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<publisher-name><![CDATA[Editorial Ciencias Médicas]]></publisher-name>
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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Estado redox en pacientes infectados por VIH/sida con insuficiencia renal crónica sometidos a hemodiálisis]]></article-title>
<article-title xml:lang="en"><![CDATA[The redox state of VIH/AIDS patients suffering chronic renal failure and undergoing hemodyalisis]]></article-title>
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<institution><![CDATA[,Hospital de Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí Laboratorio de Farmacología Clínica ]]></institution>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[Introduction: the altered redox balance in chronic renal failure has been considered a contributing factor to morbidity and mortality from this disease and as an AIDS progression-associated factor. Objective: to assess the redox state in HIV patients suffering chronic renal failure that requires haemodialysis. Methods: a case-control study was conducted in 20 HIV/AIDS patients with chronic renal failure and in 40 apparently healthy individuals. Estimations of malonildialdehyde, gluthatione, superoxide dismutase, catalase, advanced products from protein oxidation, hydroperoxides and peroxidation potentials, as well as progression markers such as T CD4+ lymphocyte count, viral load and a series of hemochemical and hematological determinations were all made. The analysis was made before, 30 minutes and 240 min after the dialysis. The assumptions of variance equality and variable normality were verified, and accordingly, a parametric or non-parametric test was applied. The result was significant for p< 0,05. Results: the redox state indicators were found to be altered in the studied patients when they were compared to the supposedly healthy group before hemodialysis. It was shown that the values of malondialdehyde, advanced products from protein oxidation, superoxide dismutase were high and significant whereas catalase and gluthatione had lower values after 240 minutes of dialysis, except for hydroperoxides that did not change. The plasma viral load decreased significantly in this process. Conclusions: the results suggested that the dialysis in this type of patients favors the oxidative stress, together with the reduction of the plasma viral load. The study grants some methodological value to the management of these patients and to the search for a better quality of life.]]></p></abstract>
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</front><body><![CDATA[ <p align="right"><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">    <B>ART&Iacute;CULO ORIGINAL</B></font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="4"><b>Estado redox    en pacientes infectados por VIH/sida con insuficiencia renal cr&oacute;nica    sometidos a hemodi&aacute;lisis </b></font></p>     <p>&nbsp;</p>     <p><b><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="3" color="#000000">The    redox state of VIH/AIDS patients suffering chronic renal failure and undergoing    hemodyalisis</font></b></p>     <p>&nbsp;</p>     <p>&nbsp;</p> <B>    <P>      <P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Dra. Olga Casta&ntilde;o    Araujo, Dra. Lizette Gil del Valle, Lic. Daysi Agete Estrada, Lic. Maite Caballero    G&oacute;ngora, Lic. Yoandra Abad Lamoth, Lic. Odalys Calder&oacute;n Fuentes,    Lic. Wilder Rodr&iacute;guez Soto, Dra. Daym&eacute; Hern&aacute;ndez Requejo,    Dr. Rolando T&aacute;panes Peraza </font> </B>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Hospital del Instituto    de Medicina Tropical &quot;Pedro Kour&iacute;&quot; (IPK). La Habana, Cuba.    </font>     <P>&nbsp;     <P>&nbsp;     <P><hr size="1" noshade>     <p><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>RESUMEN </B></font>  </p>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Introducci&oacute;n:</b>    el balance redox alterado en el curso de la insuficiencia renal cr&oacute;nica    ha sido considerado un factor contribuyente a la morbilidad y mortalidad de    la enfermedad y un factor asociado a la progresi&oacute;n de la infecci&oacute;n    por sida.    <br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Objetivo:</B>    valorar el estado redox en pacientes infectados por VIH con insuficiencia renal    cr&oacute;nica que requirieron hemodi&aacute;lisis.    <br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>M&eacute;todos:</B>    se realiz&oacute; un estudio de casos y controles en 20 pacientes VIH/sida con    insuficiencia renal cr&oacute;nica y 40 individuos aparentemente sanos. Se realizaron    determinaciones de malonildialdeh&iacute;do, glutati&oacute;n, super&oacute;xido    dismutasa, catalasa, productos avanzados de la oxidaci&oacute;n de prote&iacute;nas,    hidroper&oacute;xidos y potencial de peroxidaci&oacute;n, conjuntamente con    los marcadores de progresi&oacute;n: conteo de linfocitos T CD4+ y carga viral    y una serie de determinaciones hemoqu&iacute;micas y hematol&oacute;gicas. El    an&aacute;lisis se realiz&oacute; antes, a los 30 min y a los 240 min del tratamiento    dial&iacute;tico. Estad&iacute;sticamente se verificaron los supuestos de igualdad    de varianza y normalidad de las variables, y en dependencia se aplic&oacute;    una prueba param&eacute;trica o no param&eacute;trica. El resultado fue significativo    para p&lt; 0,05.    <br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Resultados:</B>    los indicadores del estado redox se encontraron alterados en los pacientes estudiados    con respecto al grupo supuestamente sano antes de la hemodi&aacute;lisis. Se    mostr&oacute; un valor mayor significativo (p&lt; 0,05) de los &iacute;ndices    malonildialdeh&iacute;do, productos avanzados de la oxidaci&oacute;n de prote&iacute;nas,    super&oacute;xido dismutasa, y un valor menor de catalasa y glutati&oacute;n    a los 240 min de realizada la di&aacute;lisis, con la excepci&oacute;n de los    hidroper&oacute;xidos que no mostraron cambios. La carga viral plasm&aacute;tica    disminuy&oacute; de manera significativa en el proceso.    ]]></body>
