, así como los valores de la prueba de la t de Student calculada para cada hora.
]]> TABLA 4. Resultados del estudio de la influencia de la filtración| Tiempo (h) | Muestras filtradas Concentración en % * | Muestras centrifugadas Concentración en % * | t cal |
| 1 | 17,78 | 17,65 | 0,4018 |
| 2 | ]]> 27,66 | 27,85 | 0,4488 |
| 3 | 36,86 | 36,49 | 0,7352 |
| 4 | 46,33 | 46,25 | ]]> 0,1098 |
| 5 | 53,18 | 53,22 | 0,0433 |
| 6 | 59,03 | 59,44 | 0,5583 |
| 7 | ]]> 65,44 | 65,34 | 0,1282 |
| 8 | 71,37 | 71,19 | 0,2349 |
| 9 | 75,82 | 76,24 | ]]> 0,4953 |
| 10 | 81,60 | 82,20 | 0,7906 |
| 11 | 85,95 | 85,49 | 0,4446 |
| 12 | ]]> 90,65 | 89,25 | 1,4868 |
| ttab (0,05; 10 ) = 2,23 |
* Valor promedio de 6 determinaciones.
Los resultados de la curva de calibración antes y después del tratamiento se presentan en la tabla 5.
]]> TABLA 5. Estabilidad del principio activo| Inicial | 24 h | ||
| Concentración (mg/mL) | Absorbancia | Concentración (mg/mL) | Absorbancia |
| 5,0 | ]]> 0,184 | 5,0 | 0,186 |
| 5,0 | 0,185 | 5,0 | 0,189 |
| 5,0 | 0,187 | 5,0 | ]]> 0,188 |
| 10,0 | 0,364 | 10,0 | 0,368 |
| 10,0 | 0,363 | 10,0 | 0,365 |
| 10,0 | ]]> 0,366 | 10,0 | 0,370 |
| 15,0 | 0,538 | 15,0 | 0,540 |
| 15,0 | 0,536 | 15,0 | ]]> 0,539 |
| 15,0 | 0,539 | 15,0 | 0,541 |
| Intercepto = 0,0101 a ± t Sa [0,0060; 0,0141] Pendiente = 0,0352 b ± t Sb ]]> [0,0348; 0,0355] | Intercepto = 0,0127 Pendiente = 0,0352 | ||
Se comprueba que se cumple la condición de insaturación en el ensayo, pues la concentración máxima que alcanza la pentoxifilina (Cs) es de 0,4444 mg/mL, valor muy inferior al 0,15 S equivalente a 28,65 mg/mL.
Los valores de absorbancia obtenidos en el estudio de especificidad para los placebos pueden considerarse despreciables si se tiene en cuenta que una absorbancia de 0,004 representa solamente el 0,6 % de principio activo liberado. Estos resultados permiten afirmar que el método es específico en relación con los excipientes que componen la tableta, ya que prácticamente no se obtiene señal cuantificable en el máximo de absorción.
La curva de calibración a 275 nm se comportó de forma lineal en el intervalo de concentraciones comprendidas entre 0,64 y 19,2 mg/mL Se comprobó el cumplimiento de la ley de Lambert-Beer en el intervalo de concentraciones estudiado por el elevado valor del coeficiente de correlación alcanzado. El valor de la desviación estándar relativa resultó adecuado si se tiene en cuenta que el valor aceptable debe ser menor o igual que 2 %. De igual forma, no hubo significación en el intercepto de la curva. Además, se pudo comprobar que el procedimiento desarrollado permite evaluar niveles tan bajos como el 3,6 % de pentoxifilina liberada.
Los resultados del estudio de la precisión muestran que el método es preciso ya que en todos los casos no existieron diferencias significativas entre las medias para cada hora. Como se observa la tcalc resultó ser menor que la ttab. ]]>
An ultraviolet spectrophotometry method was developed and validated to evaluate the dissolution profiles of the controlled-release pentoxiphillin tablets. The unsaturation condition of pentoxiphillin in the dissolution medium used was proved and the specificity, lineality and accuracy parameters, as well as the influence of filtration and stability of the active principle, were evaluated. The results obtained showed the reliability of the method and the possibility to use it in the quality control of the drug.
Key words: Pentoxiphillin, validation, dissolution test, controlled relea.
Recibido: 8 de enero de 2004. Aprobado: 13 de febrero de 2004.
MSc. Alfredo Fernández Serret. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave 26, No. 1 605 entre Boyeros y Puentes Grandes, municipio Plaza de la Revolución, CP 10 600, Ciudad de La Habana, Cuba.
1 Master en Ciencias. Investigador Auxiliar.
2 Master en Ciencias. Investigador Aspirante.
3 Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Investigador Aspirante.
4 Licenciado en Química. Investigador Auxiliar. ]]>
5 Técnica en Tecnología Farmacéutica.
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