Resultados preliminares del pesquisaje neonatal inmunohistoquímico para la detección del síndrome de frágil X

Dr. Roberto Lardoeyt Ferrer,1 Lic. Remigio Coto Rodeiro,2 Téc. Nereyda González Junco3, Araceli Lantigua Cruz4 y C. Rob Willemsen5

Resumen

El síndrome de frágil X constituye la entidad genética que ocupa el primer lugar como causa de retraso mental hereditario, caracterizado por un fenotipo físico y psiconeuroconductual muy peculiar. Han sido innumerables los estudios que se han realizado con el fin de dilucidar la función del gen y la localización de la proteína que la misma codifica relacionado con esta afección, entre los cuales se encuentran las técnicas inmunohistoquímicas. Se aplicó la técnica inmunohistoquímica con el objetivo de detectar individuos con riesgo genético de presentar el síndrome de frágil X a través de un pesquisaje neonatal en un período de 14 meses. Se pesquisaron un total de 2 914 recién nacidos varones, de los cuales 2 414 obtuvieron resultados inmunohistoquímicos. Diez casos fueron proteína negativos, en los cuales su desarrollo psicomotor fue evaluado exhaustivamente durante un período de 3 años, y fue normal; no se detectó ningún individuo con la enfermedad.

Palabras clave: Pesquisaje neonatal/Síndrome de Frágil X/Retraso Mental/Test Inmunohistoquímico/Anticuerpos Monoclonales.

Con el desarrollo de la Genética Humana, se han establecido los pesquisajes neonatales de defectos genéticos como programas esenciales de salud pública con fines preventivos, en los que cada RN es pesquisado para enfermedades, con el objetivo de reducir o eliminar funestas consecuencias, como es el caso de la fenilcetonuria, el hipotiroidismo congénito entre otras.3-5

Con el afán de pesquisar por primera vez el síndrome de frágil X (SFX) en poblaciones de RN varones aparentemente sanos se aplicó una técnica inmunohistoquímica (TIH) que utiliza un anticuerpo monoclonal (AcM) obtenido en el año 1995 por Rob Willemsen y otros en Rotterdan, Holanda, que reconoce la proteína FMRP, producto codificado por el gen responsable de la enfermedad, FMR-1, ubicado en el citoplasma de los linfocitos, entre otros tipos celulares, lo que abre nuevas posibilidades diagnósticas que permiten identificar la presencia o ausencia de la proteína en linfocitos de sangre periférica.6-12

Métodos

Se pesquisaron 2 914 RN varones de los hospitales maternos: Eusebio Hernández y 10 de Octubre de Ciudad de La Habana en un período de 14 meses, y se seleccionó la muestra al tener en cuenta el consentimiento informado por escrito de la pareja.

Se procedió a la obtención de la sangre a través de la punción del cordón umbilical y se depositaron en frascos con el anticoagulante EDTA. ]]>

Por cada RN se realizaron 2 extensiones sanguíneas, donde se utilizó la sangre de las primeras 3 horas de nacido, y la lámina se identificó en su zona esmerilada.

Las láminas se sometieron al TIH, y se incluyeron en cada proceso 2 láminas "controles": una de ellas correspondió a una persona con el SFX constatado molecularmente con la mutación completa (control positivo), y la otra lámina de un individuo masculino sano como control negativo.

Se observaron las láminas al microscopio con el lente de inmersión, y se procedió al conteo de 100 linfocitos. Los que resultaron tener un conteo de células marcadas con el anticuerpo por debajo del 50 % se consideraron proteína negativo (alterada), y los que tuvieron por encima del 50 % de células marcadas se consideraron proteína positivo (normal).

Los casos que resultaron ser proteína negativo se siguieron por 3 años en la consulta de Genética Clínica, donde se evaluó su desarrollo psicomotor, con el objetivo de detectar precozmente signos y síntomas del defecto congénito y por tanto realizarles la confirmación molecular.

Resultados

Tabla. Comparación de la cobertura de estudio de RN varones a través de la TIH en ambas maternidades

La eficacia de la técnica se evaluó al analizar el número de recién nacidos varones con resultados inmunohistoquímicos, como se puede apreciar en la figura 1.

FIG. 1. Análisis de los RN varones pesquisados a través del TIH con resultados en ambas maternidades.

Discusión

Como podemos apreciar al 51,6 % de los RN no se les tomó la muestra, por factores inherentes al salón de partos como el olvido por parte del personal médico y paramédico, inestabilidad de este, además de la no realización del pesquisaje en la Unidad Quirúrgica en los partos por cesárea.

Estadísticamente algunos de los factores citados anteriormente se comportaron como se observa en la figura 2.