<body><![CDATA[<br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Conclusiones:</B>    los resultados sugieren que el proceso dial&iacute;tico en este tipo de pacientes    favorece el estr&eacute;s oxidativo, conjuntamente con una disminuci&oacute;n    de la carga viral plasm&aacute;tica. El estudio aporta valor metodol&oacute;gico    en el manejo de estos pacientes y en la b&uacute;squeda por mejorar su calidad    de vida. </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Palabras clave:    </B>hemodi&aacute;lisis, VIH, estr&eacute;s oxidativo, malondialdeh&iacute;do.    <hr size="1" noshade></font>     <P>      <P> <font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B> ABSTRACT </B></font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Introduction:</b>    the altered redox balance in chronic renal failure has been considered a contributing    factor to morbidity and mortality from this disease and as an AIDS progression-associated    factor.    <br>   <B>Objective:</B> to assess the redox state in HIV patients suffering chronic    renal failure that requires haemodialysis.    <br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Methods:</B>    a case-control study was conducted in 20 HIV/AIDS patients with chronic renal    failure and in 40 apparently healthy individuals. Estimations of malonildialdehyde,    gluthatione, superoxide dismutase, catalase, advanced products from protein    oxidation, hydroperoxides and peroxidation potentials, as well as progression    markers such as T CD4+ lymphocyte count, viral load and a series of hemochemical    and hematological determinations were all made. The analysis was made before,    30 minutes and 240 min after the dialysis. The assumptions of variance equality    and variable normality were verified, and accordingly, a parametric or non-parametric    test was applied. The result was significant for p&lt; 0,05.    <br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Results:    </B>the redox state indicators were found to be altered in the studied patients    when they were compared to the supposedly healthy group before hemodialysis.    It was shown that the values of malondialdehyde, advanced products from protein    oxidation, superoxide dismutase were high and significant whereas catalase and    gluthatione had lower values after 240 minutes of dialysis, except for hydroperoxides    that did not change. The plasma viral load decreased significantly in this process.    <br>   </font><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>Conclusions:</B>    the results suggested that the dialysis in this type of patients favors the    oxidative stress, together with the reduction of the plasma viral load. The    study grants some methodological value to the management of these patients and    to the search for a better quality of life. </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><b>Key words:</b>    hemodyalisis, HIV, oxidative stress, malondialdehyde. <hr size="1" noshade></font>      ]]></body>
<body><![CDATA[<p>&nbsp;</p>     <p>&nbsp;</p>     <P>      <P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B><font size="3">INTRODUCCION</font>    </B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El estr&eacute;s    oxidativo (EO) se define como la p&eacute;rdida del equilibrio entre la generaci&oacute;n    de oxidantes y la actividad antioxidante del sistema a favor de los primeros.<SUP>1</SUP>    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Las principales    sustancias oxidantes en los sistemas biol&oacute;gicos son los radicales libres    y otras especies reactivas que se denominan especies reactivas de ox&iacute;geno    (ERO). La mayor parte de estas sustancias derivan del ani&oacute;n super&oacute;xido    (O<SUB>2</SUB><SUP>.-</SUP>). El mismo proviene de la cadena respiratoria y    es continuamente producido por la membrana interna de las mitocondria en cantidades    peque&ntilde;as. Pero esta situaci&oacute;n cambia en respuesta a un est&iacute;mulo,    aumentando la producci&oacute;n de este ani&oacute;n a trav&eacute;s de la NADPH    oxidasa (nicotinamida adenina dinucleotido fosfato oxidasa).<SUP>2-4</SUP> </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En la patogenia    y evoluci&oacute;n de las enfermedades renales agudas o cr&oacute;nicas se ha    corroborado la participaci&oacute;n de ERO, con generaci&oacute;n de un estado    prooxidante, la presencia aumentada de da&ntilde;o oxidativo y la disminuci&oacute;n    de los antioxidantes.<SUP>5-8 </SUP>Esta condici&oacute;n as&iacute; como otros    factores constituyen dianas que con medidas apropiadas pudieran contrarrestar    el deterioro de los &oacute;rganos involucrados y del organismo en general.    