Influencia del pH sobre la estabilidad de preparados de Inmunoglobulinas intravenosas para uso humano durante el almacenamiento.
The influence of pH in the stability during the storage of intravenous immunoglobulins for human use.
Armando Cádiz, Ma Esther Castellano, Janhna Hernández, J.R. Castillo, Pavel Mustelier, Ana Teresa Ramírez.
Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba.E-mail: acadiz@finlay.edu.cu
RESUMEN
]]> La eliminación o disociación de los agregados de IgG, es uno de los requisitos que debe poseer cualquier método de purificación de inmunoglobulinas para uso intravenoso. Se demostró con el uso de la Cromatografía en Gel y la Espectrofotometría, que el pH ácido (4,5), confiere una mayor estabilidad molecular a la IgG, permitiendo la disociación de la mayor parte de los agregados durante el almacenamiento prolongado utilizando dextrosa (5%) como estabilizante, fenómeno que está influido por la fuerza iónica del medio para cada uno de los pH. Muestras con contenido de polímeros entre 1% y 3% pierden los mismos en un período inferior a los seis meses. A su vez el uso de pH 4,0, mostró ventajas en la no formación de polímeros durante el calentamiento, en comparación con los pH más básicos. A los 5 minutos de calentamiento, la absorvancia de la muestra a pH 7,0, aumentó en un 60% en comparación con la muestra a pH 4,0.Palabras claves: Inmunoglobulinas intravenosas, agregados, polímeros, dímeros, monómeros, almacenamiento, calentamiento, estabilizantes.
ABSTRACT
One of the most important requirements that all methods of protein purification for intravenous use must fulfil is the elimination or dissociation of the immunoglobulin aggregates. The use of gel filtration and espectrophotometric techniques showed that acid pH (4.5), gives greater molecular stability to the IgG, dissociating most of the aggregates during lengthy storage using dextrose (5%) as stabilizer, this fact is influenced by the ionic strength of the medium for each pH. Samples with polymers (1–3%) lose them in 6 months. At the same time the use of pH 4.0 showed advantages as the non formation of polymers during the heat of the immunoglobulins, as compared to more basic pH. After 5 minutes of heating the sample at pH 7.0 the absorbance increased in 60% in comparison with the sample at pH 4.0.
Key words: Intravenous immunoglobulins, aggregates, polymers, dimers, monomers, storage, heating, stability
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REFERENCIAS
1. Ishizaka T, Ishizaka K. Biological activities of aggregated gammaglobulin. 1. Skin reactive and complement-fixing properties of heat denatured gammaglobulin. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1959;101:845-50.
2. Bing D. Complement interaction with immune serum globulin intravenous. The Amer. J. of Med. 1984; 76(3A):19-24.
3. Lundblad J, Schroeder D. Métodos de producción de IGIV y análisis de los preparados comerciales. En: Aplicaciones clínicas del tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. Yap PL. Barcelona: Editorial J. R. Prous S.A. 1993:15-36.
4. Henney C, Ellis E. Antibody production to aggregated human gamma G globulin in acquired hypogammaglobulinemia. New Engl. J. Med. 1968; 278:1144-46.
5. Yap P, Williams P. Perfil de seguridad de las inmunoglobulinas intravenosas. En: Aplicaciones clínicas del tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. Yap PL. Barcelona: Editorial J. R. Prous S. A. 1993;37-56.
6. Organización Mundial de la Salud. Normas para la toma, la preparación y el control de calidad de la sangre, los componentes sanguíneos y los derivados del plasma. Ginebra, 1992; (27):91-6. (Serie Informes Técnicos; No 840).
7. Hannson V. Inhibition and reversal of aggregation of IgG by freezing. Acta Chem. Scand. 1968;22:490-6.
8. Uemura Y., Uriyu K., Hirao Y, Takechi K, Ishikawa H, Nakajima T. Inactivation and elimination of viruses during the fraccionation of an intravenous immunoglobulins preparation Liquid heat treatment and PEG fractionation. Vox San. 1989;56:155-61.
9. Eibl M, Wedgwood R. Intravenous immunolgobulin: A review on immunodeficiencies. En: Rosen F., Seligman M. eds. Harwood Academic Pubs. Switzerland, 1993;659.
10. Thorpe R, Brasher M, Tarelli E, Dilger P, Page M. Análisis de laboratorio de los preparados de inmunoglobulinas intravenosas. En: Aplicaciones clínicas del tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. Yap PL, ed. J.R. Prous Barcelona, 1993;239-48.
11. Perry RI. Application for a product licence under the EC Extension Directives for Human IGIV administration. Edinburgh: Scottish National Blood Transfusion Service; 1992:208.
12. Mc Cue J, Hein R, Tenold R. Three generations of IgG preparations of clinical use. Rev Infect Dis. 1986; (8):374-81.
13. Uemura Y. Dissociation of aggregated IgG and denaturation of monomeric IgG by acid treatment. Tohoku J. Exp. Med. 1983;141:337-49.
14. Means G, Chang M. Non-enzimatic glycosydation of proteins Structure and function changes. Diabetes. 1982; 31(suppl3):1-4.
15. Carpenter J, Crowe J. An infrared spectroscopic study of the interactions of carbohydrates with dried proteins. Biochemistry. 1989;28:3916-22.
16. Takahashi H. pH dependent conformation change of Bence Jones protein. J. Biochem 1970;67:795-99.
17. Macey M, Newland A. Eficacia de las inmunoglobulinas intravenosas en las citopenias. En: Aplicaciones clínicas del tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. Yap PL. Aplicaciones clínicas del tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. Barcelona: Editorial J.R. Prous S.A. 1993;87.
18. Hammarstom L, Lundkvist I, Pettersson A, Edvart S. Eficacia de las inmunoglobulinas intravenosas en las enfermedades inmunológicas. En: Yap PL, Aplicaciones clínicas del tratamiento con inmunoglobulinas intravenosas. Barcelona: Editorial J.R. Prous S.A. 1993;87.
19. Uemura Y, Katuhiro U, Takechi K, et al., inventores;The Green Cross Corporation, titular.Method of producing immunoglobulins preparations for intravenous injection. European Patent Applications 0 246579. A2, Japón,1987.
20. Yukata H, Takechi K, Uemura Y. Gammaglobulin injectable solutions. European Patent Applications 0 278422 A2,Japón,1988.
]]>21. Hamamoto Y, Harada S, Naoki Y, Uemura Y, Takashi G, Tadakazu S. Elimination of viruses from an intravenous immunoglobulins preparation. Vox Sang. 1987;53:65-9.
22. Uemura Y, Joy Y, Heldebrant Ch, Takechi K, Kazumasa Y. Inactivation and elimination of viruses during preparation of human intravenou immunoglobulin. Vox Sang. 1994;(67):246-54.
]]>