Emilio Simón Barroso de la Cruz ,1 Claudio Rodríguez Martínez2 y Raiza Zhurbenko3
Se realizó la evaluación del desempeño con muestras clínicas de orina para determinar la eficacia del CromoCen(R) CC como medio de cultivo en el diagnóstico de la infección urinaria, e identificar, con su utilización, los grupos bacterianos más frecuentes y el tiempo necesario para realizar el diagnóstico. En una muestra de 500 casos atendidos en la consulta externa de urología y realizados en el servicio de microbiología de San Antonio de los Baños, en la provincia de La Habana, en el período comprendido desde enero a junio de 2003. Se confirmó la hipótesis de trabajo: el medio de cultivo estudiado fue eficaz en el diagnóstico rápido de la infección urinaria. Desde el punto de vista ético se mantuvo la confidencialidad, se elevó la autoestima del binomio médico-paciente, y su calidad de vida desde el punto de vista bioético, por lo que se recomienda emplear este medio de cultivo en el diagnóstico rápido de la infección urinaria.
Palabras clave: Medio de cultivo cromogénico, fluorógenico, CromoCen (R) CC, Escherichia coli, actividad B glucoronidasa, actividad B galactosidasa, infección urinaria, eficacia.
Las infecciones de las vías urinarias figuran entre los padecimientos más frecuentes en las consultas médicas de hospitales e instituciones de salud, y se definen por la existencia de bacterias en el tracto urinario, cuando este habitualmente debe ser estéril. En general se tiende a utilizar el término de infección urinaria cuando existe una sintomatología clínica asociada a un recuento bacteriano significativo en orina, según el procedimiento de recogida de la muestra para el cultivo. Cuando no existen unos síntomas precisos podemos estar ante una bacteriuria asintomática o un falso positivo del urocultivo.1-3
Las infecciones causadas por bacterias gramnegativas y algunas grampositivas continúan siendo el mayor problema para las infecciones del tracto urinario ya que son los patógenos más frecuentes. El mayor por ciento lo representan los gérmenes gramnegativos. La E. coli está presente entre un 60 y un 85 % de los casos, y su diagnóstico rápido disminuiría la morbilidad en los pacientes, pues facilitaría la terapia antimicrobiana en pocas horas permitiendo una mejor evolución de los pacientes, y evitaría la posibilidad del daño renal a largo plazo. Teniendo en cuenta estos antecedentes, el Centro Nacional de Biopreparados (BIOCEN) elaboró un medio de cultivo rápido llamado CromoCen(R) CC, para el diagnóstico de la infección urinaria (Rodríguez, MC. Perspectivas del desarrollo de los medios de cultivo. Taller de técnicas de avanzada en el diagnóstico microbiológico. CIMEQ. Ciudad de La Habana; 2000). 4,5
El desarrollo de los medios de cultivo en Cuba ha transitado por un proceso que, partiendo del desarrollo de los medios tradicionales empleados (escasos 12 medios en 1987), llega hoy a contar con 100 productos. A partir del año 2000 se comienza una nueva etapa, que incluye la investigación de novedosos medios cromogénicos y fluorogénicos para la filtración por membrana y listos para el uso en placas, desarrollados todos en el BIOCEN. 6
Esta investigación se realizó con el objetivo de evaluar la eficacia del medio de cultivo CromoCen(R) CC en el diagnóstico rápido de la infección urinaria, e identificar, con su uso, los grupos bacterianos más frecuentes, así como determinar el tiempo necesario para realizar el diagnóstico. La hipótesis de trabajo que se siguió fue la siguiente:
Esta investigación consistió en tomar una muestra de orina para realizar su cultivo con el método Cromocen® CC y el tradicional. Todas fueron analizadas en el Centro de Microbiología de este municipio.
Las variables estudiadas fueron la identificación de los grupos bacterianos (E. coli y coliformes), la positividad o negatividad al realizar el diagnóstico por ambos métodos, así como el tiempo requerido. Se tuvo en cuenta la conformidad de pacientes e investigadores y el consentimiento informado de todos los sujetos, como lo establecen las buenas prácticas clínicas.
El medio basa su funcionamiento en la combinación de una reacción cromogénica para detectar la actividad b -galactosidasa de los microorganismos del grupo coliformes con una reacción fluorogénica, para así detectar la actividad b -glucoronidasa que distingue a E. coli dentro del grupo coliformes.
La combinación de nutrientes en el medio, conjuntamente con inhibidores para los microorganismos grampositivos, permite el adecuado crecimiento y recuperación de los microorganismos de interés. Las colonias incoloras o con pigmentación propia corresponden a otras bacterias gramnegativas.
Indicaciones para el uso: de acuerdo con la cantidad deseada, se pesa el polvo en proporción de 30,4 g/L de agua destilada o desionizada, se hierve hasta lograr una disolución completa y se distribuye en placas. No se debe esterilizar en autoclave.