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Durante la insuficiencia    renal cr&oacute;nica (IRC) se acumulan toxinas que no pueden ser eliminadas    por el ri&ntilde;&oacute;n y necesitan de terapias de reemplazo de la funci&oacute;n    renal (hemodi&aacute;lisis [HD] o di&aacute;lisis peritoneal) para ser eliminadas.</font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"> En el proceso    se pierden toxinas ur&eacute;micas pero simult&aacute;neamente tambi&eacute;n    hay p&eacute;rdidas importantes de amino&aacute;cidos, glucosa, p&eacute;ptidos    de bajo peso molecular y otros. Por consiguiente particularmente en las t&eacute;cnicas    de alta eficacia se produce una p&eacute;rdida de solutos entre ellos de sustancias    antioxidantes.<SUP>9,10</SUP> </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En el 2000, <I>Biasoli</I>    publica un trabajo en el cual compara el efecto de seis diferentes membranas    sobre la actividad antioxidante del plasma y de los eritrocitos, y comunica    que algunas membranas tienen efectos individuales.<SUP>11</SUP> La influencia    sobre la peroxidaci&oacute;n lip&iacute;dica es menor durante el empleo de hemophan    que con diacetato y sobre el sistema antioxidante del hemat&iacute;e, el polimetilmetacrilato,    incide con menor magnitud que el resto de las membranas.<SUP>12-14</SUP> </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"> En un intento    de restaurar las condiciones basales en el paciente con IRC o en pacientes que    est&aacute;n sometidos a HD, los m&eacute;dicos prescriben sustancias que pueden    empeorar el EO. La administraci&oacute;n de hierro (Fe<SUP>IV)</SUP> como metal    de transici&oacute;n es la principal fuente de radicales hidroxilos a trav&eacute;s    de la reacci&oacute;n de Fenton con la formaci&oacute;n del ani&oacute;n super&oacute;xido.<SUP>15</SUP>    Adem&aacute;s de los factores inherentes a cada individuo por la enfermedad    que lo condujo al IRC, se a&ntilde;aden otros asociados a fen&oacute;menos ateroscler&oacute;ticos    e inflamatorios.<SUP>16-19</SUP> </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En el caso de los    pacientes VIH/sida que tienen evidencias moleculares y cl&iacute;nicas de un    estado inflamatorio cr&oacute;nico y algunos llevan tratamiento antirretroviral,    los factores que influyen en la persistencia del EO tienen influencia de los    aspectos metab&oacute;licos asociados a la infecci&oacute;n viral.<SUP>20-22</SUP>    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Este trabajo se    propuso el objetivo de valorar el estado redox en pacientes infectados por VIH    con insuficiencia renal cr&oacute;nica que requirieron hemodi&aacute;lisis.</font>     <P>&nbsp;      <P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B><font size="3">M&Eacute;TODOS</font></B>    </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Se realiz&oacute;    un estudio de casos y controles, prospectivo de los pacientes cubanos infectados    por VIH de octubre de 2009 a mayo de 2011. Se consideraron incluidos adultos    diagnosticados con un ELISA reactivo para VIH (ELISA-UNIFORM VIH I/II plus Organon    Teknica). Este primer diagn&oacute;stico positivo fue confirmado por el ensayo    Western Blot (DAVIH BLOT VIH-I, DAVIH Lab). El grupo estuvo compuesto por 20    pacientes entre los 21 y los 58 a&ntilde;os de edad residentes todos en La Habana.    Como grupo control se utiliz&oacute; un grupo de 40 adultos supuestamente sanos,    verificados por su condici&oacute;n cl&iacute;nica al momento de la captaci&oacute;n    y por ex&aacute;menes de laboratorio dentro de los intervalos de referencia    considerados como normales. Todos residentes en La Habana, del mismo intervalo    de edad y g&eacute;nero que el grupo infectado por VIH (relaci&oacute;n 1:2).    Todos los individuos acuden al Servicio del Hospital del Instituto &quot;Pedro    Kour&iacute;&quot; (IPK). </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Las causas que    originaron la IRC son nefropat&iacute;as asociadas al VIH con etiolog&iacute;a    no filiada y otros. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Todos los pacientes    llevaban tratamiento dial&iacute;tico en m&aacute;quinas de HD FRESENIUS 4008S,    Alemania. Se emple&oacute; dializadores de polisulfona, durante 12 h semanales    y cat&eacute;ter tunelizado consiguiendo unos par&aacute;metros correctos de    dosis de di&aacute;lisis (Kt/V de Goth m&iacute;nimo de 1.2). Los individuos    en estudio recibieron eritropoyetina 12 000 U semanales y 100 mg de Fe intravenoso.    </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Los datos de la    evoluci&oacute;n cl&iacute;nica de estos individuos fueron por seguimiento activo    del facultativo especialista m&eacute;dico y enfermeras y se reflejaron en un    cuaderno de recogida de datos elaborado al efecto y en las historias cl&iacute;nicas    correspondientes. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Se les realiz&oacute;    una extracci&oacute;n de sangre previa a la di&aacute;lisis, a los 30 minutos    y a las 4 h de las que se obtuvo sangre total, suero y plasma.</font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Se utiliz&oacute;    sangre total para la determinaci&oacute;n de las subpoblaciones linfoides y    el suero y extractos de linfocitos y hemat&iacute;es fue utilizado para la determinaci&oacute;n    de los &iacute;ndices del estado redox, hemoqu&iacute;micos y plasma para la    carga viral. