0,98), exacto (Fexp.< Ftab. y texp. < ttab.), preciso (CV<3 %), sensible (LD = 1 ug/mL y LC = 3.3 ug/mL) y específico (respuesta no significativa), por lo cual es confiable. La determinación de ribosa es una técnica colorimétrica que cuantifica pentosas y se emplea con el objetivo de conocer el contenido exacto de la misma en una muestra de producto purificado. Además es empleada como control final según la OMS en las vacunas conjugadas de Haemophilus influenzae.]]>
0,98), exactness (Fexp.
Validación de una técnica colorimétrica para la determinación de carbohidratos.
Validation of a colorimetric technique for carbohydrate determination.
Carmen Soto, Maribel Cuello, Yusimí Alfonso, Osmir Cabrera y Gustavo Sierra.
Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. Ciudad de La Habana, Cuba. ]]> E-mail: csoto@finlay.edu.cu
RESUMEN
La adecuada estandarización de un ensayo analítico, seguido de la validación del método y la homogeneidad de los reactivos químicos y biológicos a lo largo de los diferentes estudios, son elementos imprescindibles para alcanzar óptimos resultados. En este trabajo se seleccionó una metodología para la validación del método analítico empleado en la determinación de ribosa por el método del orcinol y se utilizó una solución estándar de ribosa (0,025 mg/mL). Se realizó un análisis de los criterios fundamentales de validación: linealidad, precisión, exactitud, sensibilidad, especificidad, límites de detección y robustez. Se comprobó la utilidad de dicho procedimiento y se demostró mediante el diseño experimental y los procedimientos estadísticos empleados que dicho método es lineal (r2>0,98), exacto (Fexp.< Ftab. y texp. < ttab.), preciso (CV<3 %), sensible (LD = 1 ug/mL y LC = 3.3 ug/mL) y específico (respuesta no significativa), por lo cual es confiable. La determinación de ribosa es una técnica colorimétrica que cuantifica pentosas y se emplea con el objetivo de conocer el contenido exacto de la misma en una muestra de producto purificado. Además es empleada como control final según la OMS en las vacunas conjugadas de Haemophilus influenzae.
Palabras claves: Orcinol, ribosa, validación, Haemophilus influenzae.
Abstract
The appropriate standardization of an analytical assay, followed by the validation of the method and the
homogeneity of the chemical and biological reagents used during the different studies are indispensable elements for obtaining optimal results. In this work a methodology was selected for the validation of the analytical method used to determine ribose by the orcinol method using a standard ribose solution (0,025 mg/mL). An analysis of the main validation criteria: linearity, precision, accuracy, sensitivity, specificity, detection limits and robustness were carried out. The usefulness of this procedure was demonstrated and by means of the experimental design and the statistical procedures used, the linearity (r2>0,98), exactness (Fexp. <Ftab. and texp. <ttab.), preciseness (CV<3%), sensitivity (LD = 1 ug/mL and LC = 3.3 ug/mL) and specificity (non significant answer) of the method were verified, for which reasons it is considered reliable. The determination of ribose is a colorimetric assay that quantifies pentoses and is used with the objective of knowing the exact pentose contents in a sample of purified product. It is also used as a final control for Haemophilus influenzae conjugated vaccines according to WHO.
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BIBLIOGRAFIA
1. Levine OS, Granoff D, Lagos R, Fritzell B, Levine MM. Factors associated with a superior antibody response to a single dose of Haemophilus influenzae type b-tetanus toxoid conjugate vaccine administered to Chilean infants at 2 months of age Vaccine 1997;15:325-328.
2. Anderson EC, Begg SC, Crawshaw SC, Hargreaves RM, Howard RM, Slack MPE. Epidemiology of invasive Haemophilus influenzae infections in England and Wales in the prevacination (1992-1994). Epidemiol Infect 1995;115:89-100.
3. Phillip P, Ronald WE. Biological Activity of Conjugate. Suplement 9;1991.
4. Slack MPE. Invasive Haemophilus influenzae disease: the impact of Hib immunisation. J med. Microbilo 1995;42:75-77.
5. Fernández, A. Rosales, I. Validación de Métodos Analíticos. Segundo taller Nacional de Validación (Notas del curso). 1999.
6. WHO. Proposed Draft Requirements for Haemophilus influenzae type b.1990;46:9-15.
7. Chaloner-Larsson G, Anderson R, Egan A. A WHO guide to good manufacturing practice (GMP) requirements. Part 2: Validation. Validation of analytical assays. WHO Geneva 1997:65-95.
8. Gordon LK, inventors. Polysaccharide exotoxoid conjugate vaccine. US Patent. 4,619,828. 1986.
9. Rampazoo P. Standarisation and Validation of Analytical Methods in the Pharmaceutical Industry. II Fármaco 1990;45:807-15.
10. Kriskern PJ, Hagopian JA, and Carlos DJ, inventors. Meningitis vaccine. US Patent. 430,708. 1980.
11. Calpena AC, Escribano E, Fernández C. Validación de los métodos analíticos. Farm Clin 1991;7(9):749-58.
12. Thielmann K. Principios de metodología en bioquímica clínica. ed. Organismos: Instituto Cubano del Libro, 1973
13. Ochoa RA, Martínez, J.C; Estrada, E et al. Principios y procedimientos para la validación de inmunoensayos cuantitativos empleados para evaluar la inmunogenicidad de vacunas. VacciMonitor 1999;8(10):9-13.
14. Green, M. A practical guide to analytical method validation. Analytical Chemestry 1996; 68: 305A-309A
15. Aguilar G, Alcántara A, Chárvel A, García JL, Garzón A, Guerrero ME, et al. Validación de métodos analíticos. Comité de Elaboración de Guías Oficiales de Validación de la Dirección General de Control de Insumos para la Salud, SSA. Colegio Nacional de Químicos Farmacéuticos Biológicos. México AC, 1992.
16. Castro M, Gascón S, Pujol M, Sans JM, Vicente L. Validación de métodos analíticos. Asociación Española de Farmacéuticos de la Industria. Monografía AEFI. Sección Catalana. Comisión de Normas de Buena Fabricación y Control de la Calidad. Edición Hewlett Packard, 1989.
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