Procedimiento: el medio se distribuye en placas de Petri estériles. Se deben inocular las muestras por la técnica de inundación de superficie (de 0,1 a 0,5 mL), o por agotamiento del inóculo hasta obtener colonias aisladas, y se incuba a temperatura de 35° C durante 18 a 24 h (si la prueba está dirigida a la detección de bacterias coliformes fecales, se incuba entonces a 44° C). La descripción completa se explica en el anexo 2 (Tsoraeva A, Rodríguez MC, Quesada Muñiz VJ. Nutricional mixture and method for early identification and count of Gram negative organisms. WO 0200921 A1. PCT Gazete, 2002) y (Tsoraeva A, Rodríguez MC. Certificado de autor de invención. Patente No. 22808. Cuba, 2002).
El medio de cultivo estudiado fue elaborado en el BIOCEN, ubicado en el municipio Bejucal, provincia La Habana. El CromoCen(R) CC es un medio cromogénico-fluorogénico para la detención y enumeración de E. coli y coliformes. Sus características se presentan en el anexo 1.
Es válido señalar que CromoCen(R) CC se ha ensayado muy exitosamente, tanto para la identificación de E. coli, como para el recuento de E. coli y coliformes (coliformes totales) en muestras clínicas de orina, en aguas residuales, dentro de la veterinaria (en órganos de pollo), en alimentos del tipo de los cárnicos (jamón, jamonada, embutidos), así como en la leche y sus derivados (leche cruda, pasteurizada y queso). La sensibilidad (de 92 a 99 %) y especificidad (de 97 a 99 %) diagnósticas fueron muy elevadas en todos los casos para los microorganismos de interés.
En la figura 1 se muestra una placa de E. coli con la fluorescencia bajo lámpara ultravioleta a 365 nm, mientras que la 2 presenta colonias de E. coli y los otros coliformes no fluorescentes. En la figura 3 se observan las colonias verde azules de E. coli O157:H7, y en la 4 se exponen las colonias de E. coli sin la aplicación de la lámpara ultravioleta, por lo que la coloración es verde azul.
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FIG. 1. Placa positiva de E. coli fluorescente bajo lámpara ultravioleta, todas son E. coli (colonias aisladas con centro azul verdoso, bordes blancos, fluorescencia azul).
FIG. 2. Placa positiva con E. coli fluorescente y otras coliformes no fluorescentes (colonias aisladas con centro azul verdoso, bordes blancos, fluorescencia azul, otras colonias aisladas de color azul verdoso no tienen bordes blancos).
FIG. 3. Placa positiva de E. coli O157:H7 que no fluorece bajo lámparas ultravioletas por ser glucuronidasa negativa.
FIG. 4. Placa positiva de E. coli a la que no se ha aplicado lámpara ultravioleta, o sea, no se ve fluorescencia pero sí el color azul verdoso.
En la tabla 1, por su parte, se presenta la distribución de los pacientes según el diagnóstico establecido, y el estudio arrojó que el 39 % de los pacientes adultos atendidos fueron positivos al realizarse el examen, un 54 % fueron negativos y un 7 % contaminados.
TABLA 1. Distribución de los pacientes según el diagnóstico establecido
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| Casos | (+ %) | (- %) | Contaminados |
| Niños | 50 | 9 - 18 % | 36 - 72 % | ]]> 5 - 10 % |
| Embarazadas | 50 | 8 - 16 % | 37 - 74 % | 5 - 10 % |
| Adultos | 400 | 156 - 39 % | 217 - 54 % | ]]> 27 - 7 % |
| Total | 500 | 173 | 290 | 37 |
En la tabla 2 se identifican los grupos bacterianos que se presentaron con mayor frecuencia en los 2 medios de cultivos, y se demostró que al realizar ambos métodos el germen patógeno que predominó fue la E. coli en un 26 %, aunque con el medio de cultivo CromoCen(R) CC hubo un 3 % en el se identificaron otros coliformes.
TABLA 2. Identificación de grupos bacterianos que se presentaron con mayor frecuencia con ambos medios de cultivos
| Grupo 1 | ]]> Bacterias | Casos | % |
| Urocultivo | E. coli | 130 | 26 |
| Grupo 2 |
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| ]]> |
| CromoCen(R) CC | E. coli | 130 | 26 |
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| Otras coliformes | 15 | 3 |
| Total | ]]> | 145 | 29 |
El tiempo indispensable para realizar el diagnóstico con ambos métodos también fue objeto de estudio. Se demostró que en el grupo 1 (tratado con urocultivo) la demora en el diagnóstico fue de aproximadamente 5 días, mientras que el grupo 2 (tratado con CromoCen(R) CC) se pudo hacer en menos de 24 h. El promedio fue 16 y 18 h, respectivamente.