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Todos los procedimientos    fueron realizados seg&uacute;n lo aprobado por los Comit&eacute;s Internacionales    para ensayos en humanos (Declaraciones de Helsinki), los de &eacute;tica de    manejo del paciente VIH/sida, y de acuerdo con las regulaciones nacionales establecidas.    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El protocolo fue    sometido a la consideraci&oacute;n y fue aprobado por la Comisi&oacute;n Cient&iacute;fica    Especializada del Hospital y el Comit&eacute; de &Eacute;tica M&eacute;dica    del IPK. Los individuos involucrados firmaron un consentimiento informado de    acuerdo con su participaci&oacute;n en el estudio despu&eacute;s de conocer    de manera escrita y verbal los posibles riesgos y m&eacute;todos a seguir. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    <br>   Cuantificaci&oacute;n de los niveles de ARN viral</B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Se utiliz&oacute;    el sistema NucliSens HIV-1 QT de la casa comercial Biomerieux, Par&iacute;s,    Francia siguiendo los procedimientos recomendados por el fabricante. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    <br>   Cuantificaci&oacute;n de subpoblaciones linfocitarias</B> </font>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Se determinaron    por citometr&iacute;a de flujo, usando un cit&oacute;metro FACScan de Becton    Dickinson, California, Estados Unidos. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Los valores relativos    de los linfocitos T CD3+, CD4+, CD8+ se cuantificaron utilizando t&eacute;cnicas    est&aacute;ndar para triple marcaje, anticuerpos monoclonales y el programa    CellQuest de Becton Dickinson. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    <br>   Cuantificaci&oacute;n de &iacute;ndices hemoqu&iacute;micos y hematol&oacute;gicos    </B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Las variables utilizadas    para el estudio fueron hemoglobina, eritrosedimentaci&oacute;n, conteo de leucocitos    con diferencial, plaquetas, transaminansa pir&uacute;vica, urea, &aacute;cido    &uacute;rico, creatinina, prote&iacute;nas totales, alb&uacute;mina, &iacute;ndice    alb&uacute;mina/globulina, colesterol y triglic&eacute;ridos.</font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En la determinaci&oacute;n    de la funci&oacute;n hematol&oacute;gica se utiliz&oacute; el contador hematol&oacute;gico    micro 60 de la firma ABX Diagnostic, Montpellier, Francia, cuyos reactivos est&aacute;n    certificados, y la eritrosedimentaci&oacute;n se hizo por el m&eacute;todo cl&aacute;sico    de Wintrobet basado en la proporci&oacute;n anticoagulante sangre tratada con    citrato al 3,8 (1,8 molar) y montado en una pipeta de Westergreen. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Los reactivos utilizados    para la funci&oacute;n hep&aacute;tica y renal son comercializados por Boehringer    Mannheim Roche Diagnostic GmhH-D-68298 Mannhein, Alemania, y se utiliz&oacute;    un analizador autom&aacute;tico (BM/Hitachi 912). </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para todas estas    determinaciones se utiliz&oacute; el Manual de procedimientos del Departamento    de Laboratorio de Diagn&oacute;stico Cl&iacute;nico del Hospital del IPK. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    <br>   Cuantificaci&oacute;n de &iacute;ndices del estado redox </B> </font>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para la cuantificaci&oacute;n    de glutati&oacute;n (GSH), se emple&oacute; una modificaci&oacute;n de la t&eacute;cnica    descrita por <I>Riddles</I> (1983)<SUP>23</SUP> en la que se utiliza el reactivo    de Ellmans. A 200 &#181;L de plasma deslipidado se le adicionanron 50 &#181;L    de una soluci&oacute;n reci&eacute;n preparada compuesta por DTNB [5,5'-ditiobis    (2 &aacute;cido nitrobenzoico) y acetona. Se evalu&oacute; la absorbancia a    una longitud de onda de 412 nm. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para la determinaci&oacute;n    de malonildialdehido (MDA), se utiliz&oacute; la t&eacute;cnica descrita por    <I>Erdelmeier</I> y otros,1998.<SUP>24 </SUP>A 200 &#181;L de muestra se le    adicionaron 650 &#181;L de una soluci&oacute;n reci&eacute;n preparada compuesta    por 38 mg de n-metil 2 fenil indol en 18 mL de acetonitrilo y 6 mL de metanol.    La mezcla se agit&oacute; y se le a&ntilde;adi&oacute; 150 &#181;L de &aacute;cido    clorh&iacute;drico (HCl), luego se agit&oacute; nuevamente, incub&aacute;ndose    a 45 &#186;C durante 40 min. Despu&eacute;s de este tiempo se dej&oacute; enfriar    a temperatura ambiente y se centrifug&oacute; a 300 g durante 15 min. Cada soluci&oacute;n    resultante se ley&oacute; a 586 nm. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para la determinaci&oacute;n    de la susceptibilidad a la peroxidaci&oacute;n lip&iacute;dica (PP), se sigui&oacute;    la t&eacute;cnica de Ozdemirler y otros, 1995.<SUP>25</SUP> Se incubaron muestras    de suero con una soluci&oacute;n de sulfato de cobre II (2 mM, concentraci&oacute;n    final) a 37 &#186;C por 24 h. El PP se estim&oacute; sustrayendo del valor de    concentraci&oacute;n de MDA determinado a las 24 h el obtenido a tiempo cero.    </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para la determinaci&oacute;n    de los hidroper&oacute;xidos totales (HPO) se emple&oacute; el estuche diagn&oacute;stico    de Bioxytech H<SUB>2</SUB>O<SUB>2</SUB>-560 cat. 21024 (Oxis interntional Inc.    