FIG. 2. Análisis de los factores que incidieron en la no recolección de la muestra
FISP. Factores Inherentes al salón de partos. ]]>

Los factores inherentes al salón de partos referidos con anterioridad representaron el mayor por ciento si lo comparamos con las cesáreas. Sin embargo la toma de la muestra en los casos que son cesáreas ofrecerían una mayor cobertura de RN varones pesquisados por las excepcionales condiciones del salón de operaciones, por lo que este factor representaría un impacto considerable en la cobertura del pesquisaje.

En la figura 3 se muestra cómo la cobertura se incrementaría del 48,3 al 69,4 %, si se tiene en cuenta este factor, y por tanto repercutiría en la obtención de una muestra lo suficientemente representativa para el pesquisaje de esta afección, de acuerdo con su prevalencia de 1 en 4 000 individuos 13-15 (Fig. 3).

FIG. 3. Impacto de la cesárea en la cobertura del pesquisaje.

Estos resultados se alejan a los obtenidos por el Pesquisaje Neonatal de Fenilcetonuria en los primeros años de aplicación, pues cuando comenzó como pesquisaje neonatal masivo obligatorio a partir del año 1984, tuvo una cobertura del 85-87 %.3

Existieron 500 neonatos sin resultados inmunohistoquímicos de los pesquisados. Dentro de las causas que repercutieron en ellos la más relevante fue la no presencia de linfocitos en la extensión sanguínea o muy pocas células que imposibilitó un conteo de 100 linfocitos para un 12,04 % de los casos.

La población con riesgo genético incrementado de presentar la enfermedad que detectó el proceder, objetivo esencial de todo pesquisaje, fue de 10 casos. Sin embargo, ninguno de ellos fue caracterizado molecularmente por no tener 2 láminas con resultados inmunohistoquímicos alterados.

En estas situaciones se hizo un seguimiento clínico de su desarrollo psicomotor, el cual fue normal sin presentar manifestaciones clínicas de la afección.

Una hipótesis para explicar el hecho anterior podría ser que estos casos presenten una proteína disfuncional que no reaccione con el AcM anti FMRP o posean un mosaicismo aberrante que ocasionó conteos bajos cercanos al límite inferior.17

El TIH como proceder técnico para la detección indirecta de la enfermedad, ha sido aplicado a través de un pesquisaje neonatal masivo voluntario con fines investigativos, pero consideramos que no reúne las condiciones como pesquisaje neonatal obligatorio al no presentar un tratamiento precoz efectivo.

El TIH puede ser un instrumento que permita la labor preventiva y el pesquisaje en cascada, en familias donde se esté segregando el gen. Aquí radica su mayor importancia.

Agradecimientos

Agradecemos al Departamento de Genética Clínica de la Universidad de Erasmus, Rótterdam, Holanda, por la colaboración brindada en el financiamiento para la realización de este novedoso proceder; al personal médico y paramédico de los salones de partos de las maternidades Eusebio Hernández y 10 de Octubre que tuvieron la responsabilidad de la toma de la muestra y realización del smear, y al personal técnico del Centro Nacional de Genética Médica que realizaron la prueba.

Summary

The Fragile X syndrome is the genetic entity that is the first cause of hereditary mental retardation characterized by a very peculiar physical and psychoneuroconductal phenotype. Innumerable studies, including the immunohistochemical techniques, have been conducted aimed at dilucidating the gene's function and the localization of the protein that it codified related to this affection. The immunohistochemical techique was used in order to detect individuals at genetical risk for presenting Fragile X syndrome by neonatal screening in 14 months. A total of 2 914 male infants were screened of whom 2 414 showed histochemical results. 10 cases tested negative protein. Their psychomotor development was exhaustively evaluated for 3 years and it was normal. The disease was not detected in any individual.

Key words: Neonatal screening; Fragile X syndrome; mental retardation; immunohistochemical test; monoclonal antibodies. ]]> .

Referencias bibliográficas

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Recibido: 23 de enero de 2004. Aprobado: 12 de abril de 2004.
Dr. Roberto Lardoeyt Ferrer. ICBP "Victoria de Girón". Ave 146. Esq. a 31, Reparto Cubanacán. Playa. E mail: lardgen@infomed.sld.cu

1Especialista de I Grado en Genética Clínica. ICBP "Victoria de Girón".
2Licenciado en Bioquímica. Jefe del Departamento de SUMA. Hospital Materno"10 de Octubre" .
3Enfermera Reanimadora. Hospital Materno "Eusebio Hernández".
4Especialista de II Grado en Genética Clínica. ICBP "Victoria de Girón".
5 Universidad Erasmus, Rotterdam, Holanda.

]]> 1995 83-90 1995 95-6 1995 136-9 1994 1995 97-100 1996 348 967-8 1993 363 722-4 1997 308-11 1995 345 1147-8 1995 4 158-61 1997 34 250-1 1998 35 579-89 1998 141 1066-8 1996 64 163-9 1998 27 163-9 1996 58 903-5