Palabras clave: ANFOTERICINA B/toxicidad; ESTABILIDAD DE MEDICAMENTOS; TECNICAS MICROBIOLOGICAS.
Debido a su poca absorción en el tracto gastrointestinal se presenta, fundamentalmente, en bulbos de 50 mg para inyección intravenosa, aunque también se ofertan cremas, lociones y ungüentos que contienen hasta el 3 % del producto.
Su acción es fungistática o fungicida, la cual depende de la concentración obtenida en los líquidos corporales y de la sensibilidad del hongo. Los tratamientos con el producto inyectable tienen una duración de hasta 6-10 semanas, pero se pueden extender hasta 3-4 meses, en aquellos casos en que se haya establecido un diagnóstico firme de infección micótica progresiva potencialmente fatal.
La anfotericina B se emplea tanto en adultos como en niños por vía endovenosa, y puede incrementarse paulatinamente su administración hasta llegar a 1-1,5 mg/kg de peso al día.
En el mercado mundial existe un monopolio casi total de la firma nor-teamericana Squibb, la cual domina su comercialización en una gran cantidad de países, a veces mediante subsidiarias o distribuidores.
Este medicamento es el más utilizado para el tratamiento de las micosis sistémicas y por ello la OMS lo seleccionó para su lista principal de medicamentos esenciales. Debido a que, además, es un antifúngico inyectado de primera opción, resulta importante su producción nacional que implicaría no sólo la introducción de un medicamento básico en la atención asistencial que cubriría las necesidades del mismo, sino que aportaría un renglón exportable de alto interés, sobre todo para los países subdesarrollados, donde las infecciones generalizadas son más frecuentes.
El objetivo de este trabajo consistió en realizar el estudio de estabilidad de la anfotericina B inyectable liofilizado (50 mg/bbo) por un método acelerado, según una técnica de valoración microbiológica que permitiera la cuantificación del contenido de este antibiótico como además, predecir su fecha de vencimiento; así como también realizar los estudios de toxicología preclínica del medicamento en comparación con el de importación.
La materia prima de anfotericina B previamente valorada, se empleó como patrón de referencia.
Las muestras que se utilizaron fueron 3 lotes de anfotericina B inyectable liofilizado (50 mg/bbo), todos de igual composición química, rotulados como E-250, E-209 y E-210, los cuales se prepararon en el Departamento de Formas Terminadas del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. ]]>
Al ensayo E-250 se le realizó la valoración inicial antes de comenzar el estudio cinético. Los bulbos de este lote se almacenaron a 30, 40, 50 y 60 oC ±1 oC; posteriormente, se procedió a efectuar las valoraciones periódicas de las muestras, sometidas a diferentes temperaturas según el diseño estadístico.Los valores obtenidos se procesaron con la ayuda de un programa de computación ESTAB, confeccionado por Leonard y Valdés para estudios cinéticos de estabilidad. La predicción se hizo a la temperatura de 10 oC.
Para la valoración de las muestras se utilizó el método de valoración microbiológica, con el empleo de la técnica de difusión en agar según se establece en la USP XXII.6,7
Se realizó, además, la estabilidad de vida de estante a los lotes E-209, E-210 y E-250 a las temperaturas ambiente y de refrigeración (2-8 oC); las valoraciones se efectuaron mensualmente hasta 12 meses de elaboradas.
Las valoraciones microbiológicas y la medición del pH de los bulbos reconstituidos (5mg/mL) se realizaron cada 24 horas, a las temperaturas ambiente y de refrigeración.
Para ello se emplearon ratones albinos hembras procedentes de la colonia del Laboratorio de Control Biológico, con una masa corporal comprendida entre 18-22 g, los cuales se mantuvieron en un cuarto a temperatura controlada de 22 ±2 oC y un ciclo de luz-oscuridad de 12-12 h. La alimentación consistió en ratonina peletizada y agua a voluntad.
Se confeccionaron grupos de 10 animales para la dosificación exacta de acuerdo con el peso. Se administraron dosis de 4,0; 4,5 y 5,0 mg/kg de masa corporal correspondiente a un factor de peso volumen de 0,008; 0,009 y 0,010 mL/kg de masa corporal para el producto nacional. En el caso del similar comercial fungizone se emplearon dosis de 4,5; 5,0 y 5,5 mg/kg de masa corporal con sus respectivos factores de volumen de 0,009; 0,010 y 0,011 mL/kg de masa corporal. Las dosis administradas se prepararon a partir de una solución al 0,05 % en agua para inyección. Los animales se mantuvieron en observación durante 15 días. La DL50 se estimó mediante el método estadístico de Probits.9
No se observaron cambios en las características organolépticas, así como en el pH (7,2-8,0) durante el tiempo estudiado a las temperaturas de entre 2-8 oC y ambiente.
En la tabla 2 se observan las valoraciones microbiológicas, así como los valores del pH en días del lote E-250 reconstituido con 10 mL de agua para inyección (5 mg/mL) a las temperaturas de refrigeración y ambiente.
Las muestras no presentaron cambios en su coloración (amarillo-naranja) ni en su pH durante el tiempo estudiado, y las valoraciones microbiológicas se comportaron dentro de los límites de aceptación hasta los 7 días a la temperatura de refrigeración y de 1 día a la temperatura ambiente, de ahí que se proponga preparar las diluciones del medicamento al momento de su uso y no utilizarse por un período mayor de una semana después de su preparación y almacenamiento en refrigeración. Las diluciones del medicamento se pueden conservar en la oscuridad a temperatura ambiente sólo durante 24 h. ]]>
El comportamiento del lote E-250 sometido a un estudio cinético a diferentes temperaturas y aplicando la ecuación de Arrhenius, indica que el producto es estable, el cual presenta una vida útil de 2 años almacenado a temperatura entre 2-8 oC y protegido de la luz (tabla 3).En la tabla 4 aparece la mortalidad obtenida en cada una de las dosis administradas para cada sustancia evaluada.
Los síntomas observados en los animales (ratones) a las dosis ensayadas fueron respiración acelerada, convulsiones y la muerte, la cual se presenta antes de 1 h después de la administración.
En la tabla 5 se observa la DL50 de ambas formulaciones.
De acuerdo con los resultados obtenidos se puede inferir que no existen diferencias significativas entre la anfotericina B E-250 de producción nacional y el similar comercial fungizone lote 571 desde el punto de vista de la toxicidad aguda, pues la letalidad y su DL50 se comportan de forma muy similar en ambos caso.
Haciendo una comparación entre los valores de DL50 de ambas formulaciones encontradas en nuestro experimento y el valor de DL50 reportado en la literatura para este mismo producto, vemos que existe una alta correspondencia entre estos valores.
<2>Licenciada en Farmacia. Aspirante a Investigadora.
<3>Químico-Analista. Técnico Medio.
Lic. Daisy Pérez-Velasco Rodríguez. Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos. Ave 26 No. 10605 entre Rancho Boyeros y Puentes Grandes, Ciudad de La Habana, Cuba. ]]>