Portland USA). El ensayo se bas&oacute; en la oxidaci&oacute;n del ion ferroso    a f&eacute;rrico por los per&oacute;xidos org&aacute;nicos y el H<SUB>2</SUB>O<SUB>2</SUB>    en condiciones &aacute;cidas. </font>     <P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">La determinaci&oacute;n    de productos avanzados de oxidaci&oacute;n de prote&iacute;nas (PAOP), se realiz&oacute;    seg&uacute;n la t&eacute;cnica de <i>Witko-Sarsat</i> y otros, 1998,<SUP>26</SUP>    evaluando la transformaci&oacute;n de los iones yodo a yodo diat&oacute;mico    que provocan los PAOP siguiendo el cambio de densidad &oacute;ptica (DO) a 340    nm. Se utiliz&oacute; como patr&oacute;n cloramina T y los resultados se expresaron    como &#181;M de cloramina T. </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">La medici&oacute;n    de la actividad enzim&aacute;tica de las enzimas SOD y CAT se realiz&oacute;    en linfocitos. SOD seg&uacute;n el m&eacute;todo de Beyer y Fridovich, 1987.<SUP>27</SUP>    Como fuente de aniones super&oacute;xido se utiliz&oacute; la descomposici&oacute;n    catal&iacute;tica de la xantina por parte de la enzima xantina oxidasa. Se mide    la disminuci&oacute;n de la reducci&oacute;n del citocromo C mediante espectrofotometr&iacute;a    a una longitud de onda de 546 nm, y se expresa el resultado en &#181;/mg de    prote&iacute;na x min. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">La actividad de    catalasa (CAT) se determin&oacute; seg&uacute;n el m&eacute;todo de Clairbone,    basado en la descomposici&oacute;n de per&oacute;xido de hidr&oacute;geno en    agua y ox&iacute;geno a trav&eacute;s de la CAT, medido por espectrofotometr&iacute;a    a 240 nm; se expres&oacute; en &#181;/g de prote&iacute;na &times; min.<SUP>28</SUP>    </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para llevar a cabo    las determinaciones se utiliz&oacute; un espectrofot&oacute;metro Ultrospec    2000, de Pharmacia Biotech, Cambrigde, Inglaterra. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    ]]></body>
<body><![CDATA[<br>   An&aacute;lisis estad&iacute;stico</B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El an&aacute;lisis    estad&iacute;stico se realiz&oacute; con el paquete estad&iacute;stico SPSS    13 y el programa Minitab 14. Los valores se presentan como media &#177; desviaci&oacute;n    est&aacute;ndar (DE). Se verific&oacute; la normalidad de la distribuci&oacute;n    de cada variable (prueba Kolmogorov-Smirnov de una muestra). Para evaluar la    diferencia entre los dos grupos sida y controles, a pesar de la distribuci&oacute;n    normal de la mayor&iacute;a de las variables, se emple&oacute; la prueba U de    Mann Whitney dado el tama&ntilde;o de la muestra. La diferencia entre las medias    de los &iacute;ndices a los diferentes tiempos de extracci&oacute;n se verific&oacute;    mediante la prueba param&eacute;trica t de Student para muestras pareadas en    caso de homogeneidad de las varianzas o la de Wilcoxon en caso contrario. Para    las variables cualitativas se utiliz&oacute; la prueba chi cuadrado. El resultado    fue considerado como significativo para p&lt; 0,05.</font>     <P>&nbsp;      <P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B><font size="3">RESULTADOS</font>    </B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El an&aacute;lisis    de las actividades enzim&aacute;ticas antioxidantes en linfocitos muestra diferencias    significativas entre los controles y los pacientes en HD (<a href="/img/revistas/far/v46n4/t0105412.gif">tabla    1</a>). Los valores de SOD antes de la HD est&aacute;n significativamente disminuidos    respecto a los controles (p&lt; 0,05). En cuanto a CAT los valores son significativamente    mayores. El tratamiento hemodial&iacute;tico produce un aumento significativo    de la SOD que llega a valores sin diferencias significativas respecto a los    controles sanos. En el caso de CAT se produce una disminuci&oacute;n significativa    (p&lt; 0,05). </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">La concentraci&oacute;n    plasm&aacute;tica de GSH est&aacute; significativamente reducida en los pacientes    antes de la HD respecto a los controles (p&lt; 0,05). Despu&eacute;s de esta,    existe una disminuci&oacute;n del trip&eacute;ptido todav&iacute;a inferiores    a los del grupo control (<a href="/img/revistas/far/v46n4/t0105412.gif">tabla 1</a>).</font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En los pacientes    ur&eacute;micos tambi&eacute;n encontramos un aumento de la peroxidaci&oacute;n    lip&iacute;dica expresada por la producci&oacute;n aumentada de MDA e HPO. El    tratamiento con HD produce un aumento significativo en el MDA (p&lt; 0,05) y    no produce modificaci&oacute;n en los valores de HPO (p&gt; 0,05). </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En el an&aacute;lisis    de los valores de PP se pudo observar que son significativamente mayores los    valores iniciales de los pacientes con IRC con respecto a los controles. La    HD produce un aumento significativo de estos (p&lt; 0,05). </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En cuanto a los    PAOP, los valores de los pacientes son superiores de manera significativa respecto    a los controles (p&lt; 0,05). La HD tiene como efecto un aumento significativo    de los mismos (p&lt; 0,05). </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En la <a href="/img/revistas/far/v46n4/t0205412.gif">tabla    2</a> se muestra el an&aacute;lisis de cada par&aacute;metro de EO para establecer    los valores de corte. El proceso anterior fue llevado a cabo considerando el    90 percentil de la media de la poblaci&oacute;n supuestamente sana. Lo que nos    permitir&aacute; evaluar en cada paciente el grado de EO y la influencia de    la HD en la extensi&oacute;n del proceso. Este an&aacute;lisis tambi&eacute;n    se presenta en la <a href="/img/revistas/far/v46n4/t0205412.gif">tabla 2</a>. La mayor&iacute;a de los    &iacute;ndices fueron evaluados como moderados. La HD no tuvo una influencia    significativa sobre la extensi&oacute;n del da&ntilde;o oxidativo en estos pacientes.    </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En la <a href="/img/revistas/far/v46n4/t0305412.gif">tabla    3</a> se presentan los par&aacute;metros bioqu&iacute;micos y hematol&oacute;gicos.    Se observa una diferencia significativa en hemoglobina, polimorfonuleares, leucocitos,    monocitos, eosin&oacute;filos, &aacute;cido &uacute;rico, creatinina, prote&iacute;nas    totales, alb&uacute;mina y linfocitos T CD4+ al inicio de la HD con respecto    a los controles (p&lt; 0,05). En estos indicadores se producen alteraciones    propias asociadas al proceso de HD sin que representen modificaciones significativas    en la totalidad de ellos respecto al valor inicial previo a la HD y no se detect&oacute;    influencia en el conteo de linfocitos T CD4+. Se presentan modificaciones significativas    beneficiosas en urea, &aacute;cido &uacute;rico, creatinina y alb&uacute;mina    durante la HD (p&lt; 0,05).</font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En cuanto al an&aacute;lisis    de la carga viral al inicio y al final de la di&aacute;lisis se puede observar    en la <a href="/img/revistas/far/v46n4/t0405412.gif">tabla 4</a> una disminuci&oacute;n significativa    (p&lt; 0,05).</font>      <P>&nbsp;      <P>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B><font size="3">DISCUSI&Oacute;N</font>    </B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Existen estudios    previos que constatan la existencia de EO asociado a la infecci&oacute;n por    VIH<SUP>22,29,30</SUP> y adem&aacute;s en los pacientes con IRC.<SUP>3,8,31-33</SUP>    En ambos se manifiesta un aumento de los &iacute;ndices de oxidaci&oacute;n    y disminuci&oacute;n de las capacidades antioxidantes. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El hallazgo principal    del estudio es el aumento significativo de oxidantes lip&iacute;dicos y proteicos    en una poblaci&oacute;n sida con IRC durante el proceso de HD, as&iacute; como    el d&eacute;ficit de las defensas antioxidantes. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El estudio del    EO en estos individuos en di&aacute;lisis tuvo como intenci&oacute;n fundamental    demostrar el efecto o no de la t&eacute;cnica en este aspecto. Sin embargo,    la poblaci&oacute;n con IRC y VIH se caracterizan por la confluencia de m&uacute;ltiples    factores capaces por s&iacute; solos de provocar este estr&eacute;s. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En las &uacute;ltimas    dos d&eacute;cadas ha aumentado el inter&eacute;s en evidenciar las causas de    la elevada morbilidad y mortalidad cardiovasculares de los individuos con IRC.<SUP>14,17,19,34-36    </SUP>Por ello, el EO ha sido objeto de m&uacute;ltiples estudios, en virtud    de las pruebas que lo posicionan en el centro de la fisiopatolog&iacute;a de    la placa de ateroma. Sin embargo, la mayor parte de los trabajos de los que    se disponen se centran en escasos biomarcadores oxidativos, y muchas veces en    poblaciones de caracter&iacute;sticas heterog&eacute;neas.<SUP>37</SUP> </font>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Para valorar la    existencia de EO lo ideal ser&iacute;a poder cuantificar la generaci&oacute;n    de radicales libres producidos (O<SUB>2</SUB><SUP>-</SUP>, OH<SUP>-</SUP>, H<SUB>2</SUB>O<SUB>2</SUB>,    etc.), pero esto es muy dif&iacute;cil t&eacute;cnicamente debido a la vida    media corta de los mismos adem&aacute;s de ser determinaciones inespec&iacute;ficas.    Por tanto, lo m&aacute;s adecuado es medir los resultados del da&ntilde;o que    producen estos radicales libres en las diferentes biomol&eacute;culas y valorar    el estado antioxidante.<SUP>4,28,38</SUP> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Cuando los radicales    libres superan la barrera antioxidante, pueden interactuar con las estructuras    fosfolip&iacute;dicas entre otras biomol&eacute;culas, produciendo en este caso    la peroxidaci&oacute;n lip&iacute;dica (POL). Uno de los productos de esta reacci&oacute;n    es el MDA y como intermediarios se producen los HPO, cuya cuantificaci&oacute;n    da una idea de la extensi&oacute;n de la POL. Es importante destacar que adem&aacute;s    del MDA y HPO como marcadores de POL existen otros productos como por ejemplo    TBARS (sustancias reactivas al &aacute;cido thiobarbit&uacute;rico) y los F2    isoprostanos que eval&uacute;an en otra medida la extensi&oacute;n del proceso.<SUP>14,28,36,38</SUP>    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">La principal fuente    de aterog&eacute;nesis se ha demostrado que es POL que conlleva la activaci&oacute;n<I>    in situ</I> de los monocitos y macr&oacute;fagos, generaci&oacute;n de las c&eacute;lulas    espumosas y proliferaci&oacute;n de las c&eacute;lulas musculares de la pared    vascular que pueden mediar eventos vasculares. Estos eventos pudieran estar    vinculados a la evoluci&oacute;n de la enfermedad renal en los pacientes y se    encuentran subdiagnosticados. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Varios autores    han encontrado niveles elevados de POL en pacientes con IRC y en HD. