Diagnóstico mediante qPCR de las razas 1, 2 y 4 tropical de Fusarium oxysporum f. sp. cubensis, agente causal del mal de Panamá de las musáceas
Diagnostic by qPCR of the races 1, 2, and tropical 4 of Fusarium oxysporum f. sp. cubensis, causal agent of Panama disease of musa
Luis Pérez-VicenteI, Einar Martínez-de la ParteII, Orlando Borras-HidalgoII, Eduardo CanaleII
IInstituto de Investigaciones de Sanidad Vegetal, Ministerio de la Agricultura de Cuba.
IICentro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB). ]]>
Fusarium oxysporum f. sp. cubensis (Foc), agente causal del mal de Panamá, es uno de los patógenos más nocivos que afectan las musáceas y no puede ser diferenciado morfológicamente de otros F. oxysporum. La enfermedad tiene un largo periodo de incubación que dificulta el diagnóstico temprano, los estudios epidemiológicos y de manejo. Se aisló y purificó el ADN de cuatro aislamientos de la raza 1 (R1, VCG 01210 y 0124), nueve de raza 2 (R2, VCGs 0124, 0124/0125, 0128 y 1210), cinco Nit M de raza tropical 4 (R4T, VCG 01213), uno de la raza 4 subtropical (R4S) y tres de los VCGs, 0120, 0123 y 0124/0125, así como de F. oxysporum asociados a lesiones necróticas en raíces de plátanos y F. pallidoroseum de lesiones de la pudrición de la corona. Se amplificó la región IGS del operón nuclear ribosomal utilizando los cebadores CNS1-CNL12 y se secuenciaron los amplicones obtenidos. Basado en los polimorfismos de los nucleótidos, se desarrollaron cebadores para qPCR para la identificación cuantitativa de aislamientos y tejidos infectados de bananos por Foc TR4 (qFocR4T-f y qFocR4T-r), y R1/R2 (qFocR1R2-f y qFocR1R2-r). Se desarrollaron protocolos individuales de diagnóstico por qPCR utilizando SybrGreen. Se obtuvieron altas sensibilidad y especificidad en el diagnóstico que permitió la detección de 1pg de ADN específico de R4T y R1/R2, respectivamente. Se verificó la similitud de las secuencias de los amplicones con los cebadores, lo que demostró la especificidad de las reacciones. Estos sistemas contribuirán al diagnóstico temprano y cuantitativo de Foc R4T y R1/R2, al conocimiento de la epidemiología, la interacción Foc-Musa spp., así como al desarrollo de herramientas de manejo. ]]>