Se demostró que la mayor asistencia de los pacientes a la consulta fue de la población adulta, con un 39 %, lo cual es perfectamente atribuible a que la infección urinaria constituye un verdadero problema de salud, lo cual coincide con estudios realizados por Mensa J, Sánchez DC y Guzmán DA.7-9
En el estudio el germen que predominó en ambos grupos fue la E. coli, lo que representó el 26 %. Esto se relaciona con la bibliografía consultada, en la cual se plantea que el 90 % de las infecciones urinarias en la comunidad están causadas por este, y con menos frecuencia, por otros microorganismos. También constituye el patógeno más frecuente en el 80 % de la pielonefritis aguda sin problemas urológicos de base. Estudios recientes señalan su gran virulencia, por lo que es indispensable su temprana detección para imponer la terapéutica adecuada, y ello se logró con el medio de cultivo estudiado en menos de 24 h (grupo 2), con un promedio de 16-18 h. Este resultado eleva la calidad de la atención a la población que solicita este servicio, e igualmente facilita disminuir la morbilidad al permitir la aplicación de una terapia antimicrobiana efectiva que evitaría la posibilidad de daño renal a largo plazo.
El medio de cultivo CromoCen(R) CC fue eficaz en el diagnóstico rápido de la infección urinaria por E. coli y coliformes. Se identificó la E. coli con este medio y se logró establecer el diagnóstico en menos de 24 h.
Se recomienda ampliar la muestra de estudio y la divulgación de este novedoso medio de cultivo a todas las instituciones de salud del país.
Especial agradecimiento por su valiosa cooperación en la realización del presente trabajo merecen las doctoras Odalys Sandoval Jiménez, Mildres Barroso Palomino y María Albertina Sotolongo Toledo; la licenciada Talena Contreras Mesa ; y las técnicas en microbiología Odilia Ramírez Lares, Rosario B. Acosta Echevarría y Oristela Galiano Audever.
Características técnicas del producto:
| ]]> Microorganismos | Características de las colonias aisladas |
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| E. coli (excepto O157:H7) | Centro azul verdoso, bordes blancos, fluorescencia azul |
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| ]]> Bacterias coliformes | Azul verdoso |
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Descripción del procedimiento
The evaluation of the performance with clinical samples of urine was carried out to determine the efficacy of CromoCen(R) CC as a culture medium in the diagnosis of urinary infection, and to identify with its use the most frequent bacterial groups and the time necessary to make the diagnosis. In a sample of 500 cases seen at the aoutpatient department of urology and analyzed at the microbiology service of San Antonio de los Baños, in the province of Havana, from January to June, 2003, it was confirmed the working hypothesis: the studied culture medium was efficient for the rapid diagnosis of urinary infection. From the ethical point of view, the reliability was maintained, and the self-steem of the physician-patient binomial, as well as the quality of life of the patient from the bioethical view increased. That's why, it is recommended to use this culture medium in the rapid diagnosis of the urinary infection.
Key words: Cromogenic culture medium, fluorogenic, CromoCen (R) CC, Escherichia coli, B glucoronidase activity, B galactosidase activity, urinary infection, efficacy.
1. González R. Infecciones urinarias. En: Kliegman, AB Nelson. Tratado de Pediatría. Volumen III. 15 ed. La Habana: Editorial Ciencias Médicas; 1997.
2. American Academy of Pediatria, Committees on Quality Improvement. Practice parameter the diagnosis treatment and evaluation of the initial urinary tract infection in febriles infants and young children. Pediatrics. 1999;103:845-1.
3. Vázquez VA. Infección urinaria en el adulto. Rev Cubana Med. 1998;34(2).
4. Samra Z, Heifetz M, Talmor J, Bain E and Bahar J. Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens. J Clin Microbiol. 1998;36(4): 990-4.
5. White DG. Harmon RJ and Langlois BE. Fluorogenic assay for differentiating Staphylococcus warneri and Staphylococcus hominis strains of bovine origin. J Clin Microbiol. 1990;28:602.
6. Quesada MV, Rodríguez MC, Tsoraeva A. Medios de cultivos cromogénicos y fluorogénicos para el análisis de muestras de agua y alimentos. Rev Ciencias Biológicas. 2000;31(1):25-8.
7. Mensa J, Horcajada JC, Cartón JA, Pujol M. Infección urinaria. [En línea]. Protocolos clínicos SEIMC IV: Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica. Disponible en: www. Seimc.org/protocolos/clínicos/proto 4.htm-198k
[Consultado 20 de octubre, 2006].
8. Sánchez DC. Pielonefritis aguda. [En línea]. Oficina de recursos educacionales FEPAFEM. Disponible en: www.aibarra.org./guías/7-10.htm-14k
[Consultado 20 de octubre, 2006].
9. Guzmán AD, Valdivieso AD. Boletín Escuela de Medicina. Universidad Católica de Chile. 1997;26:150-5.
Recibido: 4 de septiembre de 2006. Aprobado: 12 de septiembre de 2006.
Dr. Emilio Simón Barroso de la Cruz. Calle 17 # 407, entre 4 y 6, municipio Bejucal, La Habana, Cuba.
1 Especialista de I Grado en Urología. Profesor Asistente del Instituto Superior de Ciencias Médicas de La Habana.
2 Doctor en Ciencias Técnicas. Investigador Titular del Centro Nacional de Biopreparados (BIOCEN). Director de Investigaciones.
3 Ingeniera Tecnóloga. Jefa del Departamento de Investigación. Medios de Cultivo, BIOCEN.