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">De manera similar    en el presente trabajo se encontraron niveles significativamente elevados en    el grupo de IRC y VIH con respecto a una poblaci&oacute;n supuestamente sana.    Sin embargo, a pesar del MDA ser un marcador v&aacute;lido de la magnitud de    da&ntilde;o a consecuencia del EO, es una mol&eacute;cula de bajo peso molecular    e hidrosoluble, por lo que puede sufrir aclaraci&oacute;n renal o ser dializada.    En el estudio este indicador aument&oacute; significativamente al final del    proceso dial&iacute;tico, pero no ocurriendo as&iacute; con el valor de HPO    que disminuy&oacute; aunque no significativamente respecto al valor inicial.    Los resultados en los pacientes de esta investigaci&oacute;n coinciden con los    de otros autores respecto a una POL aumentada.<SUP>10,39,40</SUP> </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El componente lip&iacute;dico    de las membranas es una de las biomol&eacute;culas donde se produce el da&ntilde;o    celular por EO, este fen&oacute;meno podr&iacute;a explicar el acortamiento    de la vida media de los hemat&iacute;es y tambi&eacute;n podr&iacute;a ser un    factor que limitar&iacute;a la respuesta a la Eritropoyetina. Sin embargo hay    que tener en cuenta que la sobrecarga de Fe suministrada contribuye a un estado    proxidante<SUP>41 </SUP>que potencia los hallazgos, pero que resulta necesaria    para mantener los valores metab&oacute;licos de hemoglobina en estos individuos.    </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El da&ntilde;o    oxidativo sobre las prote&iacute;nas se estudi&oacute; seg&uacute;n Witko-Sarsat    y cols. que identificaron los productos finales de la oxidaci&oacute;n proteica    avanzada (PAOP).<SUP>26</SUP> </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Los pacientes en    estudio presentaban valores elevados de PAOP en comparaci&oacute;n con el grupo    de individuos sanos, lo cual es indicativo de da&ntilde;o a prote&iacute;nas    plasm&aacute;ticas por mecanismos clorinantes y constituyen elementos capaces    de amplificar la activaci&oacute;n de monocitos. Este resultado est&aacute;    relacionado con la actividad de la mieloperoxidasa de las c&eacute;lulas fagoc&iacute;ticas,    la &uacute;nica enzima capaz de generar oxidantes clorinados.<SUP>37</SUP> Al    final de la HD los valores de PAOP aumentaron significativamente. Este hallazgo    coincide con lo reportado por otros autores en pacientes con IRC,<SUP>26</SUP>    no encontrando reportes de este tipo de estudio con pacientes VIH/sida e IRC.    El hallazgo sugiere un aumento de la generaci&oacute;n de oxidantes clorinados    durante el proceso de HD y activaci&oacute;n de neutr&oacute;filos circulantes.<SUP>26,42</SUP>    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">La evaluaci&oacute;n    del EO se complet&oacute; con el an&aacute;lisis de la actividad de las principales    enzimas antioxidantes, as&iacute; como del GSH en su estado reducido. El glutati&oacute;n    es un tiol tripept&iacute;dico que se encuentra en la mayor&iacute;a de las    especies animales y que es probablemente el antioxidante celular m&aacute;s    importante. El glutati&oacute;n oxidado (GSSG) es muy t&oacute;xico para las    c&eacute;lulas por lo que el organismo tiende a la reducci&oacute;n del GSSG    a GSH mediante la glutati&oacute;n-reductasa. Los pacientes presentan niveles    disminuidos de GSH antes de realizar la HD y este valor disminuy&oacute; al    final de la misma con respecto al valor inicial, lo que coincide con lo informado    por otros autores.<SUP>2,8,35</SUP> </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">En condiciones    normales, la concentraci&oacute;n de antioxidantes es bastante superior a la    concentraci&oacute;n de productos oxidantes, de manera que la generaci&oacute;n    continua de radicales libres, derivados del metabolismo celular, queda regulada    y neutralizada por ellas. Una protecci&oacute;n antioxidante eficaz requiere    la actuaci&oacute;n sincronizada de varias enzimas entre ellas estudiamos: SOD    y CAT. Encontramos la actividad de SOD significativamente disminuida en el grupo    al inicio, y CAT aumentada, con respecto al grupo sano, reflejo del desbalance    que existe entre los factores oxidantes y antioxidantes en la condici&oacute;n    de IRC. La actividad de SOD aument&oacute; con el proceso dial&iacute;tico y    la actividad de CAT disminuy&oacute;. El aumento encontrado en la actividad    de SOD conjuntamente con el d&eacute;ficit de actividad de la enzima CAT, conducir&iacute;an    a un aumento en la disponibilidad de per&oacute;xido de hidr&oacute;geno (H<SUB>2</SUB>O<SUB>2</SUB>).    Esta disponibilidad aumentada de per&oacute;xido de hidr&oacute;geno puede estar    relacionada con el incremento del da&ntilde;o a las diferentes biomol&eacute;culas    evidenciada por el aumento de los &iacute;ndices redox evaluados como MDA, PAOP    y en relaci&oacute;n tambi&eacute;n con la disminuci&oacute;n de las capacidades    antioxidantes evaluadas como GSH y en relaci&oacute;n con un aumento de PP.    Por lo que las modificaciones observadas en los &iacute;ndices est&aacute;n    relacionadas.<SUP>4,38</SUP> </font>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Por las caracter&iacute;sticas    de la t&eacute;cnica de HD se sugiere que en la medida que se pierden toxinas    ur&eacute;micas tambi&eacute;n hay p&eacute;rdidas de otras sustancias importantes    para el metabolismo.