PRODUCTOS NATURALES

Estudios preliminares de estabilidad de un extracto lipídico de los frutos de Roystonea regia en frascos de vidrio ámbar

Preliminary studies of a lipid extract stability from the fruits of Roystonea regia in amber glass flasks

Roxana de la Caridad Sierra Pérez^I; Eduardo Antonio Rodríguez Leyes^II; Víctor Luis González Canavaciolo^III; David Marrero Delange^III; Roxana Vicente Murillo^IV ]]>

^IMáster en Ciencias en Química Farmacéutica. Investigadora Agregada. Centro de Productos Naturales, Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC). La Habana, Cuba.
^IIMáster en Ciencias en Química Analítica. Investigador Agregado. Centro de Productos Naturales, CNIC. La Habana, Cuba.
^IIIDoctor en Ciencias Farmacéuticas. Investigador Auxiliar. Centro de Productos Naturales, CNIC. La Habana, Cuba.
^IVTécnico Medio en Química Industrial. Centro de Productos Naturales, CNIC. La Habana, Cuba.

RESUMEN ]]> El D004 es un nuevo ingrediente activo extraído de los frutos de la palma real cubana (Roystonea regia), promisorio en el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna. Para determinar su estabilidad en frascos de vidrio ámbar, se realizaron estudios donde las muestras se sometieron a diferentes condiciones. En condiciones de estrés se observó que el D004 es susceptible a la degradación térmica y oxidativa. En condiciones aceleradas (40 ± 2 ºC y 75 ± 5 % humedad relativa) no se observaron cambios significativos en ninguno de los parámetros evaluados durante 12 meses, lo que permitió predecir un tiempo de vida útil de al menos 2 años en condiciones menos drásticas. Esto fue corroborado en las condiciones de las zonas climáticas II (25 ± 2 ºC y 60 ± 5 % humedad relativa) y IV (30 ± 2 ºC y 70 ± 5 % humedad relativa).

Palabras clave: Estabilidad, frascos de vidrio ámbar, Roystonea regia.

ABSTRACT

The D004 is a new active ingredient extracted from the Cuban real palm (Roystonea regia), promising in the treatment of the benign prostatic hyperplasia. To determine its stability in amber glass flasks studies were conducted where samples underwent different conditions. In stress situations D004 is sensitive to the thermal and oxidative degradation. Under accelerated conditions (40 ± 2 ºC ad 75 ± 5 % of relative humidity) there weren't significant changes in any assessed parameters during 12 months allowing predicting a useful life time of at least 2 years under less drastic conditions. It was corroborated under climatic conditions II (25 ± 2ºC and 60± 5% of relative humidity and IV (30 ± 2 ºC and 70 ± 5 % of relative humidity).

Key words: Stability, amber glass flasks, Roystonea regia.

INTRODUCCIÓN

El D004 es un nuevo ingrediente activo oleoso obtenido a partir del fruto de la palma real (Roystonea regia), compuesto por ácidos grasos libres entre 8 y 18 átomos de carbono, el cual ha demostrado reducir la hiperplasia prostática inducida por testosterona en modelos experimentales.^1,2 Teniendo en cuenta el uso potencial del D004 en el tratamiento de esta afección, así como la importancia del conocimiento Químico-Farmacéutico de toda sustancia activa nueva, se abordaron los estudios de estabilidad del D004 en frascos de vidrio ámbar. Para esto se partió de estudios previos donde se encontró que este frasco es el que mejor lo protege de la degradación.^3,4 ]]>

MÉTODOS

Muestras de 3 lotes de D004, suministradas por el Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC, La Habana, Cuba), se sometieron a 3 tipos de estudios:

Estudio de estrés: El lote 210105 fue sometido a oxidación con H₂O₂ al 30 % y a fotólisis con luz ultravioleta a 254 nm, en ambos casos durante 7 días a temperatura ambiente, así como a termólisis a (180 ± 2 ºC) durante 7 días. Se determinó el contenido total de ácidos grasos (CTAG) por cromatografía gaseosa según un método validado,⁵ y se compararon los contenidos de las muestras estresadas con el contenido de la muestra sin estresar.

Estudio acelerado: Las muestras (lotes: 210105, 250105 y 280105), se colocaron a 40 ± 2 ºC y 75 ± 5 % de humedad relativa (HR), se evaluaron las características organolépticas (CO), la densidad relativa (DR), el índice de refracción (IR) y el contenido microbiológico (CM), según las metodologías descritas en la USP 27,⁶ aunque el peso principal lo llevó la determinación del CTAG. Los muestreos se realizaron de forma aleatoria al inicio, al mes y a los 2, 3, 6, 9, y 12 meses, excepto el ensayo microbiológico que se realizó al inicio, a los 12 y 24 meses.

Estudio a largo plazo: Las muestras se colocaron bajo las condiciones de las zonas climáticas II (25 ± 2 ºC y 60 ± 5 % HR) y IV (30 ± 2 ºC y 70 ± 5 % HR), se evaluaron los mismos parámetros que en el estudio acelerado. Los muestreos se realizaron aleatoriamente al inicio y a los 3, 6, 9, 12, 18 y 24 meses, excepto el ensayo microbiológico que se realizó al inicio y posteriormente una vez al año.