<SUP>1,40</SUP> Particularmente aquellas de alta eficiencia    con membranas altamente permeables producen una p&eacute;rdida de sustancias    antioxidantes,<SUP>34 </SUP>lo que pudiera estar contribuyendo a los resultados    en el presente estudio. </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Algunos investigadores    han encontrado recientemente un descenso de hasta un 50% en los valores de actividad    de las enzimas y mol&eacute;culas con capacidad antioxidante en una muestra    de pacientes en HD, frente a un grupo control.<SUP>6,7,39</SUP> Adem&aacute;s,    reportan que una sesi&oacute;n de HD no logra normalizar sus niveles. Los efectos    que una sesi&oacute;n de HD puede producir en el EO es tema de controversia.    Para algunos autores la HD agravar&iacute;a el EO debido a la activaci&oacute;n    de c&eacute;lulas inflamatorias causada por el uso de algunas membranas, por    p&eacute;rdidas netas de antioxidantes solubles en agua o por un incremento    en la generaci&oacute;n de radicales libres.<SUP>4,9,10,15,17</SUP> En sentido    contrario se se&ntilde;ala la disminuci&oacute;n de MDA con la HD y los trabajos    realizados por Himmelfarb y cols sugieren el efecto beneficioso de la HD sobre    los principales aminotioles plasm&aacute;ticos (ciste&iacute;na, homociste&iacute;na,    cistenil-glicina y glutati&oacute;n) importantes marcadores de la oxidaci&oacute;n    y algunos de ellos antioxidantes.<SUP>42</SUP> <I>Biasioli</I> y otros estudian    el efecto que ejercen durante la HD el uso de distintos tipos de membrana y    adem&aacute;s de observar una disminuci&oacute;n del EO a lo largo de la HD    con diversas membranas, realizan determinaciones post-di&aacute;lisis, con mejor&iacute;a    de los distintos marcadores y a los 30 minutos despu&eacute;s de realizado el    proceso donde los valores de MDA tienden a asemejarse a los valores predi&aacute;lisis.<SUP>11</SUP>    </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Los resultados    en los pacientes sida con IRC en una sesi&oacute;n dial&iacute;tica reportados    en este trabajo coinciden con el primer grupo de autores<SUP>4,9,10,15,17 </SUP>y    muestran que los valores tanto de los marcadores antioxidantes como los prooxidantes    se alteran durante la HD, de manera no beneficiosa para los pacientes. Estos    valores siguen siendo diferentes significativamente con respecto a los controles    sanos y aunque las modificaciones se producen de manera significativa no repercuten    en la extensi&oacute;n del proceso. De acuerdo con estos resultados se puede    deducir que las diferencias encontradas entre los tiempos de an&aacute;lisis    se deber&iacute;an a la existencia de solutos antioxidantes que se eliminan    en la HD y a la posible generaci&oacute;n de ERO durante el proceso. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">El prevenir o reducir    el EO resulta tarea primordial despu&eacute;s de vistos los factores patog&eacute;nicos    involucrados, lo que requiere mejorar la biocompatibilidad de los sistemas de    HD y suplementar de manera eficaz la deficiencia de antioxidantes.<SUP>43</SUP>    </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Los resultados    sugieren que el proceso dial&iacute;tico en este tipo de pacientes favorece    el EO conjuntamente con una disminuci&oacute;n de la carga viral plasm&aacute;tica.    El estudio aporta valor metodol&oacute;gico en el manejo de estos pacientes    y en la b&uacute;squeda por mejorar su calidad de vida. </font>     <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Es necesario realizar    trabajos prospectivos en pacientes tratados en HD con determinaciones predi&aacute;lisis,    posdi&aacute;lisis y a las 24 h para poder realizar un perfil oxidativo entre    dos sesiones del proceso. Y tambi&eacute;n evaluar el posible efecto con el    uso de f&iacute;stula arteriovenosa, de otras membranas y otros procedimientos    que pudieran influir en el proceso de EO. </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    <br>   Conflictos de inter&eacute;s</B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">No existen conflictos    de intereses potenciales en este documento, ni se recibieron apoyos financieros    para su desarrollo. </font>     <P>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B>    <br>   <font size="3">Agradecimientos</font> </B> </font>      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">Se agradece a todos    los pacientes sida cubanos y familiares que aceptaron participar del estudio    y a todos los profesionales y t&eacute;cnicos del Hospital del IPK que contribuyeron    a su desarrollo.</font>     <P>&nbsp;      <P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2"><B><font size="3">REFERENCIAS    BIBLIOGR&Aacute;FICAS</font> </B> </font>      <!-- ref --><P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">1. Locatelli F,    Canaud B, Eckardt KU, Stenvinkel P, Wanner C, Zocalli C. Oxidative stress in    end-stage renal disease: an emerging threat to patients outcome. Nephrol Dial    Transplant. 2003;18:1272-80.     </font>      <!-- ref --><P><font face="Verdana, Arial, Helvetica, sans-serif" size="2">2. Haugen E, Nath    KA. 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<article-title xml:lang="en"><![CDATA[Oxidative stress in end-stage renal disease: an emerging threat to patients outcome]]></article-title>
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<year>2003</year>
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