Para la determinación del CTAG se empleó un cromatógrafo de gases (Shimadzu, Japón), con detector de ionización por llama (DILL) acoplado a una computadora personal con software especializado para el procesamiento de los datos. Los análisis estadísticos se realizaron mediante la aplicación de la prueba de c² para comprobar la normalidad, la prueba de Fisher para el análisis de varianza y la comparación de medias por la prueba de la t de Student para muestras dependientes (p< 0,05) con el paquete de programas Estadística para Windows, instalado en una computadora personal.

RESULTADOS

En el estudio de estrés, las condiciones de fotólisis no provocaron disminución en el CTAG (tabla 1). En cambio, las condiciones de oxidación y termólisis sí provocaron disminuciones significativas en el CTAG según la prueba t de Student (p< 0,05). En estos casos se vieron afectados fundamentalmente los ácidos grasos insaturados: el C_18:1 disminuyó su contenido en 20,3 y 8,5 % en condiciones de oxidación y de termólisis, respectivamente; mientras el C_16:1 disminuyó su contenido en un 50 % en ambas condiciones. ]]> En el ensayo acelerado no se observaron afectaciones en los parámetros de calidad evaluados (tabla 2), los cuales se mantuvieron dentro de los límites de aceptación que caracterizan al D004 (CTAG³ 85 %; DR= 0,82-0,97 e IR=1,440-1,462). Así se obtuvo en todos los muestreos, que el ingrediente activo era un líquido oleoso traslúcido, de color pardo oscuro, con DR de 0,874-0,908 g/mL, e IR de 1,447-1,457. La variación en el CTAG de los 3 lotes con respecto al contenido inicial fue muy pequeña (CV< 2 %), por lo que no fue necesario realizar una comparación estadística.³

Tabla 2. Resultados del estudio de estabilidad acelerada del D004 (40 ± 2 °C y 75 % de humedad relativa)

No se encontraron diferencias significativas (p< 0,05)
DR: densidad relativa; IR: índice de refracción; CTAG: contenido total de ácidos grasos.
Las características organolépticas fueron líquido oleoso traslúcido de color pardo durante todo el estudio

]]> Durante los estudios de estabilidad a largo plazo, se observó que tanto en las condiciones de la zona climática II, como de la zona climática IV, los 3 lotes mantuvieron durante 24 meses la DR, el IR, el CM, el CO, y el CTAG dentro de los límites establecidos (tabla 3).

]]> DISCUSIÓN

Aunque se midieron varios parámetros de calidad, se consideró el CTAG como el de mayor peso para definir la estabilidad de este ingrediente activo, por estar relacionado directamente con su efecto farmacológico. Por ello, teniendo en cuenta los resultados del ensayo de estrés se debe tratar de evitar que el D004 sufra condiciones propicias a la ocurrencia de procesos de oxidación y termólisis, pues quedó demostrado que estas eran sus 2 vías fundamentales de degradación. Tomando en consideración que durante los 12 meses que duró el ensayo acelerado no se produjeron modificaciones en ninguno de los parámetros evaluados, se puede predecir que el D004 será estable al menos por 24 meses.³ Atendiendo a los resultados de los estudios de estabilidad a largo plazo, que son los que en última instancia definen el tiempo de vida útil de una sustancia activa, se puede considerar que el D004 es estable al menos por 24 meses en las condiciones de la zona climática II y de la zona IV^3,4 a la que pertenece Cuba, resultados estos que confirman la predicción hecha a partir del estudio acelerado. Este tiempo pudiera extenderse en dependencia de los resultados que se obtengan en muestreos posteriores.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Arruzazabala ML, Carbajal D, Más R, Molina V, González V, Rodríguez E. Preventive effect of D-004, a lipid extract from Cuban royal palm (Rostoynea regia) fruits, on testosterone -induced prostate hyperplasia in intact and castrated rodents. Drugs Exp Clin Res. 2004; 30(5-6): 227-33.

2. Carbajal D, Molina V, Mas R, Arruzazabala ML. Therapeutic effect of D-004 e lipid extract from Roystonea regia fruits on prostate hyperplasia induced in rats. Drugs Exp Clin Res. 2005;31,193-7

3. Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos. Regulación No. 24-Requerimientos de los estudios de estabilidad para el registro de nuevos ingredientes farmacéuticos activos. La Habana: CECMED; 2000.

4. ICH Harmonized Tripartite Guideline Stability. Testing of New Drug Substances and Products, 1993.

5. Rodríguez-Leyes EA, Marrero D, González VL, Sierra R, Adames Y. Validación de un método por cromatografía de gases para la determinación de los ácidos grasos que componen el D-004 ingrediente activo. Revista CENIC Ciencias Químicas. 2009;40(1) (en prensa).

6. The United Stated Pharmacopoeia 27 and National Formulary 22 (USP27-NF22), Supplement 1 [CD-ROM]. Washington: The United States Pharmacopeial Convention, Inc; 2004.

Recibido: 8 de abril de 2010.
Aprobado: 17 de mayo de 2010.

M. C. Roxana de la Caridad Sierra Pérez. Centro de Productos Naturales, Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC). Calle 198 entre 19 y 21, Atabey, municipio Playa, Apartado Postal 6414, La Habana, Cuba. Correo electrónico: roxana.sierra@cnic.edu.cu

]]> 1 2004 30 5-6 5-6 227-33 2 2005 31 193-7 3 Centro para el Control Estatal de la Calidad de los Medicamentos 2000 4 1993 5 2009 40 1 1 6 2004